第1页：层析法
层析法：第五节层析法又叫凝胶过滤、凝胶层析、凝胶渗透层析、排阻渗透层析、分子筛过滤等
第2页：凝胶层析的原理
- 凝胶层析的原理
- 将具有分子大小网状结构（孔隙）的凝胶粒子浸渍于某种溶液中时，溶液中的溶质分子凡是比网络孔隙小的都能自由进入凝胶粒子内，大的分子由于不能潜入网格便残留在溶液中，所以将分子大小不同的溶液（如蛋白质和硫酸铵）加入到分离柱中，只有小分子物质（硫酸铵）完全能进入凝胶粒子内，而大分子（蛋白质）则被排阻于
第3页：常用的凝胶种类
- 二、凝胶层析法常用的凝胶
- 1、天然凝胶
- 琼脂和琼脂糖凝胶（Sepharose）：能分离较大相对分子质量的物质，但它带有大量的电荷，层析时需使用较高离子强度的洗脱液
- 2、人工合成凝胶
- （1）聚丙稀酰胺凝胶（Bio－Gel P）
- （2）交联葡聚糖凝胶（Sephedex）
第4页：凝胶柱的制备与样品准备
- 三、凝胶层离技术
- 1、凝胶柱的制备
- （1）凝胶的预处理
- （2）凝胶的装填
- （3）层析床的检查
- （4）柱的平衡
- 2、样品和洗脱剂的准备
- 洗脱剂：试剂是分析纯、水是纯水
- 固体样品溶于洗脱剂中，无颗粒
第5页：加样量与洗脱技术
- 3、加样
- （1）加样量的选择
- 脱盐、缓冲液交换等组分分离时加样体积为床体积的30％，如果要求较高的回收率，则为15％～20％。
- （2）加样方法和注意事项
- 进样器或注射器
- 排干法
- 液面下加样
- 4、洗脱技术
- 洗脱流速高速涡流扩散严重，导致区带变宽
第6页：检测收集与介质再生保存
- 5、样品的检测、收集和处理
- 6、凝胶过滤介质的再生、清洗和储存
- 再生：用1.5～2个柱体积的洗脱剂完成洗脱过程
- 清洗：碱液清洗（0.1～0.5moL/L的NaOH）、乙醇、非离子型去污剂
- 保存：浸泡在抑菌剂的溶液中，比如：20％乙醇、0.02％～0.05％的叠氮化钠、0.01moL/L的NaOH，0.05
第7页：层析设备
层析设备：不锈钢层析柱四、层离设备1.分离柱2.恒压储液瓶3.恒流泵4.洗脱液收集器5.恒温设备
第8页：凝胶层析法的应用
- 五、凝胶层析法在发酵中的应用
- 1、脱盐
- 2、凝胶层析法去除热源物质
- 3、凝胶浓缩高分子溶液
- 4、测定高分子物质的相对分子质量
- 5、分析
