首页畜牧兽医畜牧学家畜繁殖学 19 第八章 配子与胚胎生物工程8.8.ppt

19 第八章 配子与胚胎生物工程8.8.ppt

页数:7页文件大小:4.97 MB来源: 家畜繁殖学ppt课件

本课件讲核移植方法中核供体细胞的准备,包括用链酶蛋白酶去透明带后分散卵裂球并优选16至32细胞期胚胎、体细胞胰酶消化传代3至8代、胚胎干细胞作核供体的优势,随后讲采用去核MII期卵母细胞作受体胞质及盲吸法、荧光引导去核法、离心去核法与化学试剂去核法。

核供体细胞准备页,讲用链酶蛋白酶去透明带后分散卵裂球并优选16~32细胞期胚胎
体细胞与胚胎干细胞核供体页,讲胰酶消化传代3~8代及ES细胞的数量优势
受体卵母细胞准备页,说明普遍采用去核MII期卵母细胞作受体胞质及常用去核法
查看本课件的文字版(共 7 页,供检索与复制)

第1页:核供体细胞的准备

(二)、细胞核移植的方法1、核供体细胞的准备胚胎细胞、体细胞、ES细胞1)、胚胎细胞作为核供体

  • 先用1%的链酶蛋白酶或pH2.5的台氏液去掉透明带,再用机械吹打或酶消化发使其分散为单个游离的卵裂球。
  • 一般选择16~32-细胞期或晚期桑椹的胚胎细胞较为合适。

第2页:体细胞与ES细胞作核供体

2)、体细胞作为核供体

  • 经0.25%胰蛋白酶+0.1%EDTA消化后,将细胞接种培养于DMEM。之后放入5%CO2培养箱中培养,待细胞长至70%~80%时进行传代。传代3~8代的细胞用于核移植。3)、胚胎干细胞作为核供体
  • ES细胞既具有胚胎细胞所不具备的数量

第3页:受体卵母细胞的准备

2、受体卵母细胞的准备

  • 大量实验表明,MII期卵母细胞适用于所有的供体核,目前基本上都采用去核的MII期卵母细胞作为受体胞质。
  • 受体卵母细胞在核移植前需要进行去核。
  • 目前常用的去核方法有如下几种:盲吸法,荧光引导去核法,微分干涉及极性显微镜去

第4页:盲吸法去核

1)、盲吸法:吸取极体附近的部分细胞质。PB1

第5页:

第6页:荧光引导去核法

2)、荧光引导去核法:用Hoechst 33342(2~8mg/ml)染色10~15min,然后,在荧光显微镜下确定核的位置。

第7页:离心与化学去核法

4)、离心去核法
根据细胞核的密度大于细胞质,用离心的方法可使没有透明带的卵母细胞核被甩向一侧而最后脱离卵母细胞
5)、化学试剂去核法
用化学试剂处理处于第一次减数分裂中期的小鼠卵母细胞,使染色体相互紧密结合,形成染色体复合体,在卵母细胞排出PB1时,
顶部目录