16 第八章 配子与胚胎生物工程5.5.ppt

第1页：胚胎的保存方法

（七）、胚胎的保存

• 1、异种活体保存
• 2、常温保存
• 3、低温保存
• 4、超低温保存

第2页：常规慢速冷冻

1）、常规的慢速冷冻•尽管低温生物学有了许多发展，但新的胚胎冷冻方法却很少用于生产实践。目前，大多数的哺乳动物胚胎采用传统的慢速冷冻方法冷冻保存，使用渗透较快的低温保护剂，缓慢的冷却速度和比较快的解冻速度。

传统的慢速冷冻方法分为以下几步：1）室温下胚胎置于小分子量可渗低温保护溶液中（如乙二醇、甘油、二甲基亚枫或丙二醇），且在胚胎和冷冻保护液之间达到平衡；2）一般在-5℃～-7℃

第3页：胚胎装管图

胚胎装管图

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第5页：玻璃化冷冻

2）、玻璃化冷冻•玻璃化冷冻定义为在冷冻液处于完全玻璃化状态下冷冻保存细胞，组织或器官（Rall，1985）。为在一定冷冻速度下形成玻璃化（直接投入液氮，-2500℃/分）。需要使用高浓度的可渗低温保护剂，然而，浓度过高会对细胞有毒害作用。

从理论上讲，如果要以-1500℃/分的速率进行降温，那么，1.5M的任何低温保护剂都可以形成玻璃化，但这需要昂贵而复杂的仪器。近几年，人们

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第7页：胚胎的解冻

3）、胚胎的解冻

• a、常规冷冻法的解冻方法
• b、玻璃化冷冻的解冻方法

第8页：胚胎的移植

（八）胚胎的移植：手术和非手术法1、手术法移植（各种家畜

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第10页：牛胚胎非手术移植示意图

2、牛胚胎非手术移植示意图

第11页：牛非手术移植步骤

• 1、受体牛在发情后6—8天之间均可进行移植（发情之时定为0小时）。移植前对受体牛进行直肠触摸，检查黄体是否合格。合格者用于移植。
• 2、在移植之前必须先进行尾椎硬膜外麻醉，擦拭外阴部。
• 3、对照供体牛采胚记录表和合格受体的发情记录，合理地搭配受体和胚胎。
• 4、解冻胚胎。
• 5、重新将胚胎装入0.25ml塑料细管（直接解冻移植法不需要重新装管）。
• 6、细管装入移植枪。
• 7、

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第13页：移植后的妊娠检查

• 1、在移植后70—90天对受体牛进行妊娠检查，对已妊娠的受体要加强饲养管理，避免应激反应。
• 2、妊娠受体在产前3个月要补充足量的维生素、微量元素，适当限制能量摄入，既要保证胎儿的正常发育，又要避免难产。
• 3、妊娠的受体牛的饲养管理

第14页：ET实际效果与影响因素

四、ET的实际效果和影响妊娠率的因素

• （一）、ET的实际效果1、胚胎来源1）排卵率2）回收率3）受精率2、胚胎冷冻和胚胎分割的应用
• （二）、影响妊娠率的因素1、胚胎因素2、母体因素3、其他因素

第15页：胚胎移植存在的问题

五、ET存在的主要问题1、胚胎来源有限2、缺乏熟练的技术人员3、胚胎冷冻技术不完善4、费用高、要求高5、手术法容易出现粘连的问题

第16页：胚胎移植的发展前景

六、胚胎移植的发展前景（以牛、羊为例）1、牛胚胎移植技术应用前景因为牛的经济价值高、单胎、繁殖周期长、常年发情，所以采用胚胎移植技术生产优质奶牛、肉牛，正适于当今国内奶牛、肉牛生产旺盛需求，其更具广阔发展空间和持续发展前景。2、羊胚胎移植技术应用前景相比之下，羊的经济价值不及牛，繁殖率较牛高，

第17页：精子获能研究历史

20世纪60年代初至20世纪80年代中期，人们以家兔、小鼠和大鼠等为实验材料，进行了大量基础研究，在精子获能机理和获能方法方面取得很大进展。精子由最初在同种或异种雌性生殖道孵育获能，发展到用子宫液、卵泡液、子宫内膜提取液或血清等在体外培养获能，最后用化学成分明确的溶液培养获能。

同时，通过射出精子和附睾精子