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本课件讲解原核微生物的主要特征与细菌的基本概念,依次说明球状、杆状、螺旋状三类基本形态及大小测定,重点剖析细胞壁、细胞膜、细胞质、拟核与荚膜、芽孢、鞭毛等构造,并介绍二分裂繁殖与固体、液体培养基上的培养特征。
第一章原核生物
原核生物(Prokaryotes).细菌.放线菌.古细菌.立克次氏体.支原体.衣原体.蓝细菌原核微生物的主要特征:
第一节细菌
光镜暗视野荧光透射电镜超薄切片冷冻切片扫描电镜DNA蛋白质复合物
一、细菌的概念是一类细胞细短(直径约0.5μm,长度约0.5~5μm)、结构简单、胞壁坚韧、多以二分裂方式繁殖和水生性较强的原核生物。
二、细菌的基本形态与大小1细菌的基本形态微生物的概念球状杆状螺旋状
球状菌有单球菌(尿素微球菌)、双球菌(肺炎双球菌)、链球菌(乳链球菌)、四联球菌(四联微球菌)八叠球菌(藤黄八叠球菌)和葡萄球菌(金黄色葡萄球菌)
杆菌单杆菌双杆菌链杆菌微生物的概念短杆菌长杆菌梭状杆菌
螺旋菌弧菌螺旋菌螺旋体微生物的概念小于1圈小于6圈大于6圈
细菌的异常形态当培养基的化学组成、浓度、培养温度、pH和培养时间等发生变化时,会引起微生物的形态的改变。
2、细菌的大小
常见微生物的大小:下表列出相关数据。
| 菌名 | 直径或宽×长(μm×μm) |
|---|---|
| 乳链球菌 | 0.5~1 |
| 金黄色葡萄球菌 | 0.8~1 |
| 大肠杆菌 | 0.5×(1~3) |
| 枯草芽孢杆菌 | (0.8~1.2)×(1.2~3) |
| 霍乱弧菌 | (0.2~0.6)×(1~3) |
三、结构基本结构细胞壁;细胞膜;细胞质;核区;特殊结构鞭毛spore;纤毛pilus;荚膜capsule芽孢flagella;
细菌细胞的结构模式图
1、细胞壁
•成分:植物细胞壁的主要成分是纤维素(多聚葡萄糖),而霉菌的细胞壁主要含几丁质(氨基葡萄糖聚合物)。构成细菌细胞壁的主要成分为肽聚糖(Peptidoglycan)。
肽聚糖是由(G)N—乙酰葡萄糖胺(N--acetylglucosa·mine)、(M)N一乙酰胞壁酸(N-acetylmuremic acid)以及短肽聚合而成的多层网状结构大分子化合物。短肽一般由四五个氨基酸组成,不同种类细菌细胞壁中肽聚糖的结构与组成不完全相同,一般是由N—乙酰葡萄糖胺与N—乙酰胞壁酸重复交替联接构成骨架,短肽接在胞壁酸上,相邻的短肽又交叉相联,而形成网状结构。(见下页)。
肽聚糖的化学组成和一级结构
肽聚糖单体含有三个组成部分:
微生物的种类
革兰氏染色法(Gramstaining)革兰氏染色法是丹麦医生Gram1884年创立的一种新的使细菌染上颜色的方法。一般先用草酸胺结晶紫液初染,再加碘液媒染,使细菌着色,继而用乙醇脱色,最后用蕃红复染。
用此法染色可将细菌分为两大类:一类是经乙醇处理不脱色,而保持其初染的深紫色,称为革兰氏阳性反应细菌,简示为G+;另一类经乙醇处理就迅速脱去原来的着色,而染上蕃红的颜色,称为革兰氏阴性反应细菌,简示为G-。革兰氏染色法是鉴定细菌的一种主要方法。
细菌的鉴别染色法——革兰氏染色法GramstainingC.Gram丹麦医生步骤:涂片固定;结晶紫初染1min;碘液媒染1min;95%乙醇脱色30s;番红复染1min。
结果:阳性菌——紫色;阴性菌——红色。
革兰氏阳性菌与阴性菌细胞壁成份的差别:下表列出相关数据。
| 项目 | 革兰氏阳性菌 G+ | 革兰氏阴性菌 G- 内壁层 | 革兰氏阴性菌 G- 外壁层 |
|---|---|---|---|
| 厚度(nm) | 20~80 | 2~3 | 8 |
| 层次 | 单层 | 多层 | 多层 |
| 肽聚糖结构 | 多层,75%亚单位交链,网络紧密 | 单层,30%亚单位交链,网络疏松 | — |
| 与细胞膜关系 | 不紧密 | 紧密 | 紧密 |
| 肽聚糖占胞壁干重 | 40%~90% | 5%~10% | 无 |
| 磷壁质(酸) | 有或无 | 无 | 无 |
| 对青霉素 | 敏感 | 不够敏感 | 不够敏感 |
| 对溶菌酶 | 敏感 | 不够敏感 | 不够敏感 |
G+细菌细胞壁的组成
G-菌细胞壁模拟图
G-细菌细胞壁的组成类脂A脂多糖核心多糖
古生菌的细胞壁古生菌主要包括产甲烷菌和嗜极菌热原体属无细胞壁古生菌细胞壁化学成分与真细菌差别很大,含假肽聚糖、糖蛋白或蛋白质。
假肽聚糖碳骨架:N-乙酰葡萄糖胺、N-乙酰塔罗糖胺糖醛酸以β-1,3-糖苷键连接。
肽尾:L-Glu、L-Ala、L-Lys 3个L型氨基酸组成肽桥:L-Glu1个氨基酸组成
革兰氏染色的原理从细胞壁的化学组成已知,革兰氏阴性细菌细胞壁中脂类物质含量较高,肽聚糖含量较低,因而乙醇处理后,溶解了脂类,增加了通透性,结晶紫和碘复合物易被乙醇提出,于是革兰氏阴性细菌细胞被脱色。
革兰氏阳性细菌由于细胞壁肽聚糖含量高,脂类含量低,乙醇处理中被脱水引起细胞壁肽聚糖层中孔径变小,通透性降低,结晶紫一碘复合物被保留在细胞内,细胞不被脱色
特殊形态(缺壁细菌)(1)L型细菌L-form:指那些实验室或宿主体内通过自发突变而形成的遗传性稳定的细胞壁缺损菌株。
(2)原生质体protoplast :是指在人为条件下,用溶菌酶除尽原有细胞壁或用青霉素抑制新生细胞壁合成后,所得到的仅有一层细胞膜包裹着的圆球状渗透敏感细胞(3)球状体spheroplast :又称原生质球,指还残留部分细胞壁,尤其是革兰氏阴性细菌外膜的原生质体。
(4)支原体mycoplasma :是在长期进化过程中形成的、适应自然生活条件的无细胞壁的原核生物。
2、细胞质膜(Cytoplasmic membrane)
•结构:1972年由J.S.Singer和G.L.Nicolson提出“流动镶嵌”模型。
,其中不饱和脂肪酸的结构与含量决定了膜的流动性。
认为:膜是由球形蛋白与磷脂按照二维排列方式构成的流体镶嵌式,流动的脂类双分子层构成了膜的连续体,而蛋白质象孤岛一样无规则地漂流在磷脂类的海洋当中。
•功能:(1)控制细胞内外营养物质和代谢产物的运送与交换。(2)维持细胞内正常渗透压。
(3)合成细胞壁各组分(脂多糖、肽聚糖、磷壁酸)和荚膜的场所。(4)进行氧化磷酸化或光合磷酸化的产能基地。(5)为鞭毛提供附着点。
3、细胞质Cytoplasm
(1)为多肽和蛋白质合成场所,沉降系数为:70s,由50s大亚基和30s 小亚基构成。
(2)核糖体由rRNA (60%)和蛋白质(40%)组成。
(3)原核生物中游离于细胞质中或以多聚核糖体存在(4)真核生物中核糖体游离于细胞质中或结合于内质网上核糖体(Ribosome)
内含物
又称迂回体,是细菌特有的磷素养料贮藏颗粒,因由蓝色染料(如亚甲基蓝或甲苯胺蓝)染成紫红色而得名。主要成分是多聚偏磷酸盐由酯键相连。
发现于迂回螺菌,也存在于多种细菌,如白喉棒杆菌和鼠疫耶尔森氏菌细胞中。作用:贮存磷元素和能量,降低渗透压。异染颗粒metachromatic granule
•硫滴(sulfur droplet)是某些化能无机营养的硫细菌贮存的能源物质。
如贝氏硫菌属、发硫菌属等在氧化H2S的过程中获得能量,并在细胞内以硫粒(固态)或硫滴(液态)的形式贮存元素作用a.好氧硫细菌的能源b.厌氧硫细菌的电子供体
•肝糖(Glycogen)原与淀粉粒肝糖原和淀粉粒:都是α-1,4或α-1,6糖苷键的葡萄糖聚合物。这些贮藏物通常较均匀地分布在细胞质内,颗粒较小。
若这类贮藏物大量存在时,用碘使对其染色,肝糖原能被碘液染成红色,淀粉粒被碘成蓝色。脂肪粒:脂肪粒的折光性较强,它可被脂溶性染料染色;细胞生长旺盛时,脂肪粒增多,细胞遭破坏后,脂肪粒可游离出来。
•成分为Fe3O4外有一层磷脂、蛋白或糖蛋白膜包裹,使细胞具有永久的两极磁性,感应于地球磁场,并能按地球磁场线定向地移动。其功能是导向作用,即水生细菌借助鞭毛游向对该菌最有利的泥、水界面微氧环境处生活。
②磁小体③羧酶体又称羧化体,是存在于一些自养细菌细胞内的多角形或六角形内含物。在自养细菌的CO2固定中起着关键作用。
•不同微生物其贮藏内含物不同,如芽孢杆菌只含聚ß-羟基丁酸;大肠杆菌只贮存肝糖,而有些光合细菌则两者均可。
4、拟核(类核)
•质粒plasmid:在原核生物细胞中,独立于染色体外,携带少量遗传物质的环状DNA分子。
分子量约为2~100 ×106 D.携带几个到上百个基因, 一个细菌细胞可有一至数十个质粒。
质粒的种类1、大肠杆菌的F因子2、细菌抗药质粒(R因子)3、大肠杆菌素质粒(Col因子)4、降解质粒5、Vi质粒
质粒的特点:1、可以在细胞质中独立于染色体之外(即以游离状态)存在,也可以插入到染色体上以附加体的形式存在;
质粒应用:
5 荚膜(Capsule)
分类
功能
光滑(Smooth,S-)型菌落——产荚膜的细菌在固体培养基上形成的菌落表面湿润、有光泽、呈粘液状,称S-型菌落。
粗糙(Rough,R-)型菌落——不产荚膜的细菌形成的菌落表面干燥、粗糙、称R-型菌落。
荚膜与菌落形态
荚膜的应用
6 芽孢(Spore)
Figure. Gram stain of Bacillus anthracis,the cause of anthrax
在杆菌中能形成芽孢的种类较多,在球菌和弧菌中只有少数菌种可形成芽孢。产生芽孢的几个属:
芽孢的特点
芽孢抗热机制
芽孢形成过程
芽孢的萌发
伴孢晶体parasporalcrystal
7 鞭毛Flagellum
功能:帮助细菌运动,是细菌的运动器官。一般运动速度20~80um/s,最高可达100um/s
•结构TheE. coliFlagellar Structure
•鞭毛可以区分为三个部分:鞭毛丝:中空细丝,由鞭毛蛋白亚基螺旋排列而成鞭毛钩:连接鞭毛丝与基体的筒状弯曲部位基体:由一个中心杆和套环组成。
L环P环S环M 环G-G+
8 线毛Pili
四、细菌的繁殖方式一般进行无性繁殖,(裂殖)二分裂法。
二分裂法繁殖(裂殖)(binary fission):
球菌的分裂方式
五细菌培养特征固体培养基上:菌落(colony):指微生物细胞在一定条件下,在固体培养基表面形成的肉眼可见的微生物群体。若来自一个细胞,则为纯培养或称克隆( clone)。
菌苔(lawn):细菌在斜面培养基接种线上长成的密集的细菌群落。纯培养(clone):由一个孢子或细胞经培养所形成的微生物群落。
不同的微生物种类,其菌落特征不同。
同一种菌在不同培养条件下菌落特征也不尽相同。
菌落的特征包括:固体菌落形态1、大小2、颜色3、透明度4、表面状态5、质地6、边缘形态7、隆起形状(正面观)
细菌菌落的特征一般都较小,菌落与培养基结合不紧密,用接种针容易挑起,多数表面较光滑、湿润、较粘稠,易挑取,质地均匀,色泽多样。
细菌的琼脂斜面培养特征
液体培养基上均匀混浊;沉淀生长;表面生长。
液体培养特征絮状环状菌膜薄膜
在明胶培养基中穿刺培养的生长特征
细菌的现代分类真细菌(eubacteria)原界:包括蓝细菌和各种除古细菌以外的其他原核生物;古细菌(archaebacteria)原界:产甲烷菌、极端嗜盐菌和嗜酸嗜热菌。
学习要点
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