04 第四章 食用菌菌种生产.ppt

第1页：第四章菌种生产封面

第四章 食用菌菌种生产：介绍菌种生产流程与设备、母种的分离和培养、原种与栽培种生产、菌种质量鉴定与保藏、菌种衰退与复壮。

第2页：菌种生产流程

一、生产流程：

1. 种菇（种木）选择
2. 种菇（种木）处理，孢子收集
3. 斜面培养基制备 → 分离培养
4. 母种培养
5. 原种培养基制备 → 原种培养
6. 栽培种培养基制备 → 栽培种培养

第3页：

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第4页：

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第5页：

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第6页：

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第7页：接种设备构成

二、生产设备——1. 接种设备：用于分离和扩大各级菌种的专业设备。

• 接种室
• 接种箱
• 超净工作台
• 接种工具

第8页：接种室基本要求

接种室：

• 要求：设内外两间，面积适宜，容易清洁，能进行灭菌

第9页：接种室内外间布置

接种室的房间划分：

内间（接种工作间）

5~6 平方米，门窗紧密，尽量减少灰尘积累，内置工作台。

外间（缓冲间）

2~3 平方米，用于进入接种间前更换衣、帽、鞋，同时为内间提供与外界相隔的环境。

第10页：接种室构造细节

接种室的构造要求：

• 内外间均为拉门，位置相互错开
• 体积应尽量小，利于彻底灭菌
• 装设过滤空气的通风设施
• 内外间的墙、地板、天花板与室内用具应尽量光滑易擦洗

第11页：接种箱

接种箱：

• 相当于缩小的接种室
• 分双人操作型与单人操作型
• 易消毒，但规模受限制

第12页：

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第13页：

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第14页：超净工作台

超净工作台：

• 局部净化设备，靠空气过滤除菌
• 接种箱与净化工作台均应放在较干净、空气中尘埃少的环境中，最好置于接种室内

第15页：

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第16页：

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第17页：接种工具种类

接种工具：

• 接种针
• 接种环
• 接种刀
• 接种铲
• 镊子
• 接种器等

第18页：

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第19页：菌种培养设备

2. 菌种培养设备：放置接种后的各级菌种，并提供适宜温度和通气条件，使菌丝生长良好的专用设备。

第20页：培养室与培养架

培养室：

• 培养架：以操作方便为宜，宽 0.7~1.2 米，层间 40 cm
• 调温：电炉、红外线、暖气管、门窗、抽风机
• 测温：干湿球温度计
• 照明：避免使用蓝光
• 灭菌：紫外灯

第21页：

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第22页：恒温培养箱

培养箱（恒温箱）：根据需要使温度恒定在一定范围内，一般用于培养斜面试管和少部分原种。

第23页：

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第24页：培养基加工设备

3. 培养基加工设备：

• 木材切片机
• 木片粉碎机
• 搅拌机
• 装瓶装袋机

第25页：

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第26页：

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第27页：

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第28页：

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第29页：

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第30页：

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第31页：

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第32页：

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第33页：干热灭菌设备

4. 灭菌设备：灭菌即杀死环境中所有微生物，一般采用热力灭菌设备。

干热灭菌设备

利用干燥热空气灭菌。

灼烧灭菌

酒精灯。

电热恒温干燥箱

160℃、1~2 小时，适宜玻璃器皿、金属用具灭菌。

第34页：高压蒸汽灭菌设备

湿热灭菌设备：利用潮湿热空气灭菌。

第35页：

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第36页：

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第37页：

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第38页：常压灭菌

常压灭菌：

• 设施：砖石砌灶、油桶、蒸笼等
• 条件：100℃、6~8 小时

说明：原文写作“105℃ 6~8 小时”，常压条件下水沸点为 100℃，此处按常压灭菌的通行参数修正为 100℃。

第39页：

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第40页：

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第41页：制种容器与消毒药品

5. 制种容器和消毒药品：

容器

750 ml 无色或浅色菌种瓶、聚丙烯菌种袋。

消毒药品

甲醛、75% 酒精、高锰酸钾、漂白粉、来苏儿。

第42页：

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第43页：菌种厂选址要求

三、菌种厂选建：

• 交通方便、水电充足
• 地势干燥、环境干净
• 空气清新，30 米内没有畜禽圈舍、饲料仓库、排废工厂
• 有堆放、摊晒原料的场地

第44页：菌种厂平面布局

菌种厂布局图：图中标注各功能区的电源插座、紫外光管、照明光管、空调及抽气机、路灯与独立电源等设施位置。

说明：本页文字由图中标注识别而来（含“帶開關插座”“紫外光管”“照明光管”“空調及抽气机”“路燈”等），排列顺序已按用电与照明设施归类整理，具体位置请以原图为准。

第45页：母种培养基配制原则

第二节 母种的分离和培养——一、母种培养基配制：

1. 配制原则：

• 营养成分含量与比例适合食用菌生长发育
• pH、渗透压适宜
• 有一定的 pH 缓冲能力

第46页：PDA培养基配方

2. 配方——PDA（马铃薯葡萄糖琼脂培养基），适合各种食用菌：

第47页：合成培养基配方

合成培养基（适宜保藏菌种）：

第48页：苹果琼脂培养基

苹果琼脂培养基（特别适合草菇菌丝生长）：

说明：原文琼脂写作“2 g”，按 1000 ml 培养基的常规凝固剂用量应为 20 g 左右（1.5%~2%），此处修正为 20 g。

第49页：高粱琼脂培养基

高粱琼脂培养基（对平菇生长有利）：

第50页：酱油洋葱琼脂培养基

酱油洋葱琼脂培养基（宜香菇、平菇、金针菇、木耳）：

第51页：培养基配制步骤

3. 配制：

• 称量
• 调配：马铃薯、洋葱、稻草等水煮 30 分钟，双层纱布过滤
• 淀粉等易溶物质：加少量水调成糊状，避免结团
• 难溶物质：加水、加热、搅拌

第52页：pH测定与调整

pH 测定与调整：

• 按食用菌所需 pH 调整
• 用试纸测定
• 用 1N NaOH 或 1N HCl 调节

第53页：加入琼脂并溶解

加入琼脂并溶解：

• 预湿
• 加入培养基
• 加热搅拌溶解

第54页：过滤分装

过滤分装：

• 双层纱布过滤
• 分装至试管的 1/5（约 5 ml）
• 严禁培养基沾试管口、上壁

第55页：

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第56页：加棉塞与包扎

加棉塞、包扎：

• 棉塞起过滤空气、防止污染的作用
• 松紧适宜，入内 2/3、留外 1/3
• 以牛皮纸包扎

第57页：

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第58页：母种培养基灭菌

灭菌（高压蒸汽灭菌锅进行）：

• 升至 0.05 MPa 时打开放汽阀排冷气→回 0
• 再次升至 0.05 MPa 时打开放汽阀→回 0
• 升至 0.15 MPa，维持 15~20 分钟→回 0

第59页：

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第60页：

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第61页：种菇选择与处理

二、母种的分离培养——组织分离法：

种菇选择

个体健壮、菇形典型美观、无病虫害、适度成熟。

种菇处理

用 75% 酒精擦拭表面（草菇）。

第62页：组织分离与纯化

分离操作：

• 在菌柄与菌盖交界处取组织块
• 木耳经无菌水冲洗后切成小块放入培养基
• 纯化培养：将菌丝块移入 PDA 平板培养
• 若为纯种：四周呈辐射状生长，外缘整齐一致
• 若非纯种：边缘参差不齐，色素分布不均匀
• 挑取较一致的菌丝前端，切割后移入新培养皿

第63页：

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第64页：

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第65页：母种培养温度

培养温度：

• 大部分食用菌：25~28℃
• 草菇：30℃

第66页：木屑竹屑培养基配方

第三节 原种、栽培种的生产——1. 木屑、竹屑培养基：

适用：香菇、平菇、木耳、金针菇、猴头、灵芝等木生类菌。

第67页：木屑培养基制配

制配流程：

• 称料——糖溶于水中
• 混料——加入糖水
• 含水量 60~65%
• 调节 pH

第68页：棉籽壳培养基配方

2. 棉籽壳、蔗渣培养基：

适用：金针菇、平菇、凤尾菇、草菇、银耳、木耳、猴头。

第69页：甘蔗渣培养基配方

甘蔗渣培养基配方：

适用：平菇、凤尾菇、金针菇、毛木耳。

第70页：棉籽壳蔗渣培养基制法

制法：

• 称料
• 棉籽壳或甘蔗渣堆置 12~24 小时，使其均匀吸水
• 加入辅料
• 含水量 60~65%
• 调节 pH

第71页：谷粒培养基配方

3. 谷粒培养基：以小麦、高粱、玉米等为主料制作的培养基。

适用：除银耳外，其它木生型、粪草型食用菌均适合。

第72页：稻谷培养基配方

稻谷培养基配方：

适用：平菇、凤尾菇。

第73页：谷粒培养基制作

制作：

麦粒

用清水或 0.1% 多菌灵水浸泡 16~24 小时，捞起摊开，至底部无积水时加辅料调匀即可。

稻谷

冷水浸 2~3 小时，煮开 20~30 分钟，待大部分稍开裂即起锅，沥干拌料。

第74页：粪草培养基配方

4. 粪草培养基：以畜粪和稻草为主料的培养基。

适用：蘑菇、草菇。

第75页：粪草培养基制法

制法：

• 稻草切成 3 cm 长，浸透捞起，沥干至不滴水
• 与各辅料混合
• 堆制 20 天，中间翻堆 3~4 次

第76页：木块木条培养基配方

5. 木块木条培养基：以阔叶树、毛竹为主料配以辅料制成。

第77页：木块木条培养基制法

制法：

• 毛竹或枝条截成 10~12 cm 长、3~4 mm 宽，一头削尖，晒干
• 浸入 0.1% 多菌灵或 0.1% 高锰酸钾液 30 分钟
• 于 40~50℃ 营养液中浸泡 1 小时
• 捞出沥干
• 装瓶（尖头朝下，200 支/750 ml 瓶）
• 上盖 1.5 cm 厚木屑培养基

第78页：装瓶装袋要求

二、装瓶装袋：

• 要求松紧适宜，瓶装至瓶颈，袋装至 40%
• 洗净瓶口、打圆洞
• 塞棉塞
• 灭菌

第79页：

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第80页：

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第81页：

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第82页：原种栽培种接种

三、接种：

• 无菌条件：每立方米用 10 ml 甲醛 + 5 g 高锰酸钾熏蒸，24 小时后开紫外灯 30 分钟
• 1 支母种可接 5~6 瓶（支）栽培种
• 1 瓶原种可接 50~80 瓶栽培种

第83页：

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第84页：菌种培养管理

四、培养：

• 平菇 25℃、25~35 天；草菇 32℃、1 周
• 3~5 天内直立放置，然后倒卧叠放，适时转动（利于水分与菌丝生长均匀）
• 定期检查，剔除污染
• 3 个月内必须使用，最多不能超过半年

第85页：母种质量鉴定

第四节 菌种质量鉴定与保藏——1. 母种质量鉴定：

形态鉴定

在合适培养基、适宜温度下培养，菌丝生长快、整齐、浓而健壮。

第86页：出菇耳检查

出菇（耳）检查：

• 菌丝爬料快，满袋快
• 出菇时间适合周期
• 出菇多而整齐
• 菇形美观

第87页：原种栽培种质量鉴定

2. 原种、栽培种质量鉴定——外观要求：

• 菌丝已长满培养基；草菇有少量或没有红褐色厚垣孢子；银耳菌种在培养表面出现子实体或子实体原基
• 菌丝生长健壮，绒状菌丝多，分布均匀，色泽符合该菌类菌丝的色泽
• 无杂菌污染、无杂色出现

第88页：菌种代数要求

代数符合要求：母种转管应控制在 4~5 次以内。

第89页：菌种菌龄要求

菌龄适合：常温下，3 个月内有效；以满瓶后存放时间计，草菇、凤尾菇最好 1 个月内使用。

第90页：菌种重量与酸碱度

重量和酸碱度符合要求：依不同食用菌而定；重量要求 400 克/瓶。

第91页：斜面低温保藏

3. 保藏——斜面低温保藏：

• 4℃ 左右，6 个月转管一次
• 草菇：5℃ 会死亡，宜 10~12℃ 保存
• 用牛皮纸包扎试管口，再用黑纸密封试管
• 置于干净、阴凉环境，以 10~12℃ 为宜，3~4 个月转管一次
• 温度不能低于 5℃；培养基中琼脂用量可适当加大以延长保存期

第92页：液体石蜡保藏

液体石蜡保藏：

• 将液体石蜡装入三角瓶，塞棉塞，高压蒸汽灭菌 1 小时，置 30℃ 温箱培养 24 小时后再灭菌 1 小时
• 放入 40℃ 环境使水分蒸发，至石蜡透明
• 倒入斜面菌种试管内，淹过斜面 1 cm
• 直立于试管架上常温保藏，1~2 年转管一次

第93页：液体石蜡菌种使用

使用方法：

• 倒去液体石蜡，用无菌水冲洗斜面 2~3 次，挑取少许菌丝接入斜面培养基培养，长满斜面即可用于生产
• 也可不倒去石蜡，直接用接种针从斜面挑取少量菌丝接入斜面培养基，菌种仍可继续保藏

第94页：麦粒保藏法

麦粒保藏：

• 麦粒泡 8~12 小时，稍沥干，装入大试管
• 塞好棉塞，灭菌 1 小时 → 28~37℃ 置 24 小时 → 再灭菌 1 小时
• 接种
• 长满后于干燥器中干燥 1 个月
• 置 4℃ 或凉爽、干燥、干净处，可保存 1 年以上
• 使用时每支斜面培养基接入一粒麦粒，培养至菌丝长满斜面即可

第95页：菌种衰退与预防

第五节 菌种的衰退与复壮——1. 衰退：

衰退

优良性状退化，典型性状变异，质量负变。

预防衰退措施

控制菌种传代次数；采用有效的菌种保藏方法；创造菌种生长的良好营养条件和外界环境。

第96页：菌种复壮概念

2. 复壮：从衰退群体中找出尚未衰退的少数个体，以恢复菌种优良性状的一种措施。

第97页：菌种复壮方法

复壮方法：

• 淘汰已衰退个体：无菌条件下将试管菌丝刮入 100 ml 无菌水中，振荡分散，稀释 10 倍后摊于平皿培养，挑选萌发快、生长健壮的菌丝接种
• 定期重新分离菌种，1~2 年后分离一次
• 木生菌类要定期接入木材中，再重新分离