01 第一章 发酵工程总论.ppt

第1页：发酵工程封面

本页为《发酵工程》课程封面，标注中文课程名与英文名称 Fermentation Engineering。

第2页：发酵工程的概念与发展

• 发酵已从简单的酒精饮料、醋酸与面包生产，发展成生物工程的重要分支
• 涵盖微生物学、化学工程、基因工程、细胞工程、机械工程与计算机软硬件工程
• 现代发酵工程可生产胰岛素、干扰素、生长激素、抗生素与疫苗等医疗保健药物
• 还可生产天然杀虫剂、细菌肥料与微生物除草剂等农用生产资料
• 在化学工业生产氨基酸、香料、生物高分子、酶、维生素与单细胞蛋白

第3页：发酵工程的三大组成

广义上讲，发酵工程由三部分组成：上游工程（UPSTREAM PROCESSES）、发酵工程（FERMENTATION，含过程控制 Process Control）与下游工程（DOWNSTREAM PROCESSES）。

第4页：上游工程的内容

• genetics, cell：遗传与细胞育种
• inoculum development：种子培养
• media formulation：培养基配制
• sterilization：灭菌
• inoculation：接种

第5页：下游工程与回收成本比

• product extraction, purification and assay：产物提取、纯化与检测
• waste treatment：废物处理
• by product recovery：副产物回收
• L-天冬酰胺酶的回收成本与发酵成本之比为 3.0，乙醇为 0.16

第6页：发酵工程的工艺技术要点

• (1) 有严格的无菌生长环境：发酵前采用高温高压对发酵原料、发酵罐及连接管道灭菌，发酵中不断通入干燥无菌空气（空气过滤技术）
• (2) 在发酵过程中根据细胞生长要求控制加料速度的计算机控制技术
• (3) 种子培养和生产培养采用不同的工艺技术

第7页：发酵工程的放大问题

• (4) 在进行任何大规模工业发酵前，必须在实验室规模的小发酵罐进行大量实验，得到产物形成的动力学模型，据此设计中试的发酵要求，最后由中试数据设计更大规模生产的动力学模型
• (5) 由于生物反应的复杂性，从实验室到中试、从中试到大规模生产过程会出现许多问题，这就是发酵工程的工艺放大问题

第8页：巴斯德的发酵理论

• 1857 年法国化学家、微生物学家巴斯德提出著名的发酵理论：一切发酵过程都是微生物作用的结果
• 巴斯德认为，酿酒是发酵，是微生物在起作用；酒变质也是发酵，是另一类微生物在作祟
• 可以用加热处理等方法杀死有害微生物，防止酒发生质变
• 也可以把发酵的微生物分离出来，通过人工培养，诱发各种类型的发酵，获得所需的发酵产品

第9页：微生物的三大特点

• 发酵工程所利用的微生物主要是细菌、放线菌、酵母菌和霉菌
• (1) 对周围环境的温度、压强、渗透压、酸碱度等条件有极大的适应能力
• (2) 有极强的消化能力
• (3) 有极强的繁殖能力

第10页：微生物的益处与危害

• Positive（益处）：Biomass 生物量、Production 生产、Conversion 转化
• Negative（危害）：Pathogens 病原菌、Spoilage 腐败

第11页：发酵的三种定义

• 1、传统发酵
• 2、生化和生理学意义的发酵
• 3、工业上的发酵

第12页：传统发酵

最初，发酵是用来描述酵母菌作用于果汁或麦芽汁产生气泡的现象，或者是指酒的生产过程。

第13页：生化和生理学意义的发酵

• 指微生物在无氧条件下，分解各种有机物质产生能量的一种方式
• 更严格地说，发酵是以有机物作为电子受体的氧化还原产能反应
• 如葡萄糖在无氧条件下被微生物利用产生酒精并放出 CO₂

第14页：工业上的发酵

• 泛指利用微生物制造或生产某些产品的过程
• 厌氧培养的生产过程，如酒精、乳酸等
• 通气（有氧）培养的生产过程，如抗生素、氨基酸、酶制剂等
• 产品有细胞代谢产物，也包括菌体细胞、酶等

第15页：发酵工业的定义

发酵工业是指利用生物的生命活动产生的酶，对无机或有机原料进行酶加工，获得产品的工业。

第16页：获得发酵产品的条件

• 适宜的微生物
• 保证或控制微生物进行代谢的各种条件
• 进行微生物发酵的设备
• 精制成产品的方法的设备

第17页：发酵工业的发展历史

• 天然发酵阶段
• 纯培养技术的建立：巴斯德、科赫等，人为地控制微生物的发酵进程
• 通气搅拌发酵技术的建立：青霉素的生产——深层培养
• 代谢控制发酵技术：微生物进行甾体化合物的转化，谷氨酸和赖氨酸发酵生产

第18页：开拓发酵原料与基因工程阶段

• 开拓发酵原料时期：石油发酵，醋酸生产谷氨酸
• 基因工程阶段：采用酶学方法，将不同来源的 DNA 进行体外重组，再转入受体细胞内繁殖和遗传
• 人们可以将微生物以外的基因导入微生物细胞，定向改变生物性状与功能、创新物种
• 使发酵工业能够生产出自然界微生物所不能合成的产物

第19页：应用微生物学史（早期）

• Ancient times：food preservation 食品保藏（醋、奶酪）
• flavour 调味（面包、酱油）
• brewing 酿造（啤酒、葡萄酒）
• 1861 Louis Pasteur：first phase industrial biotechnology 工业生物技术第一阶段
• 1940 penicillin (Fleming)：antibiotic industry 抗生素工业，production of fine chemicals 精细化学品生产

第20页：应用微生物学史（重组DNA时代）

• 1973 rec DNA technology (Boyer 与 Cohen)：重组 DNA 技术
• 1982 rec human insulin（胰岛素）：进入 post recombinant DNA area 后重组 DNA 时代
• since 1982 rec therapeutic agents（治疗剂）
• 1990 rec bakers yeast（面包酵母）
• 1992 rec chymosine（凝乳酶，来自酵母）

第21页：发酵工业的五大范围

• 1、以微生物细胞为产物的发酵工业
• 2、以微生物代谢产物为产品的发酵工业
• 3、以微生物酶为产品的发酵工业
• 4、生物转化或修饰化合物的发酵工业
• 5、微生物废水处理和其他

第22页：微生物产物的种类

• 微生物细胞
• 酶
• 药物活性物质
• 特殊化学物质
• 食品添加剂

第23页：生产微生物细胞物质

定义

是以获得具有多种用途的微生物菌体细胞为目的产品的发酵工业，包括单细胞的酵母和藻类、担子菌，生物防治的苏云金杆菌以及人、畜防治疾病用的疫苗等

特点

细胞的生长与产物积累成平行关系，生长速率最大时期也是产物合成速率最高阶段，生长稳定期产量最高

第24页：微生物酶发酵

酶的特点

易于工业化生产，便于改善工艺提高产量

分类

胞内酶和胞外酶

生物合成特点

需要诱导作用，或遭受阻遏、抑制等调控作用的影响，在菌种选育、培养基配制以及发酵条件等方面需给予注意

第25页：微生物代谢产物发酵

• 包括初级代谢产物、中间代谢产物和次级代谢产物
• 对数生长期形成的产物是细胞自身生长所必需的，称为初级代谢产物或中间代谢产物
• 各种次级代谢产物都是在微生物生长缓慢或停止生长时期即稳定期所产生的，来自于中间代谢产物和初级代谢产物

第26页：微生物的生物转化

定义

是利用生物细胞对一些化合物某一特定部位（基团）的作用，使它转变成结构相类似但更具经济价值的化合物

最终产物

由微生物细胞的酶或酶系对底物某一特定部位进行化学反应而形成

第27页：微生物特殊机能的利用

• 利用微生物消除环境污染
• 利用微生物发酵保持生态平衡
• 微生物湿法冶金
• 利用基因工程菌株开拓发酵工程新领域

第28页：发酵工业的产品领域

• 发酵食品 Fermented Foods
• 有机酸 Organic Acids
• 氨基酸 Amino Acids
• 核酸类物质 Nucleotides
• 酶制剂 Enzymes
• 医药工业（抗生素等）Pharmaceutical (Antibiotics…)
• 饲料工业（单细胞蛋白）Feedstuff (eg. SCP)
• 环境工程（废物处理）Environmental Application (Waste Treatment)
• 其它（如冶金工业）Others (eg. Metallurgical industry)

第29页：发酵工业的五大特征环节

• 发酵过程中离不开微生物的作用
• 1、发酵原料的选择及预处理
• 2、微生物菌种的选育及扩大培养
• 3、发酵设备选择及工艺条件控制：常温、常压，种子扩大培养和发酵采用不同的工艺
• 4、发酵产物的分离提取
• 5、发酵废物的回收和利用

第30页：发酵原料与菌种因素

• (1) 发酵所用的原料通常以淀粉、糖蜜或其他农副产品为主，只要加入少量的有机和无机氮源就可进行反应，也可以利用废水和废物等作为发酵原料
• (2) 微生物菌种是进行发酵的根本因素，通过变异和菌种选育，可以获得高产的优良菌株并使生产设备得到充分利用，也可以获得按常规方法难以生产的产品

第31页：发酵反应的安全与专一性

• (3) 发酵过程一般来说都是在常温常压下进行的生物化学反应，反应安全，要求条件简单
• (4) 发酵对杂菌污染的防治至关重要，反应必须在无菌条件下进行
• (5) 由于生物体本身所具有的反应机制，能够专一地和高度选择性地对某些较为复杂的化合物进行特定部位的氧化、还原等化学转化反应，也可以产生比较复杂的高分子化合物

第32页：发酵的自动调节与经济性

• (6) 发酵过程是通过生物体的自动调节方式来完成的，反应的专一性强，因而可以得到较为单一的代谢产物
• (7) 工业发酵与其他工业相比，投资少，见效快，并可以取得较显著的经济效益
• (8) 除利用微生物外，还可以用动植物细胞和酶，也可以用人工构建的遗传工程菌进行反应

第33页：发酵方法的类别

• 类别：根据对氧的需要区分，厌氧发酵和有氧发酵
• 根据培养基物理性状区分，液体发酵和固体发酵
• 根据微生物生长特性区分，分批发酵和连续发酵

第34页：发酵的工艺流程

• 空气 → 空气净化处理
• 保藏菌种 → 斜面活化 → 扩大培养 → 种子罐 → 主发酵
• 碳源、氮源、无机盐等营养物质 → 灭菌
• 主发酵产物 → 产物分离纯化 → 成品

第35页：工业发酵的六个步骤

• (1) 用作培养菌种及扩大生产的发酵罐的培养基的配制
• (2) 培养基、发酵罐以及辅助设备的消毒灭菌
• (3) 将已培养好的有活性的纯菌株以一定量转接到发酵罐中
• (4) 将接种到发酵罐中的菌株控制在最适条件下生长并形成代谢产物
• (5) 将产物抽提并进行精制，以得到合格的产品
• (6) 回收或处理发酵过程中产生的废物和废水

第36页：菌种筛选与发酵试验

菌种筛选 → 摇瓶试验 → 发酵罐试验，逐级放大以考察菌种的生产性能。

第37页：发酵原料的预处理

• 原料不同处理方法也有所差异
• 1. 淀粉——利用前需变成糊精或葡萄糖，方法有酸水解（高压、耐酸）与酶水解法
• 2. 糖蜜——加热杀菌和用水冲稀，也可加酸处理后再补充无机盐
• 3. 碳氢化合物：石油脱蜡——一定馏分的石油经冷却脱蜡而获得凝固点在 -10℃ 的油，加入适量无机盐进行接种发酵

第38页：菌种斜面培养

菌种

已有的优良生产菌种和选育的新菌种

方法

一般都是由保存于冷冻管及砂土管或冰箱中的斜面菌种开始，在正式使用前要先转接到新鲜斜面培养基上活化后，再用于种子扩大培养

第39页：种子扩大培养

• 扩大培养的方法可以根据需要采用固体培养或液体培养两级不同方式
• 固体种子扩大培养一般采用传统的制曲工艺，一般先用克氏瓶或匣子瓶进行扩大，再转接到曲盘扩大培养
• 需氧微生物：将克氏瓶表面培养的菌种接到装有液体培养基的三角瓶中，在摇床上振荡培养
• 厌氧微生物：将有菌种的试管斜面或克氏瓶转接到三角瓶液体培养基中静置培养

第40页：微生物发酵和控制

• 发酵方式可分为固体发酵和液体发酵两种
• 固体发酵：适合于传统发酵工艺及乡镇企业用来生产比较简单的产品
• 液体深层发酵：适合于大规模工业化生产
• 影响发酵的因素很多，如温度、pH、通风、搅拌、罐压力等，必须适当地控制影响发酵的各种条件，掌握发酵的动态，并进行杂菌的检查和产物测定

第41页：发酵产物的分离提取

• 利用菌体：离心沉淀或板框压滤法使菌体与醪液分开，也可以用喷雾干燥法直接做成粉剂
• 酒精——发酵醪蒸馏塔蒸馏
• 抗菌素及有机酸——根据产物的不同特性，采用离子交换树脂吸附处理、脱色过滤、减压浓缩等方法提取精制
• 获得的产物都要按照有关部门制定的国家标准进行质量检验和性能测定，符合要求后才为合格产品

第42页：发酵工业的意义与展望

• 利用遗传工程等先进技术，人工选育和改良菌种
• 采用发酵技术进行高等动植物细胞培养
• 固定化技术广泛应用
• 开发和采用大型节能高效的发酵装置，自动控制将成为发酵生产控制的主要手段
• 应用代谢控制技术，发酵生产氨基酸
• 将生物技术更广泛地用于环境工程