第1页:第十一章 基因信息的储存和表达
第十一章 基因信息的储存和表达
- 复习 基因信息的储存和表达的分子基础
- 第一节 遗传的中心法则
- 第二节 DNA的生物合成
- 第三节 RNA的生物合成
- 第四节 蛋白质的生物合成
- 第五节 基因工程
第2页:分子基础复习目录
复习 基因信息的储存和表达的分子基础
- 一、核酸的分类与功能
- 二、DNA的分子组成和结构
- 三、RNA的分子组成和结构
- 四、核酸的变性、复性与杂交
第3页:核酸的分类与功能
一、核酸的分类与功能
- 脱氧核糖核酸(DNA)
- 遗传的物质基础;基因就是染色体中带有遗传信息的DNA的功能片段(DNA分子中特定的碱基排列顺序——碱基序列)
- 核糖核酸(RNA)
- mRNA(信使RNA):蛋白质合成的直接模板
- tRNA(转运RNA):活化与转运氨基酸
- rRNA(核蛋白体RNA):充当装配机、提供场所
- 共同参与蛋白质的生物合成
第4页:DNA的分子组成和结构
二、DNA的分子组成和结构
- (一)分子组成
- A、G、T、C 和脱氧核糖及磷酸
- Chargaff 规律
- 一种生物体所有体细胞DNA的碱基组成均相同
- 同一种生物体内,DNA分子的 A = T、G = C(嘌呤碱与嘧啶碱总量相等)
- 亲缘相近的生物碱基组成相似,反之亦然
- (二)分子结构 1、一级结构
- DNA链中 A、T、C、G 的序列;脱氧核糖核苷酸之间以磷酸二酯键相连
第5页:DNA双螺旋结构
2、空间结构(二级结构)——双螺旋结构
- (1)结构要点
- 逆向平行双螺旋
- 碱基互补规律:A—T(两个氢键相连)、G—C(三个氢键相连)
- 双螺旋结构的稳定依靠碱基对间的氢键
- (2)生物学意义
- 提出了遗传信息的贮存方式、DNA的复制机理
- 是DNA复制、转录和翻译的分子基础
第6页:碱基互补配对示意
本页为碱基互补配对示意:A 与 T 配对、G 与 C 配对。
说明:源文件本页仅标注“示意图”并附A、T、G、C字符,图示细节建议对照原课件图片核对。
第7页:四种碱基结构式
本页为四种含氮碱基的化学结构式:腺嘌呤(A)、鸟嘌呤(G)、胸腺嘧啶(T)、胞嘧啶(C)。
说明:源文件本页仅标注“示意图”并列出碱基名称,结构式细节建议对照原课件图片核对。
第8页:RNA的分子组成和结构特点
三、RNA的分子组成和结构
- (一)分子组成与结构特点
- 1、组成:A、G、U、C 及少量稀有碱基(m7-G)、核糖、磷酸
- 2、一级结构:RNA链中 A、G、U、C 的序列
- 3、组成与结构特点:含有稀有碱基(由主要碱基修饰而来);多为单链结构,且碱基组成较不规律
第9页:tRNA的结构特点
1、tRNA
- (1)一级结构的共同特点
- (2)二级结构——三叶草形
- 3′-末端:CCA-OH(携带氨基酸的部位)
- 反密码环顶端:反密码子(识别 mRNA 上特定的密码子)
- 功能:活化与转运氨基酸
第10页:tRNA三叶草结构示意
本页为tRNA三叶草形二级结构示意,标注 5′-末端、反密码环与 3′-末端氨基酸臂的位置。
说明:源文件本页仅标注“示意图”,图示细节建议对照原课件图片核对。
第11页:mRNA与rRNA
2、mRNA——蛋白质合成的直接模板
- 密码子
- mRNA 分子从 5′-端起读,每三个相邻的核苷酸(碱基)组成一个三联码,决定某种氨基酸
- mRNA 分子的首尾结构
- 5′-端(首部):m7Gppp(7-甲基鸟苷三磷酸)
- 3′-端(尾部):poly-A(多聚腺苷酸)
3、rRNA——蛋白质合成的场所,起“装配机”的作用:含量最多(约80%),与多种蛋白质结合生成核蛋白体。
第12页:核酸的变性与Tm
四、核酸的变性、复性与杂交——(一)变性
- 1、概念
- 核酸双链间氢键断裂,双链结构解开形成两条单链的过程;变性因素:加热及化学处理(有机溶剂等)
- 2、特性
- 伴有高色(增色)效应:在 260 nm 的紫外吸收增强
- 熔点(Tm):DNA 达到 50% 变性时的温度
- DNA分子中 G-C 组份愈多,Tm 值愈高,DNA 分子愈稳定,反之亦然
第13页:复性与分子杂交
(二)复性;(三)分子杂交
- 复性
- 因变性而解开的两条单链,在温度缓慢下降时重又聚合成双链结构;复性时伴有低(减)效应(260 nm 紫外吸收减弱);复性又称“退火”;变性后若温度迅速下降则不发生复性
- 分子杂交
- 以核酸的变性和复性为基础;不同来源的两条核酸单链,若有大致相同的碱基互补顺序,经退火处理可形成杂交双链
- 可发生在 DNA-DNA、DNA-RNA 和 RNA-RNA 之间
第14页:中心法则与DNA生物合成目录
第一节 遗传的中心法则;第二节 DNA的生物合成:先以中心法则说明遗传信息的流向,再分复制、逆转录与DNA损伤修复三部分展开DNA的生物合成。
第15页:遗传的中心法则
第一节 遗传的中心法则
- 复制
- 以DNA为模板指导DNA合成的过程;酶为DNA指导的DNA聚合酶(DDDP);原料 dNTP
- 转录
- 以DNA为模板指导RNA合成的过程;酶为DNA指导的RNA聚合酶(DDRP);原料 NTP
- 翻译
- 以mRNA为模板合成蛋白质
- 逆转录
- 以RNA为模板指导DNA合成
DNA →(复制)→ DNA →(转录)→ mRNA →(翻译)→ 蛋白质;RNA →(逆转录)→ DNA。
第16页:DNA的半保留复制
第二节 DNA的生物合成——一、复制
- 1、半保留复制
- DNA的复制以半保留复制方式进行:子代DNA保留一条母链、新合成一条互补链
- 实验证明——同位素 15N 实验
- 应具备的条件
- 母链DNA作为模板(3′→5′)
- 四种 dNTP 作为原料
- 相应的酶类:DDDP 等
- 一小段 RNA 作为DNA聚合引物
- 方向
- 模板链走向 3′→5′,新链合成方向 5′→3′
第17页:参与复制的酶类
2、参与复制的酶类
- (1)引物酶
- 一种特殊的RNA聚合酶;以DNA为模板、NTP为原料,催化一段引物RNA的合成;RNA引物为DNA合成提供 3′-OH
- (2)解旋和解链酶类
- 解链酶:沿着复制叉促进两条互补链分离
- 解旋酶(拓扑异构酶):解旋,克服扭结现象
- 单链结合蛋白:固定已分离解旋的单链,便于复制
其他:DNA聚合酶、DNA连接酶。
第18页:DNA聚合酶与连接酶
(3)DNA聚合酶;(4)DNA连接酶
- DNA聚合酶Ⅰ
- 多功能酶——聚合、填空、修补;充填冈崎片段之间的间隙;具有 5′→3′ 外切酶作用(切除引物和损伤部位)
- DNA聚合酶Ⅲ
- 复制时起主要作用的酶——聚合、填空、修补
- DNA连接酶
- 连接冈崎片段,形成完整的DNA链
第19页:DNA复制的过程
3、复制的过程
- 模板DNA先解链解旋(解链酶、解旋酶和单链结合蛋白)
- 引物酶作用,以 NTP 为原料合成 RNA 引物
- 在 dNTP 存在下由 DNA聚合酶Ⅲ催化,在 RNA 引物基础上合成DNA新链
- DNA聚合酶Ⅰ外切作用切除引物,空缺部位再由该酶填补
- DNA连接酶连接冈崎片段,形成完整的DNA分子
第20页:前导链与随后链
前导链、随后链与冈崎片段
- 前导链
- 合成方向与复制叉移动方向相同、进行连续复制的这一条新链
- 随后链
- 合成方向与复制叉移动方向相反、进行不连续复制的另一条新链
- 冈崎片段
- 随后链上不连续复制而成的DNA片段
- 方向
- 模板链走向 3′→5′,新链合成方向 5′→3′
第21页:逆转录
二、逆转录
- 概念与模式
- 以病毒RNA为模板,指导合成含有全部病毒遗传信息的DNA;酶与原料为 RDDP/dNTP
- 逆转录(酶)的意义
- (1)逆转录酶存在于所有致癌RNA病毒中,与病毒致癌有关
- (2)对中心法则进行了必要的补充
- (3)有助于基因工程的实施(用于获得目的基因)
第22页:DNA的损伤和修复
(三)DNA的损伤和修复
- 1、DNA的损伤
- 因素:紫外线照射、碱基和核苷类似物、抗菌素及其类似物
- 2、DNA的修复
- 修复方式:切除修复、SOS修复、重组修复、光修复
- 主要修复机制——切除修复
第23页:转录的学习目录
第三节 RNA的生物合成:本节讲清转录的概念与条件、转录与复制的主要区别、转录的起始延长与终止过程,以及真核细胞中转录后的加工和修饰。
- 一、转录的概念和条件
- 二、转录与复制的区别
- 三、转录的过程
- 四、转录后的加工和修饰
第24页:转录的概念和条件
一、转录的概念和条件
- 1、概念
- 以DNA为模板,指导RNA合成的过程
- 酶:DNA指导的RNA聚合酶(DDRP);原料:NTP
- 2、条件
- 模板链DNA、DDRP、NTP
- 意义
- 转录是基因表达的第一步,也是最关键的一步;通过转录把 DNA 的信息传递给 RNA
第25页:转录的过程
三、转录的过程
- 酶与DNA模板的结合
- DNA模板链、σ因子、β′亚基
- 转录的起始
- σ因子识别启动子,β亚基参与
- RNA链的延长
- NTP 依次加入,RNA 链延伸
- RNA链的终止与释放
- ρ蛋白参与终止
第26页:转录后的加工和修饰
四、转录后的加工和修饰(真核细胞)
- hnRNA → mRNA
- 核不均一RNA经加工成为成熟mRNA
- 加帽连尾
- 5′-端(首部):m7Gppp;3′-端(尾部):poly-A
- 剪辑加工
- 连接外显子(具有编码功能的序列),切除内含子(不具编码功能的序列)
第27页:蛋白质生物合成目录
第四节 蛋白质的生物合成:本节从翻译的概念出发,讲清参与翻译的三类RNA、原料与因子,进而展开核蛋白体循环的合成过程,最后联系干扰素与抗生素对蛋白质合成的影响。
- 一、概念
- 二、参与翻译所需的物质
- 三、蛋白质合成的过程
- 四、蛋白质生物合成与医学的关系
第28页:翻译的概念与参与物质
一、概念
- 翻译(蛋白质的生物合成)
- 以 mRNA 为模板,在其他 RNA 及因子的参与下合成蛋白质的过程
- 二、参与翻译所需的物质
- 1、三类 RNA(mRNA、tRNA、rRNA)
- 2、20种编码氨基酸(合成蛋白质的原料)
- 3、参与翻译的酶类
- 4、其它因子:起始因子、延长因子、终止和释放因子;K+、Mg2+;ATP、GTP
第29页:mRNA与密码子
mRNA在蛋白质合成中的作用
- 作用
- 提供直接模板
- 密码子(64种,分三类)
- 起始密码:1个(AUG,兼蛋氨酸)
- 终止密码:3个(UGA、UAA、UAG)
- 氨基酸信息码:61个
- 密码子的特点
- 密码的简并性、密码无标点符号、密码的通用性、密码的摆动性
第30页:tRNA在蛋白质合成中的作用
tRNA在蛋白质合成中的作用
- 活化与转运氨基酸
- tRNA的两个专用部位:3′-末端 CCA-OH(携带氨基酸的部位);反密码环顶端反密码子(识别 mRNA 上特定的密码子)
- 摆动现象:反密码子与密码子配对时第三位碱基配对较灵活(如 I 与 U、C、A 配对)
- mRNA 与 tRNA 反向平行配对(mRNA 5′→3′,tRNA 3′→5′)
第31页:rRNA与核蛋白体
rRNA在蛋白质合成中的作用
- 核蛋白体
- 由 RNA(rRNA)和多种蛋白质复合而成,是蛋白质生物合成的场所和装配机,由大小两个亚基组成
- 大亚基
- 有转肽酶活性和两个 tRNA 结合部位:给位(P位)、受位(A位)
- 小亚基
- 有 mRNA 结合部位
第32页:参与蛋白质合成的酶类
参与蛋白质合成的酶类
- 氨基酰-tRNA合成酶
- 催化氨基酸与其相应 tRNA 结合,生成氨基酰-tRNA
- 转肽酶
- 位于核蛋白体大亚基,催化肽键形成
第33页:蛋白质合成的过程
三、蛋白质合成的过程
- 1、氨基酸的活化
- 氨基酸 + tRNA →(氨基酰-tRNA合成酶,Mg2+,ATP)→ 氨基酰-tRNA
- 2、核蛋白体循环
- 起始、延长(进位、转肽、移位)、终止
- 3、后期的加工与修饰
- 切除N-端的蛋氨酸、部分肽段的水解、氨基酸残基的修饰、二硫键的形成
第34页:蛋白质合成与医学的关系
四、蛋白质生物合成与医学的关系
- 1、干扰素对蛋白质合成的影响
- 2、抗生素对蛋白质合成的影响
- 链霉素:抑制原核细胞蛋白质合成的起始,并导致错误阅读mRNA密码
- 四环素:与原核细胞30S亚基结合,抑制氨基酰-tRNA的结合
- 氯霉素:抑制原核细胞50S大亚基的转肽酶活性
- 红霉素:与原核细胞50S大亚基结合并抑制移位作用
- 环己亚氨:抑制真核生物60S大亚基的转肽酶活性
- 嘌呤霉素:是氨基酰-tRNA的类似物,结合在A位,造成未成熟肽链的终止,对真核、原核细胞均有效
第35页:核蛋白体循环:起始
核蛋白体循环(起始)
- mRNA 5′-端 m7Gppp 与 3′-端 poly-A 之间为编码区
- 起始密码 AUG 对应反密码 UAC,携带蛋氨酸(蛋)的 tRNA 进入 P 位
- 第二个密码 ACU(苏)对应的 tRNA 准备进入 A 位
说明:源文件本页为核蛋白体循环示意图字符,文字依图中标注整理,建议对照原课件图片核对。
第36页:核蛋白体循环:进位
核蛋白体循环(进位)
- A 位(受位)接受与 mRNA 密码子 ACU 相配的氨酰-tRNA(苏)
- P 位(给位)已结合蛋氨酰-tRNA
- 进位由延长因子参与,需 GTP 供能
说明:源文件本页为核蛋白体循环示意图字符,文字依图中标注整理,建议对照原课件图片核对。
第37页:核蛋白体循环:转肽
核蛋白体循环(转肽)
- 在大亚基转肽酶作用下,P 位上的蛋氨酸(或肽链)转移到 A 位氨基酸的氨基上,形成肽键
- A 位上形成二肽(蛋-苏),P 位 tRNA 空载
说明:源文件本页为核蛋白体循环示意图字符,文字依图中标注整理,建议对照原课件图片核对。
第38页:核蛋白体循环:移位
核蛋白体循环(移位)
- 核蛋白体沿 mRNA 向 3′-端移动一个密码子(三个核苷酸)
- 肽酰-tRNA 由 A 位移至 P 位,A 位空出准备接受下一个氨酰-tRNA
- 移位需延长因子与 GTP
说明:源文件本页为核蛋白体循环示意图字符,文字依图中标注整理,建议对照原课件图片核对。
第39页:核蛋白体循环:第二轮进位
核蛋白体循环(第二轮进位—转肽)
- 密码子 GCU 对应的丙氨酰-tRNA(丙)进入 A 位
- 转肽后 P 位携带三肽(蛋-苏-丙)
说明:源文件本页为核蛋白体循环示意图字符,文字依图中标注整理,建议对照原课件图片核对。
第40页:核蛋白体循环:再次移位
核蛋白体循环(再次移位—转肽)
- 移位后 A 位空出,等待下一个密码子对应的氨酰-tRNA
- 肽链随进位—转肽—移位循环不断延长
说明:源文件本页为核蛋白体循环示意图字符,文字依图中标注整理,建议对照原课件图片核对。
第41页:核蛋白体循环:终止
核蛋白体循环(终止)
- mRNA 上的终止密码(如 UGA)进入 A 位
- 释放因子识别终止密码,肽链水解释放
- 核蛋白体解离为大小亚基,mRNA 与 tRNA 释放
说明:源文件本页为核蛋白体循环示意图字符,文字依图中标注整理,建议对照原课件图片核对。
第42页:蛋白质合成附图过渡页
本页源文件仅含“返回主菜单”导航文字,依上下文位于核蛋白体循环图示与第五节基因工程之间,疑似为蛋白质合成相关附图或分节过渡页。
说明:源文件本页未提取到正文内容,仅有导航文字,建议对照原课件图片补充本页要点说明。
第43页:基因工程和聚合酶链反应
第五节 基因工程和聚合酶链反应
- 1、基因工程的概念
- 用人工方法将所要研究的基因(目的基因)在体外与载体DNA结合成重组DNA,然后引入宿主细胞,筛选出能表达重组DNA的活细胞,并加以纯化、传代、扩增成为克隆
- 2、基因工程的简要步骤
- 可归纳为分、切、接、转、筛五个字
- 3、聚合酶链反应(PCR)
- 体外DNA扩增法,基本原理同DNA复制
第44页:半保留复制示意
半保留复制示意
- 母链 3′→5′ 与 5′→3′ 两条链解开
- 各以一条母链为模板,按 A—T、G—C 配对合成新链
- 子代DNA各保留一条母链、新合成一条互补链
说明:源文件本页为复制示意图字符,走向建议对照原课件图片核对。
第45页:逆转录示意
逆转录示意
- 病毒RNA →(逆转录酶)→ RNA-DNA 杂交体
- 杂交体中的RNA被水解,再合成互补DNA链
- 最终形成病毒双链DNA,整合入宿主基因组
说明:源文件本页为示意图字符,细节建议对照原课件图片核对。
第46页:DNA损伤的切除修复
DNA损伤的切除修复
- 内切酶识别并在损伤部位附近切开
- 外切酶切除损伤的核苷酸片段
- DNA聚合酶以互补链为模板填补缺口
- DNA连接酶封口,恢复完整DNA链
第47页:RNA聚合酶与亚基组成
RNA聚合酶(转录酶)——DDRP
- 原核细胞中的DDRP
- 由五个亚基组成的全酶(α2ββ′σ)
- 核心酶
- α2ββ′
- σ(起始因子)
- 识别起始位点
- β′
- 结合DNA模板
- β
- 转录的主要酶(催化磷酸二酯键形成)
第48页:转录与复制的区别
转录与复制的区别
转录与复制的区别| 比较项目 | DNA复制 | RNA转录 |
|---|
| 原料 | dNTP | NTP |
|---|
| 碱基配对 | A与T,G与C | U与A,G与C |
|---|
| 催化的酶 | DDDP | DDRP |
|---|
| 模板 | 整个DNA分子的二条完整单链 | DNA分子上的某个基因中的一条链 |
|---|
| 加工与修饰 | 不需要 | 在真核细胞内需要 |
|---|
第49页:hnRNA加工示意
hnRNA内含子切除及外显子连接示意
- hnRNA:5′-端 m7Gppp、3′-端 poly-A,中间含外显子与内含子
- 经核酶(剪接体)作用切除内含子
- 连接酶将外显子连接,生成成熟 mRNA