10 第十章 分子遗传标记应用.ppt

第1页：第十章 生物技术在家畜育种中的应用

第十章生物技术在家畜育种中的应用

第2页：繁殖生物技术应用

繁殖生物技术应用

• 人工授精（Artificial Insemination）鲜精：1－2天，受精率高冻精：时间长，受精率低作用：1)增加公畜的配种任务，获得大量优良种畜后代；
• 2)使得种公畜使用不受时间和地域限制；
• 扩大种公畜的遗传改良作用；
• 3)有利于家畜品种资源保护。

第3页：人工控制母畜繁殖周期

人工控制母畜繁殖周期

• 途径：药物处理产后处理作用：1)增强发情症状，提高受胎率；
• 2)造成同期发情，有利于胚胎移植；
• 3)产后催情，缩短胎间距。

第4页：超数排卵与胚胎移植

超数排卵与胚胎移植

• （multiple ovulation,embryo transfer，MOET）超数排卵：产生更多的卵母细胞胚胎移植：将供体胚胎移植到发情适时的受体牛子宫内。作用：1)增加优良母畜的后代，提高其繁殖力；
• 2)有利于遗传物质的运输；
• 3)建立MOET核心群育种体系，提高选择的准确性或缩短世代间隔。

第5页：性别控制与胚胎性别鉴定

• 性别控制与胚胎性别鉴定作用：1)增加家畜特定的性别比例，提高生产效率；2)根据育种需要，灵活选择性别比例。
• 转基因动物作用：提高生产性能，实现抗病育种；生产特定的肽和蛋白质。

第6页：胚胎分割

胚胎分割作用：产生较多可用胚胎；同卵双生子的应用。

胚胎细胞克隆作用：可产生更多的胚胎；可建立纯系。

第7页：分子标记

分子标记

概念：不同个体之间在某些位点上，其DNA序列会出现差异，这些位点就可用作遗传标记，称为分子标记或DNA标记（molecular marker）。

第8页：分子标记的种类

种类：I型标记：出现在一个基因之内影响到该基因的功能，进而影响性状的表型的分子标记。II类标记：与基因功能无关的分子标记，也可称为匿名标记（anonymous marker）。

第9页：RFLP限制性酶切片段长度多态性

RFLP：限制性酶切片段长度多态性，是指用限制性内切酶酶切不同个体的基因组DNA后，所得的含有同源序列的酶切片段在长度上所存在的差异。主要的分子标记类型

第10页：RAPD随机扩增多态性DNA

RAPD：随机扩增多态性DNA（randomly amplifiedpolymorphic DNA），用随机序列组成的寡核苷酸作为引物，通过PCR反应扩增所获得的长度不同的多态性DNA片段。

第11页：VNTR可变数目串状重复

VNTR:可变数目串状重复（variable number tandem repeat），在真核生物的基因组中，存在许多串状重复序列。由于重复单位的重复次数在个体间有很大差异，因而可作为一种遗传标记，按重复单位的大小，可分为微卫星标记（microsatelite）和小卫星标记（minisatelite）

第12页：AFLP扩增片段长度多态性

• AFLP扩增片段长度多态性（amplified fragment lengthpolymorphism），是指通过特定引物和DNA多聚酶链式反应（polymerase chain reaction, PCR）复制并扩增不同个体基因组DNA模板后，所得扩增片段在长度上的差异。
• SNPs：单核苷酸多态（single nucleotidepolymorphisms），这是指在单个核甘酸上的突变所引起的多态，多是双等位基因，且某一等位基因的频率不低于1%。

第13页：分子标记的优点

• 优点：多态程度高；
• 数量多，且均匀地覆盖整个基因组；
• 测定不受年龄、性别、环境等因素的限制；
• 符合孟德尔遗传规律，能够准确判别所有可能的基因型。

第14页：分子标记的应用

应用：-遗传连锁图谱构建、QTL的检测-标记辅助选择或导入-遗传多样性研究-研究品种起源与进化-亲子鉴定疾病诊断

第15页：遗传连锁图谱构建

遗传连锁图谱构建

连锁图谱（linkage map）或遗传图谱（genetic map）多个基因或分子标记按其相互间的遗传距离在同一染色体上的线性排列。

第16页：连锁图谱的原理

原理：基因或标记在配子形成过程中发生重组。基因或标记座位的距离越大，重组发生概率就越大。

第17页：图距与厘摩

基因间的遗传距离用图距度量，图距的单位是摩根（Morgan或M）或厘摩（centi-Morgan或cM）

第18页：图距函数

图距函数

（map function）Haldane图距函数假定不同座位之间的交换是彼此独立的（无干扰），其函数式为：Kosambi图距函数考虑了不同座位之间的交换存在干扰的情况，其函数式为

第19页：数量性状基因座位定位

数量性状基因座位定位

• 主基因：对数量性状有明显作用的仍然处于分离状态的单个基因。一般认为基因的效应（两种纯合基因型的基因型值之差）达到0.5~1.0表型标准差。
• 数量性状基因座（quantitative trait loci, QTL）：对数量性状有较大效应的，且能够被检测出的单个基因或染色体片段。

第20页：QTL检测的方法

QTL检测的方法

• 标记-QTL连锁分析（marker-QTL linkage analysis），也称为基因组扫描（genome scanning）
• 候选基因分析（candidate gene approach）

第21页：标记-QTL连锁分析

标记-QTL连锁分析

原理：遗传标记座位等位基因与QTL等位基因之间存在连锁不平衡关系，通过对遗传标记从亲代到子代遗传过程的追踪以及它们在群体中的分离与数量性状表现之间的关系的分析，来判断是否有QTL存在、它们在染色体上的相对位置以及它们的效应大小。

第22页：标记-QTL连锁分析的基本步骤

标记-QTL连锁分析的基本步骤

• 实验群体设计
• 选择合适的遗传标记
• 收集、整理标记基因型和数量性状数据
• 构建标记连锁图谱
• QTL的检测与参数估计

第23页：试验设计

试验设计

基于近交系或品系（种）杂交的试验设计用两个在数量性状上有较大差异（最好是处于两个极端）的近交系或品系或品种杂交，在此基础上可进行各种试验设计。回交设计F2设计

第24页：基于家系的试验设计

基于家系的试验设计

半同胞家系（Half-sib Families）设计：女儿设计孙女设计全同胞家系设计混合家系设计

第25页：QTL检测及参数估计

QTL检测及QTL参数估计

单标记分析假设在两个亲本近交系中在所考察的数量性状上的差异主要由一个QTL引起，该QTL与一个标记连锁，它们之间的重组率为r。假定它们在标记和QTL上都已完全固定，因而可假定在第一个亲本系（P1）中，所有个体标记和QTL的基因型为M1Q1/M1Q1，在第二个亲本系（P2）中，标记和QTL的基因型为M2Q2/M2Q2。

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第27页：QTL与标记连锁的判定

如果这两个亲本系间的差异确实主要由该QTL引起，且QTL确实与标记连锁（r < 0.5），则这两组个体的平均数就会有差异，据此可用均数差异的t检验法对以上假设进行检验：

第28页：区间定位

区间定位

（Interval Mapping）在一个已知连锁图谱（即标记之间的排列顺序和它们之间的距离已知）的标记连锁群内,依次在每个由相邻标记构成的区间内的各个点上,利用两个侧翼标记的信息检测QTL。

第29页：区间定位实例计算

• 例如区间（M，N），两个标记之间的重组率为R（已知），设有一QTL位于它们之间的某一位置，QTL与标记M之间的重组率为r1，与N之间的重组率为r2。
• 设两个近交亲本系中的标记-QTL基因型为M1Q1N1/ M1Q1N1和M2Q2N2/ M2Q2N2，在F1中则为M1Q1N1/ M2Q2N2。
• F1与第一亲本回交，在回交中可有四种标记基因型。

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第32页：复合区间定位

复合区间定位

将区间定位与多元回归相结合，利用在所考察的区间以外的其它标记来消除其它可能存在的QTL的影响。

第33页：候选基因分析

候选基因分析

概念：从一些可能是QTL的基因（即候选基因）中筛选QTL。ESR雌激素受体基因

第34页：候选基因分析的基本步骤

基本步骤

• 选择候选基因依据所掌握的生物学或生理学知识；选择在人类或小鼠或其他物种中发现的具有较大效应的突变基因作为候选基因。
• 获得用于扩增基因的引物序列

第35页：检测候选基因内的多态性

检测候选基因内的多态性

研究候选基因与性状的关系

第36页：标记辅助选择

标记辅助选择

原理

检测与QTL连锁的分子标记基因型，并将这些基因型信息应用到个体的遗传评定中，从而决定个体的选留。

优点

选择准确性高；对于限性性状、屠宰性状选择有利；有利于早期选择。

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第38页：标记辅助选择方法

标记辅助选择方法

Marker-BLUP同时利用表型、系谱和标记的信息进行个体育种值估计。个体育种值＝QTL育种值＋多基因育种值

第39页：两阶段选择

两阶段选择在畜禽生长早期阶段，根据标记信息进行选择，将携带有理想标记等位基因的个体选留。在性能测定阶段，根据BLUP育种值进行选择。

第40页：生物技术习题

习题1.解释如下名词分子标记遗传连锁图谱数量性状座位标记辅助选择