05 第四章 人工授精.ppt

第1页：第四章人工授精封面

第四章 人工授精

第2页：第一节概述

第一节 概述

第3页：人工授精的概念

概念

人工授精

利用器械采集雄性动物的精液，经检查和处理后，再用器械将精液输入到发情雌性动物生殖道内，以代替自然交配而繁殖后代的一种技术。

第4页：人工授精的发展概况

一、人工授精的发展概况

• 试验阶段：1780年，意大利生理学家Spallanzani第一次成功地用狗进行人工授精试验
• 实用阶段：上世纪40—60年代，人工授精蓬勃发展，成为繁殖改良家畜的重要手段，以乳牛普及率最高、发展最快
• 冷冻精液阶段：50年代英国的Smith和Polge等人推动冷冻精液技术的应用

第5页：人工授精的优越性

二、人工授精的优越性

• 提高了优良种公畜的配种效能和种用价值
• 加速家畜品种改良，促进育种工作
• 降低了饲养管理费用
• 防止各种疾病，特别是生殖道传染病的传播
• 有利于提高母畜的受胎率
• 可以进行精液的长期保存
• 为开展科学研究提供了有效手段

第6页：人工授精的限制

三、人工授精的限制

• 可能使不良公畜的影响范围更大
• 必须投入一定资金进行房舍建设和设备购置
• 必须进行人员技术培训，不良操作会造成更严重的问题

第7页：第二节采精

第二节 采精

第8页：生殖激素与人工授精复习提问

上次课问题

• 前列腺素F有哪些功能，在动物繁殖的哪些方面应用
• 前列腺素F进行母畜同期发情的原理是什么
• 人工授精的概念是什么，主要优越性是什么

第9页：采精的基本要求

采精的基本要求

安全

对种公畜、对人员必须确保安全。

洁净

采集的精液不能受到任何生物和化学污染。

全部

能够采集到种公畜全部的精液。

简单

设备用品简单，拆卸方便，操作方便。

第10页：一、采精前的准备

一、采精前的准备

第11页：（一）采精场地

（一）采精场地

采精要有一定的采精环境，以便雄性动物建立巩固的条件反射，同时防止精液污染。场地应宽敞、平坦、安静、清洁，场内设采精架以保定台畜，或设假台畜供公畜爬跨采精；采精场应与人工授精操作室和公畜舍相连。室内采精场面积一般为10×10平方米。

第12页：（二）台畜的准备

（二）台畜的准备

真台畜

使用与公畜同种的母畜、阉畜或另一头种公畜作台畜，应健康、体壮、大小适中、性情温顺；选发情母畜较理想，经训练的公、母畜也可作台畜。

假台畜

即采精台，模仿母畜体型高低大小，用金属材料或木料做成具有一定支撑力的支架。

第13页：调教种公畜爬跨假台畜

（三）调教种公畜爬跨假台畜

• 在假台畜后躯涂抹发情母畜的阴道粘液或尿液，公畜受刺激引起性兴奋并爬跨假台畜，经几次采精即可调教成功

第14页：公畜调教的注意事项

公畜调教时应注意的事项

• 反复训练、耐心诱导，切勿强迫、恐吓、抽打，防止性抑制
• 注意公畜外生殖器的清洁卫生
• 最好选择早上调教，此时精力充沛、性欲旺盛
• 调教时间、地点要固定，每次调教时间不宜过长

第15页：器械的准备与消毒

（三）器械准备

采精所需器械要事先准备好，力求清洁无菌，使用前严格消毒，每次使用后必须洗刷干净。

第16页：种公畜的清洁与诱情

（四）种公畜的准备

包括体表的清洁消毒和诱情（性准备）两个方面，与精液的质量和数量密切相关。采精前应擦拭公畜下腹部，用0.1%高锰酸钾溶液等洗净包皮外并抹干，挤出包皮腔内积尿和其他残留物并抹干。

第17页：二、采精技术

二、采精技术

第18页：采精方法的种类

采精方法

第19页：（一）假阴道法

（一）假阴道法

原理

模拟发情母畜阴道环境条件的人工阴道，诱导公畜射精而采集精液。

1．假阴道的结构：为一筒状结构，主要由外壳、内胎、集精杯及附件组成。外壳为圆筒，由轻质铁皮或硬塑料制成；内胎为弹性强、薄而柔软无毒的橡胶。

第20页：假阴道的结构组成

第21页：假阴道的准备

2．假阴道的准备：假阴道应具备五个条件

• 适宜温度：采精时内腔温度保持在38—40℃，集精杯保持34—35℃
• 适当压力：借助注入水和空气调节假阴道的压力
• 适当润滑度：润滑剂涂抹于假阴道前段到外口周围，涂布不宜过多

第22页：牛羊假阴道的安装状态

牛羊假阴道安装充气后的状态

第23页：牛的假阴道法采精

牛的假阴道法采精

第24页：（二）手握法

（二）手握法

适用于猪的采精，是目前广泛使用的方法。操作时采精员戴灭菌胶手套，蹲在假台畜左侧；待公猪爬跨台畜、阴茎从包皮内开始伸出时，立即紧握龟头，待其抽送片刻后锁定龟头；待阴茎充分勃起时顺势牵引向前，即可导致公猪射精。

第25页：猪的拳握法采精

猪的拳握法采精

第26页：（三）电刺激法

（三）电刺激法

原理

通过电流刺激公畜引起射精而采集精液，适用于各种动物。

器械

电刺激采精器由电子控制器和电极探棒两部分组成。

操作时将公畜以站立或侧卧姿势保定，剪去包皮及其周围被毛，并用生理盐水冲洗。

第27页：三、采精频率

三、采精频率

采精频率

每周对雄性动物的采精次数；既要最大限度采集精液，又要维持其健康体况和正常生殖机能。

第28页：第三节精液品质检查

第三节 精液品质检查

第29页：检查内容目录

目录

• 一、目的
• 二、项目
• 三、方法

第30页：一、检查的目的

一、检查的目的

• 检查种公畜的配种能力
• 发现公畜的繁殖问题
• 确定精液可稀释的倍数
• 检查精液的处理方法是否正确
• 检查精液产品的质量

第31页：二、检查的项目

二、检查的项目

• （一）直观项目
• （二）微观项目

第32页：直观检查项目

（一）直观检查项目

• 射精量
• 色泽
• 气味
• 云雾状
• pH值
• 美兰退色试验

第33页：微观检查项目

（二）微观检查项目

• 精子活力估测
• 精子活力计数
• 密度测定：计数板计数、比色计测定
• 畸形率：形态畸形率、顶体畸形率

第34页：三、主要项目检查方法

三、主要项目检查方法

• （一）直观项目检查
• （二）微观项目检查

第35页：直观项目检查目录

（一）直观项目检查

• 1．射精量
• 2．色泽
• 3．气味
• 4．云雾状

第36页：射精量的检查提纲

1．射精量

• （1）射精量的测定方法
• （2）公畜的正常射精量
• （3）采精量不正常的原因

第37页：射精量的测定方法

（1）射精量的测定方法

概念

射精量是指每次射精的体积。

测定

以连续3次以上正常采集到的精液的平均值代表。

测定方法

可用刻度试管或量筒等体积测量容器，也可用电子秤称重近似代表体积。

第38页：公畜的正常射精量

（2）公畜的正常射精量

影响射精量的因素：种类、睾丸大小质地、季节、健康状况。

第39页：射精量的畜种差异

不同畜种的射精量比较

第40页：射精量不正常的原因

（3）射精量不正常的原因

第41页：2．色泽

2．色泽

色泽

精液的颜色及其浓厚程度，在一定程度上反映精液是否正常、精子浓度高低。

正常精液

猪：浅灰白至白色；牛、羊：乳白色或乳黄色。

第42页：异常精液的色泽分析

不正常精液原因分析

正常精液特征由浓到稀依次为：乳黄—乳白—白色—灰白。

第43页：3．气味

3．气味

正常精液

没有很浓的气味，或略带动物特有的腥膻味。

腥味

有脓液。

臊味

有尿液或包皮液。

第44页：4．云雾状

4．云雾状

云雾状

新鲜精液在33—35℃温度下，精子成群运动所产生的上下翻卷现象；其明显程度代表高浓度精液中精子活力的高低。

第45页：云雾状分级标准

云雾状分级标准

第46页：微观项目检查目录

（二）微观项目检查

• 1．活力估测
• 2．密度测定
• 3．畸形率测定

第47页：1．活力的估测

1．活力的估测

概念

37℃下精液中前进运动精子占总精子数的百分率。

主要测定方法

估测法。

第48页：活力测定的稀释用品

活力测定时精液的稀释用品

第49页：牛精子活力检查的程序

例：牛精子活力检查的程序

1. 载玻片预温：将恒温加热板放在载物台上，打开电源调至37℃，放上载玻片
2. 精液稀释：生理盐水与精液等温后按1∶10稀释
3. 取样：取10μl置于预温载玻片中间，盖上盖玻片
4. 检查：用100倍和400倍观察
5. 活力估测：判断视野中前进运动精子所占百分率
6. 活力记录：按10级制评分和记录

第50页：2．精子的密度检查

2．精子的密度检查

第51页：密度的概念及表示方法

（1）密度的概念及表示方法

密度

单位体积精液中所含的精子数。

表示方法

个/ml或亿/ml。

第52页：各种家畜的精子密度

（2）各种家畜精液的精子密度

第53页：精子密度的畜种比较

各种家畜精子密度比较

第54页：精子密度的测定方法

（4）精子密度的测定方法

• 精子密度计数板（器）简介
• 精液的稀释
• 精液注入计数室
• 精子计数
• 精子密度计算

第55页：精子密度计数板的结构

精子密度计数板（器）简介

计数室

长宽各1mm，面积1mm²，高度0.1mm，体积0.1mm³。

分格

由双线或三线组成25个（5×5）中方格，每个中方格内有16个（4×4）小方格，共计400个小方格。

第56页：密度测定的复习提问

上节问题

• 什么叫云雾状，云雾状代表什么，什么家畜的精液有云雾状
• 什么叫精子活力，精子活力测定的主要方法是什么
• 描述血球计数板，密度测定时如何防止重复计数

第57页：精子计数室与中方格

精子计数室及一个中方格

第58页：密度测定的精液稀释

密度测定之精液稀释

• 将精液注入计数室前必须稀释，以便于计数；稀释比例根据动物精液的密度范围确定
• 用5—25μl和100—1000μl移液器在小试管中组合稀释，如牛精液稀释100倍为5μl原精＋500μl稀释液
• 稀释液为3%氯化钠溶液，用以杀死精子，便于计数

第59页：各畜种的稀释比例

注入计数室前各种家畜精液建议稀释比例

第60页：精液注入计数室

精液注入计数室

1. 将洁净的计数板放在载物台上固定好，盖上干净的盖玻片
2. 取25μl稀释后的精液，将吸咀放于盖玻片与计数板的接缝处
3. 缓慢注入精液，使精液依靠毛细作用吸入计数室

第61页：注入计数室的注意事项

注意

• 让稀释后的精液通过毛细作用自行吸入
• 计数板上共有两个对称的计数室

第62页：用移液器注入精液

用移液器注入精液

第63页：精子计数

精子计数

• 将计数板固定在显微镜推进器内，用100倍放大找到计数室，再用400倍找到第一个中方格
• 计数五个中方格的总精子数，以精子头部为准，格线上的精子按数上不数下、数左不数右的原则计数

第64页：计数中方格的选取

进行精子计数的中方格数可以是四角一中心共5个中方格，也可以是从左角到右下角五个中方格。

第65页：格线上精子的计数原则

以图示次序计数，以精子头部为准，依数上不数下、数左不数右的原则计数格线上的精子；白色精子不计数。

第66页：精子密度的计算公式

计算精子密度

精子密度＝5个中方格总精子数×5×10×1000×稀释倍数

第67页：牛精子密度测定程序

例：牛精子密度测定程序

1. 放计数板于载物台上，计数板和盖玻片一定要清洁
2. 取500μl 3%氯化钠于小试管中，加入5μl原精液，混合均匀
3. 取25μl小心地从计数板与盖玻片接缝中加入，使其自行吸入计数室
4. 用100倍和400倍观察计数五个中方格的总精子数，以头部为准，格线上的数上不数下、数左不数右
5. 精子密度＝5个中方格总精子数×5×10×1000×100

第68页：（四）畸形率检查

（四）畸形率检查

第69页：1、染色剂

1、染色剂

• 0.5克龙胆紫用20ml酒精助溶，加水至100ml，过滤至试剂瓶中备用
• 也可用美兰、纯兰或红墨水

第70页：2、精液的稀释

2、稀释

稀释液为0.9%NaCl：

第71页：3、抹片

3、抹片

左手食指和拇指向上捏住载玻片两端使其水平，取10μl稀释后的精液滴至载玻片右侧；右手拿一载玻片或盖玻片，与左手载玻片呈向右的45度角，接触面在精液滴左侧；将载玻片向右拉至精液刚好进入两片形成的角缝中，然后平稳地向左推至左边。抹片后自然风干。

第72页：4、固定

4、固定

在抹片上滴95%的酒精数滴，固定4分钟，甩去多余的酒精。

第73页：5、染色

5、染色

将载玻片放在玻璃棒制的片架上，滴上0.5%的龙胆紫或其它染色剂5—10滴，5分钟后用洗瓶或自来水轻轻冲去染色剂，甩去水分凉干。

第74页：6、畸形率的镜检计数

6、检查畸形率

将载玻片放在400或640倍显微镜下观察，共记录若干个视野、100—200个左右的精子。

第75页：畸形精子的镜检观察

第76页：7、畸形率种类

7、畸形率种类

• 头部：头部膨大、头部小于正常、双头、头部不完整
• 尾部：尾部折回、尾部卷曲、尾部套索、双尾、断尾
• 其它：有近端原生质小滴

第77页：畸形精子形态示例

第78页：染色涂片中的精子形态

第79页：畸形精子

畸形精子

第80页：视野中的畸形精子

视野中的畸形精子

第81页：双头和双尾精子

双头和双尾精子