第1页：纯培养和显微技术
第二章纯培养和显微技术
第2页：微生物的基本特点
- 微生物的基本特点：小！
- 在绝大多数情况下都是利用微生物的群体来研究其属性；
- 微生物的物种（菌株）一般也是以群体的形式进行繁衍、保存；培养技术在微生物学中具有重要意义！
第3页：研究中所使用的微生物培养群体
- 在研究中所使用的微生物培养群体：培养物：在一定的条件下培养、繁殖得到的微生物群体混合培养物：含有多种微生物的培养物；
- 纯培养物：只有一种微生物的培养物；
- 通常情况下只有纯培养物才能提供可以重复的结果纯培养技术是进行微生物学研究的基础！；
第4页：微生物个体微小的特点
微生物个体微小的特点也决定了显微技术是进行微生物研究的另一项重要技术，因为绝大多数微生物的个体形态及其内部结构只能通过显微镜才能进行观察和研究。微生物的基本特点：小！
第5页：微生物的分离和纯培养
- 微生物的分离和纯培养从混杂的群体中分离特定的某一种微生物，是研究和利用微生物的第一步。一、无菌技术
- 用于分离、培养微生物的器具事先不含任何微生物；
- 在转接、培养微生物时防止其它微生物的污染；
- 其自身不污染操作环境
第6页：常用器具及其灭菌
- 1、微生物培养的常用器具及其灭菌常用的器具
- 试管、瓶子、培养皿等1887年，R J Petri 发明Petri dish
第7页：高温干热灭菌高压蒸汽灭菌
高温干热灭菌高压蒸汽灭菌试管、瓶子、培养皿等常用的灭菌方法：1、微生物培养的常用器具及其灭菌常用的器具：
第8页：无菌操作
- 无菌操作
- 火焰附近（酒精灯、煤气灯）进行
第9页：
第10页：用固体培养基分离纯培养
- 用固体培养基分离纯培养培养基：液体培养基；
- 固体培养基；
- 半固体培养基；
第11页：琼脂作为凝固剂
琼脂柯赫（Robert Koch）的助手W Heese和他的夫人Fran Heese
第12页：菌落与菌苔
- 菌落（colony）
- 单个（或聚集在一起的一团）微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度可以形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞生长群体（P13）众多菌落连成一片菌苔（lawn）
第13页：
第14页：菌落形态特征
（P6 图2-3）
第15页：同一细菌在不同的培养
同一细菌在不同的培养平板上形成不同的特征菌落
第16页：用固体培养基分离纯培养
二、用固体培养基分离纯培养使微生物在固体培养基平板上形成单个菌落的基本方法：稀释！
第17页：稀释倒平板法
1、稀释倒平板法2、涂布平板法操作较麻烦，对好氧菌、热敏感菌效果不好！使用较多的常规方法，但有时涂布不均匀！
第18页：平板划线法
二、用固体培养基分离纯培养3、平板划线法
第19页：用固体培养基分离纯培养
二、用固体培养基分离纯培养3、平板划线法
第20页：厌氧微生物的分离
二、用固体培养基分离纯培养4、厌氧微生物的分离厌氧罐厌氧手套箱
第21页：厌氧罐厌氧手套箱
厌氧罐厌氧手套箱
第22页：稀释摇管法
二、用固体培养基分离纯培养4、厌氧微生物的分离稀释摇管法
第23页：用液体培养基分离纯培养
- 用液体培养基分离纯培养0.050.05 +
- 0.0025 +
- 0.004=
- 0.975稀释法进行液体分离必须在同一个稀释度的许多平行试管中，大多数（一般应超过95%）表现为不生长。例如：若同一稀释度的试管中有95%表现为不生长，则生长的试管中仅含一个细胞的几率为：5%；含二个细胞的几率为：0.25%；含三个细胞的几率为：0.004%在有细菌生长的试管中得到纯培养的几率为97.5%
第24页：单细胞（孢子）分离
- 单细胞（孢子）分离
- 一般采用显微操作仪，在显微镜下进行；
- 操作难度与细胞或个体的大小成反比；
第25页：选择培养分离
- 选择培养分离
- 抑制大多数其它微生物的生长；
- 使待分离的微生物生长更快；使待分离的微生物在群落中的数量上升，方便用稀释法对其进行纯化。微生物群落中数量占少数的微生物的分离纯化：
- 使待分离的微生物生长“突出”；直接挑取待分离的微生物的菌落获得纯培养。
第26页：选择培养分离（续）
- 选择培养分离1. 利用选择平板进行直接分离待分离的微生物生长，其它微生物的生长被抑制
- 高温下培养：分离嗜热细菌；
- 培养基中不含N：分离固氮菌；
- 培养基加抗生素：分离抗性菌；
第27页：选择平板直接分离
- 的生长特征明显不同于其它微生物
- 颜色反应：分离特定的菌株；
- 牛奶平板：分离蛋白酶产生菌；
第28页：富集培养
五、选择培养分离2. 富集培养从自然界中分离到所需的特定微生物特定的环境条件仅适应于该条件的微生物旺盛生长待分离微生物在群落中的数量大大增加
第29页：二元培养物
- 二元培养物培养物中只含有二种微生物，而且是有意识的保持二者之间的特定关系的培养物称为二元培养物。
- 病毒和宿主细胞；
- 纤毛虫、变形虫和粘细菌；
第30页：菌种保藏技术
在一定时间内使菌种不死、不变、不乱（参见P19）基本要求：基本方法：生活态休眠态培养基传代培养寄主传代培养冷冻干燥斜面、平板液氮、低温冰箱沙土管、冷冻真空干燥七、微生物的保藏技术
第31页：显微镜和显微技术
- 第二节显微镜和显微技术几个基本概念
- 放大分辨率反差被观察物越小，放大倍数应越大，否则难以看清！能辨别两点之间最小距离的能力被观察物区别于背景的程度被观察物区别于背景的程度与显微镜的自身特点有关，但也取决于进行显微观察时对显微镜的正确使用及良好的标本制作和观察技术，这就是显微技术。
第32页：普通光学显微镜
一、显微镜的种类及原理1. 普通光学显微镜复式显微镜
第33页：光学显微镜的最大放大倍数
- 光学显微镜一般配置的最大放大倍数是多少？为什么？如何实现光学显微镜一般配置的最大放大倍数？其原理？目镜：10 ~ 20 ╳；
- 物镜：100╳；
- 总放大倍数1000~2000 ╳；
- 使用油镜，即在100╳物镜和载玻片之间滴加香柏油；
第34页：分辨率
0.5 l分辨率（最小可分辨距离）= ————n sin qλ：光波波长n：玻片与物镜间介质的折射率θ：为物镜镜口角的半数1. 普通光学显微镜
第35页：普通光学显微镜
1. 普通光学显微镜0.5 l分辨率（最小可分辨距离）= ————n sin qq为物镜镜口角的半数，它取决于物镜的直径和工作距离
第36页：分辨率与介质折射率
N：玻片与物镜间介质的折射率空气(n=1.0)、水(n=1.33)、香柏油(n=1.52)、玻璃( n=1.54)
第37页：普通光学显微镜
普通光学显微镜又称明视野显微镜其照明光线直接进入视野，属透射照明。一、显微镜的种类及原理2. 暗视野显微镜
第38页：
第39页：
第40页：荧光显微镜
4. 荧光显微镜一、显微镜的种类及原理
第41页：透射电子显微镜
一、显微镜的种类及原理5. 透射电子显微镜；6. 扫描电子显微镜
第42页：扫描电子显微镜
一、显微镜的种类及原理5. 透射电子显微镜；6. 扫描电子显微镜
第43页：扫描隧道显微镜
一、显微镜的种类及原理7. 扫描隧道显微镜
第44页：本章小结
- 本章小结
- 培养物、纯培养物、无菌操作、菌落、菌苔稀释倒平板法、涂布平板法、平板划线法选择培养分离、富集培养稀释法、菌种保藏TEM、SEM、STM、AFM
- 0.5λ
- 分辨率（最小可分辨距离）= ————
- n sin θ
