08 第八章 菌种保藏.ppt

第1页：第五章菌种保藏

• 第五章菌种保藏一、菌种的衰退与复壮的1.衰退：菌种在培养或保藏过程中，由于自发突变的存在，出现某些原有优良生产性状的劣化、遗传标记的丢失等现象，称为菌种的衰退。衰退的原因
• 基因突变
• 分离现象

第2页：菌种衰退的常见现象

• 常见的衰退现象：菌落和细胞形态的改变
• 生长速度缓慢，产孢子越来越少
• 抵抗力、抗不良环境能力减弱等
• 代谢产物生产能力或其对宿主寄生能力下降

第3页：菌种的复壮

2、菌种的复壮：使衰退的菌种恢复原来优良性状。

狭义的复壮是指在菌种已发生衰退的情况下，通过纯种分离和生产性能测定等方法，从衰退的群体中找出未衰退的个体，以达到恢复该菌原有典型性状的措施；

广义的复壮是指在菌种的生产性能未衰退前就有意识的经常、进行纯种的分离和生产性能测定工作，以期菌种的生产性能逐步提高。

实际上是利用自发突变（正变）不断地从生产中选种。

第4页：菌种复壮的措施

菌种的复壮措施：纯种分离：（平板划线法、涂布法、倾注法、单细胞挑取法等）；

通过寄主体内生长进行复壮（如Bacillusthuringiensis的复壮）；

淘汰已衰退的个体（采用比较激烈的理化条件进行处理，以杀死生命力较差的已衰退个体）；

采用有效的菌种保藏方法。

第5页：防止菌种衰退的方法

3、防止菌种衰退的方法：控制传代次数（一般在DNA的复制过程中，碱基的错配率是5x10-4，自发突变的频率为10-8~10-9，采用良好的菌种保藏方法，可以减少移种和传代的数）；

选择合适的培养条件；

采用不同类型的细胞进行传代（对丝状微生物而言，通常采用稳定的单核孢子进行接种）；

采用有效的菌种保藏方法。

第6页：菌种保藏

• 菌种保藏
• 目的：存活，不丢失，不污染
• 防止优良性状丧失
• 随时为生产、科研提供优良菌种
• 2.原理：选用优良的纯种，（最好是休眠体，如分生孢子、芽胞等），创造降低微生物代谢活动强度，生长繁殖受抑制，难以发生突变的环境条件
• （其环境要素是干燥、低温、缺氧、缺营养以及添加保护剂等）

第7页：菌种保藏的方法

3.菌种保藏的方法菌连续在培养基上（内）移种种生活态传代培养保藏法连续在活宿主上（内）移种保固体斜面藏湿法半固体琼脂柱方休眠态液体介质（蒸馏水、糖液、其它溶液）法干法藏在玻璃管内吸附在合适的载体上

第8页：低温保藏

• 方法
• 低温保藏法：方法：菌种管置4℃冰箱保藏，定时传代。原理：低温下，微生物代谢强度明显下降
• 石蜡油低温保藏法：橡皮塞取代棉塞、加石蜡油
• 干燥保藏法将菌种置于土壤、细纱、滤纸、硅胶等干燥材料上保藏。如砂土管法，适用于放线菌、芽孢菌和某些真菌保藏，保藏时间几至几十年

第9页：冷冻干燥法的适用范围

• 真空冷冻干燥法加有保护剂的菌悬液在冻结状态下予以真空干燥。适用于各种微生物，便于大量保藏，菌种存活时间长，是目前最好的保藏方法
• 液氮超低温保藏法将菌种置于保护剂中，预冻后保存在液氮超低温冰箱中（-196℃）。适用于各种微生物的较理想的保藏方法

第10页：干法保藏

干法保藏菌种的方法滴入小试管（在放入大试管干燥器中）藏在玻璃管内封入安培瓶菌液直接真空干燥法（L-干燥法）冷冻真空干燥法细粒状载体（土壤、沙粒、土壤+沙粒）球块状载体（硅胶、瓷球）合适的载体有机基质（曲料、麦粒）滤纸片薄片状载体明胶小片（滴在蜡纸板上干燥而成）血清蛋白小片（…乙烯薄膜…）

第11页：几种常用菌种保藏方法的比较表

注：原页文字序列中末行方法名未完整出现，第五行方法名依据同节“菌种保藏的方法”列表补全，建议对照原图核对。