10 第六章 人工受精2.2.ppt

第1页：稀释液的种类

三、稀释液的种类和配置（一）稀释液的种类1、现用稀释液奶类和等渗糖类为主。

• 2、常温保存稀释液用于常温保存精液，pH较低。
• 3、低温保存稀释液用于低温保存精液，含有卵黄和奶类等抗冷休克物质。
• 4、冷冻保存稀释液用于冷冻保存精液，含抗冻物质如甘油、DMSO。

第2页：稀释液的配制

（二）稀释液的配制1、各种成分的准备（1）蒸馏水：现制、灭菌

（2）化学药品

成分要纯净，溶解过滤后消毒，高温变性药品应用细菌滤膜过滤

（3）奶类

新鲜，不含其它物质。于（90~95℃）水浴10min，去除奶皮

（4）卵黄

取自新鲜鸡蛋，用前对蛋壳消毒。（5）抗生素、酶类、激素、维生素等：

第3页：精液稀释方法与稀释倍数

四、精液稀释方法与稀释倍数（一）精液稀释方法1、新采集的精液于30℃稀释，防止精子冷休克；

• 2、采精后及时检查、稀释，时间长后精子容易死亡
• 3、稀释液与精液温度应该一致
• 4、稀释时，将稀释液沿容器壁缓慢倒入精液，高倍稀释时分次进行
• 5、稀释后立即镜检活力，以确保操作正确。

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第5页：稀释倍数计算示例

如何精确计算一份精液的稀释倍数？首先要考虑以下几个因素：猪1、该份精液总量250ml2、精子密度2亿/ml3、有效精子数（保存后使用前精子活率）0.64、每次输入有效精子数10亿5、每次输精量20ml该份精液的有效精子数：250ml×2×0.6=300亿则分成的份数：300亿/10亿=30份则稀释后总量：30×

第6页：精液保存方式

现行的精液保存方式有三种：常温保存（15-25℃）低温保存（0-5℃）冷冻保存（-79℃或-196℃）第五节精液的保存Section 5 Semen Storage液态保存固态保存

第7页：常温保存

一、常温保存（15-25 ℃），变温保存1、原理：是利用一定范围的酸性环境，抑制精子的活动，使精子保持可逆的静止状态而不丧失受精能力。

• 2、稀释液：（1）能量物：如葡萄糖；（2）缓冲体系：如柠檬酸钠、碳酸氢钠；（3）抗生素：如青、链霉素等。
• 3、方法：隔水降温。

第8页：低温保存

二、低温保存（0-5 ℃）1、原理：利用较低的温度来减弱精子的活动和代谢，从而延长精子的生命。2、低温保存稀释液：除室温保存液应具有的成分外（不充CO2），在牛用的稀释液还需用加卵黄或牛奶。为何要添加？

第9页：低温保存前的处理

3、保存前的处理（1）稀释分装：低温保存的精液通常用玻璃或塑料瓶分装，瓶内尽量不留空气，然后封口

（2）降温处理

通常按0.2℃/min降至保存温度

（3）保存方法

牛羊精液置于0~5℃，猪精液须特殊改造的冰箱或用泡沫盒内放冰块，精液用一块泡沫垫在上面；（看后图）（4）低温保存精液的利用：

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第11页：冷冻保存的定义与意义

三、精液冷冻保存(-79 ℃或-196℃)定义：是利用液态氮（-196℃）或干冰（-79℃），作为冷源，将精子和精液冷冻成固体，并在液态氮或干冰中作超低温永久保存。意义（熟悉）：（１）提高优良种的配种效能；

（２）便于冷冻精液的自动化生产；（３）便于引种；（４）加快改良和育种；（５）推进繁殖新技术的应用；

第12页：冷冻保存原理

（一）精液冷冻保存原理目前关于精液冷冻的原理普遍倾向于玻璃化学说。原理：利用超低温使精液和精子快速冷冻，快速越过形成冰晶的温度范围（0-60℃）、精液或精子中的水分不形成冰晶，而是形成玻璃化。同时在抗冻剂的存在下使精子免受冻伤，在温度

第13页：结晶态与玻璃态

液态→固态结晶态

缓慢降温形成

水分子有序形成冰晶对精子有害

机械和渗透压损伤

玻璃态

快速降温形成。水分子无序形成玻璃样的超微粒结晶，对精子无害。（0～-60℃）（-15～-25℃）（-60～-250 ℃ ）玻璃化是可逆的，不稳定的，当缓慢升温时又可能形成冰晶化

第14页：冷冻时细胞的损伤

1、冷冻时细胞的损伤

• 冰晶：在0～-60℃低温区，缓慢降温条件下形成的，降温越慢，冰晶越大，-15～-25℃对精子危害最大。冰晶的形成对精子造成的机械损伤和渗透压损伤是引起精子死亡的主要物理因素。
• 玻璃化：在-60～-250℃超低温区，从冰晶化区域内开始，就快速降温，迅速越过冰晶化

第15页：冷冻保存稀释液

（二）精液冷冻保存稀释液除与精液低温保存液相同外，尚需用加抗冻剂。

• 1、牛用：主要有卵黄-柠檬酸钠-甘油液，卵黄-糖类-甘油液，奶类-甘油液等3种。甘油浓度以5%-7%为宜。
• 2、猪用：一般采用以葡萄糖、乳糖、蔗糖、甘油为主要成分的稀释液，甘油浓度以1%-3%为宜。

第16页：冷冻保存技术

（三）精液冷冻保存技术1、精液品质检查：活率0.8以上才能用于冷冻2、精液稀释：一次稀释：一次性将精液与稀释液和抗冻剂混合两次稀释：低温下加入含有甘油的另一半稀释液3、精液分装（目前多用细管分装）（1）颗粒精液（pellet semen）：约0.2ml一粒，似小黄豆大（2）细管精液（straw semen)：0.25ml和0.5ml（3

第17页：牛细管精液

牛细管精液

第18页：降温和平衡

4、降温和平衡（1）降温：指精液采出稀释后由30℃以上温度经1~2h缓慢降至5℃，以防低温打击。（2）平衡：指加含甘油稀释液对精子作用的时间。

• 平衡目的：使精子有一段适应低温的时间，使甘油充分渗透进入精子体内，达到渗透的活性物质平衡，产生抗冻作用。
• 一般将降温至5℃的精液于这一温度下平衡1-

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第20页：精液冻结方法

5、精液冻结（1）干冰埋藏法5 ℃平衡的精液置于干冰中，在其上再覆盖上干冰。（2）液氮熏蒸法于液氮平面以上1-3cm温度为-80~-100 ℃范围之处，进行精液的冷冻5~10min，然后倒入液氮即可。

目前有自动控制的精液冷冻仪，通过控制液氮的喷量，将精液或细管的温度下降（5~-

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第22页：解冻与检查

6、解冻与检查（1）解冻液（颗粒精液用）2.9％柠檬酸钠液或2.9％柠檬酸钠液与5%葡萄糖液各半混合。（2）解冻（thawing)

第23页：解冻后检查标准

（3）检查（1）颗粒精液解冻后取一小滴检查活力；（2）细管精液可推出一点检查活力，如平时都按常规操作亦可不检。我国规定牛冻精解后的活率在0.4，水牛在0.3以上才能用于AI。（4）解冻后的精液处理应尽快用于输精，不能长时间保存，更不能再次冷冻。

第24页：冷冻精液保存与运输

7、冷冻精液保存与运输（1）冻精保存合格的冻精，包装妥善并做好标记（站名、家畜品种、种畜号、冻精日期、剂型批号、精子活率、数量等），置入液氮罐内，保存过程中，温度恒定，精液品质不变，才能达到长期保存的目的。（2）冻精运输专人负责，用液氮容器盛装，

第25页：液氮罐结构

液氮罐结构1、内外壳体2、内槽3、夹层4、颈管5、罐盖塞6

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第27页：从液氮罐取冻精

从液氮罐取冻精

第28页：第六节输精

• 一、输精前的准备Preparations
• 二、输精的基本要求Requirements
• 三、输精方法Methods
• 四、影响人工授精受胎率的因素Factors influencing the fertility by AI第六节输精Section6 Insemination

第29页：输精前的准备

一、输精前的准备Preparations1、母畜的准备通常将母畜置于输精架内或用脚绊保定，母猪不需要保定，输精前要对阴户清洗干净。2、输精器材的准备输精用具一般在用前要彻底洗涤并消，输精管内壁用前经稀释液冲冼。

每头母畜使用一支输精管，不能相互共用。

第30页：精液与人员的准备

• 3、精液的准备新鲜采集的精液，必须检验合格才能使用，常温或低温保存的精液必须升高温度至35℃左右，镜检活率不低于0.6，冷冻精液解冻后镜检活率不低于0.3,才能使用。根据不同的畜种确定精液需要量后进行输精。
• 4、输精人员的准备主要是剪短并磨平指甲，用75%酒精消毒

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第33页：牛用输精器实物图

各种牛用输精器实物外观图

第34页：输精要求

二、输精要求Requirements

第35页：母牛输精方法

三、输精方法Methods（一）母牛和母水牛的输精方法1、开膣器输精法：目前已经不用2、直肠把握子宫颈输精法于直肠内隔直肠壁握住子宫颈外端，另一只手持输精导管插入阴门避开尿道口，插入子宫颈口进行子宫输精。

优点：（1）用具简单，操作安全，不易感染；（2）母牛无痛感；（3）输精部位深，受胎率较高；（4）可防止误给孕牛输精而引起流产。

第36页：牛输精方法与要求

第37页：牛直肠把握输精图

正确的牛直肠把握输精图

第38页：直肠检查

直肠检查

第39页：直肠把握子宫颈输精

直肠把握子宫颈输精

第40页：母猪输精方法

第41页：母猪输精器插入特点

由于母猪子宫颈与阴道联接处无明显的界限和皱折，输精时一般直接将输精器通过阴门插入阴道，避开尿道开口，进入子宫颈。

第42页：母猪自然交配与输精

母猪自然交配与输精

第43页：母猪输精示意图

母猪输精示意图

第44页：母猪发情检查

母猪发情检查

第45页：输精操作：擦拭外阴

输精操作—擦拭外阴部

第46页：输精操作：涂润滑剂

输精操作—在输精器上涂润滑剂

第47页：输精操作：插入阴道

输精操作—分开外阴将输精器前端向上呈45度角向左旋转插入母猪阴道内

第48页：输精过程

输精过程

第49页：影响受胎率的因素

四、影响人工授精受胎率的因素Factors influencing the fertility by AI1、精液品质2、母畜体况和繁殖机能3、适时输精4、技术水平