15 第十四章 基因重组与基因工程.ppt

第1页：第十四章 基因重组与基因工程封面

第十四章 基因重组与基因工程封面

• 基因重组与基因工程Genetic Recombination and Genetic Engineering第十四章

第2页：第十四章 基因重组与基因工程章节目录

第十四章 基因重组与基因工程章节目录

• 第一节DNA的重组第二节重组DNA技术本章内容

第3页：第一节DNA的重组DNA

第一节DNA的重组DNA

• 第一节DNA的重组DNA Recombination

第4页：DNA重组接合作用(

DNA重组接合作用(

• DNA重组接合作用(conjugation)转化作用(transformation)转导作用(transduction)转座(transposition)同源重组(homologous recombination)位点特异的重组(site-specific recombination)

第5页：发生在同源序列间的重组称为同源重组(

发生在同源序列间的重组称为同源重组(

发生在同源序列间的重组

同源重组(homologousrecombination)，又称基本重组。是最基本的DNA重组方式，通过链的断裂和再连接，在两个DNA分子同源序列间进行单链或双链片段的交换。以E.coli的同源重组为例，了解同源重组机制的Holliday模型。

• 同源重组

第6页：Holliday模型中

Holliday模型中

• Holliday模型中，同源重组主要4个关键步骤
• 两个同源染色体DNA排列整齐
• 一个DNA的一条链断裂、并与另一个DNA对应的链连接，形成Holliday中间体
• 通过分支移动产生异源双链DNA
• Holliday中间体切开并修复，形成两个双链重组体DNA，分别为：片段重组体(patch recombinant)拼接重组体(splice recombinant)

第7页：片段重组体

片段重组体

片段重组体

切开的链与原来断裂的是同一条链，重组体含有一段异源双链区，其两侧来自同一亲本DNA。拼接重组体：切开的链并非原来断裂的链，重组体异源双链区的两侧来自不同亲本DNA。5´5´5´5´3´3´3´3´5´5´5´5´3´3´3´3´

第8页：内切酶(recBCD)DNA侵扰(

内切酶(recBCD)DNA侵扰(

• 内切酶(recBCD)DNA侵扰(recA)分支迁移(recA)内切酶(recBCD)DNA连接酶5´3´5´3´5´3´5´3´5´3´5´3´5´3´5´3´5´3´5´3´5´3´5´3´5´3´5´3´3´3´5´3´5´3´3´5´5´3´5´3´5´3´Holiday中间体5´3´5´3´5´3´5´3´

第9页：Holiday中间体5´3´5´3´5´

Holiday中间体5´3´5´3´5´

• Holiday中间体5´3´5´3´5´3´5´3´5´3´5´5´5´3´3´3´5´5´5´5´3´3´3´3´5´5´5´5´3´3´3´3´5´5´5´5´3´3´3´3´5´5´5´5´3´3´3´3´内切酶(ruvC)内切酶(ruvC)DNA连接酶DNA连接酶片段重组体拼接重组体

第10页：细菌的基因转移与重组

细菌的基因转移与重组

• 接合作用当细胞与细胞、或细菌通过菌毛相互接触时，质粒DNA从一个细胞（细菌）转移至另一细胞（细菌）的DNA转移称为接合作用(conjugation)。

第11页：可接合质粒如F 因子(F factor)

可接合质粒如F 因子(F factor)

• 可接合质粒如F 因子(F factor) 质粒——细菌染色体外的小型环状双链DNA分子

第12页：转化作用通过自动获取或人为地供给外源

转化作用通过自动获取或人为地供给外源

• 转化作用通过自动获取或人为地供给外源DNA，使细胞或培养的受体细胞获得新的遗传表型，称为转化作用(transformation)。

第13页：例：溶菌时

例：溶菌时

• 例：溶菌时，裂解的DNA片段被另一细菌摄取。

第14页：

第15页：转导作用当病毒从被感染的（供体）细胞释放

转导作用当病毒从被感染的（供体）细胞释放

• 转导作用当病毒从被感染的（供体）细胞释放出来、再次感染另一（供体）细胞时，发生在供体细胞与受体细胞之间的DNA转移及基因重组即为转导作用(transduction)。

第16页：

第17页：

第18页：位点特异重组位点特异重组(site-

位点特异重组位点特异重组(site-

• 位点特异重组位点特异重组(site-specificrecombination)是由整合酶催化，在两个DNA序列的特异位点间发生的整合。例
• λ噬菌体DNA的整合λ噬菌体的整合酶识别噬菌体和宿主染色体的特异靶位点发生选择性整合；反转录病毒整合酶可特异地识别、整合反转录病毒cDNA的长末端重复序列(longterminalrepeat,LTR)。

第19页：位点特异重组位点特异重组(site（续）

位点特异重组位点特异重组(site（续）

• 例
• 细菌的特异位点重组沙门氏菌H片段倒位决定鞭毛相转变

第20页：hix为反向重复序列

hix为反向重复序列

• hix为反向重复序列，它们之间的H片段可在Hin控制下进行特异位点重组(倒位)。H片段上有两个启动子P，其一驱动hin基因表达，另一正向时驱动H2和rH1基因表达，反向(倒位)时H2和rH1不表达。rH1为H1的阻遏蛋白基因。

第21页：H2鞭毛素阻遏蛋白Hin重组酶转位片段

H2鞭毛素阻遏蛋白Hin重组酶转位片段

• H2鞭毛素阻遏蛋白Hin重组酶转位片段hinH2IH1H1鞭毛素hinH2IDNA启动序列H1启动序列沙门氏菌H片段倒位决定鞭毛相转变

第22页：H2鞭毛素阻遏蛋白Hin重组酶转位（续）

H2鞭毛素阻遏蛋白Hin重组酶转位（续）

• 例
• 免疫球蛋白基因的重排免疫球蛋白(Ig)，由两条轻链(L链)和两条重链(H链)组成，分别由三个独立的基因族编码，其中两个编码轻链(
• 和
• )，一个编码重链。轻链的基因片段：重链的基因片段：L V J CL V D J C

第23页：重链(IgH)基因的V-D-J重排和轻链

重链(IgH)基因的V-D-J重排和轻链

• 重链(IgH)基因的V-D-J重排和轻链(IgL)基因的V-J重排均发生在特异位点上。在V片段的下游，J片段的上游以及D片段的两侧均存在保守的重组信号序列(recombinationsignalsequence,RSS)。此重排的重组酶基因rag(recombinationactivatinggene)共有两个，分别产生蛋白质RAG1和RAG2。CACAGTG(12/23)ACAAAAACCGTGTCCAC TGTTTTTGG重组信号序列基因片段

第24页：V片段J片段RSSRSS间插

V片段J片段RSSRSS间插

• V片段J片段RSSRSS间插DNAOHOHVJ单链切开RAG1RAG2分子内转酯反应单链切开转移核苷酸修复、连接免疫球蛋白基因重排过程

第25页：转座重组由插入序列和转座子介导的基因移位

转座重组由插入序列和转座子介导的基因移位

• 转座重组由插入序列和转座子介导的基因移位或重排称为转座(transposition)。

第26页：插入序列(insertion

插入序列(insertion

• 插入序列(insertion sequences, IS)组成：二个分离的反向重复(inverted repeats, IR)序列特有的正向重复序列一个转座酶（transposase)编码基因IRTransposase GeneIR发生形式：保守性转座(conservative transposition)复制性转座(duplicative transposition)
• 插入序列转座

第27页：插入序列的复制性转座复制

插入序列的复制性转座复制

第28页：转座子(transposons) ——可

转座子(transposons) ——可

• 转座子(transposons) ——可从一个染色体位点转移到另一位点的分散重复序列。转座子组成：反向重复序列转座酶编码基因抗生素抗性等有用的基因IRIRTransposase Gene有用基因
• 转座子转座

第29页：

第30页：由转座子介导的转座

由转座子介导的转座

第31页：第二节重组DNA技术DNA

第二节重组DNA技术DNA

• 第二节重组DNA技术DNA Recombination Technique

第32页：重组DNA技术的发展史1865年G.

重组DNA技术的发展史1865年G.

• 重组DNA技术的发展史1865年G.J.Mendel的豌豆杂交试验1944年O.T.Avery的肺炎球菌转化实验1973年美国斯坦福大学的科学家构建第一个重组DNA分子1977年美国南旧金山由博耶和斯旺森建立世界上第一家遗传工程公司，专门应用重组DNA技术制造医学上重要的药物。1980年开始建造第一家应用重组DNA技术生产胰岛素的工厂1997年英国罗林研究所成功的克隆了多莉

第33页：相关概念

相关概念

• DNA克隆
• 工具酶
• 目的基因
• 基因载体
• 基本原理

第34页：重组DNA技术相关概念克隆(clone)

重组DNA技术相关概念克隆(clone)

• 重组DNA技术相关概念克隆(clone)来自同一始祖的相同副本或拷贝的集合。获取同一拷贝的过程称为克隆化(cloning)，即无性繁殖。
• DNA克隆

第35页：技术水平

技术水平

技术水平

分子克隆(molecular clone)即DNA 克隆细胞克隆个体克隆（动物或植物）

第36页：DNA克隆应用酶学的方法

DNA克隆应用酶学的方法

• DNA克隆应用酶学的方法，在体外将各种来源的遗传物质（同源的或异源的、原核的或真核的、天然的或人工的DNA）与载体DNA接合成一具有自我复制能力的DNA分子——复制子(replicon)，继而通过转化或转染宿主细胞，筛选出含有目的基因的转化子细胞，再进行扩增提取获得大量同一DNA分子，也称基因克隆或重组DNA(recombinantDNA)。

第37页：生物技术工程

生物技术工程

生物技术工程

基因工程、蛋白质工程、酶工程、细胞工程等目的

• 分离获得某一感兴趣的基因或DNA
• 获得感兴趣基因的表达产物（蛋白质）基因工程(genetic engineering)——实现基因克隆所用的方法及相关的工作称基因工程，又称重组DNA工艺学。

第38页：工具酶

工具酶

• 限制性核酸内切酶
• DNA聚合酶Ⅰ
• 逆转录酶
• T4DNA连接酶
• 碱性磷酸酶
• 末端转移酶
• TaqDNA聚合酶

第39页：重组DNA技术中常用的工具酶工具酶功能限

重组DNA技术中常用的工具酶工具酶功能限

• 重组DNA技术中常用的工具酶工具酶功能限制性核酸内切酶识别特异序列，切割DNADNA连接酶催化DNA中相邻的5´磷酸基和3´羟基末端之间形成磷酸二酯键，使DNA切口封合或使两个DNA分子或片段连接DNA聚合酶Ⅰ
• 合成双链cDNA分子或片段连接
• 缺口平移制作高比活探针
• DNA序列分析
• 填补3´末端Klenow片段又名DNA聚合酶I大片段，具有完整DNA聚合酶I的5′
• 3′聚合、3′
• 5′外切活性，而无5′
• 3′外切活性。常用于cDNA第二链合成，双链DNA 3′末端标记等反转录酶
• 合成cDNA
• 替代DNA聚合酶I进行填补，标记或DNA序列分析多聚核苷酸激酶催化多聚核苷酸5´羟基末端磷酸化，或标记探针末端转移酶在3´羟基末端进行同质多聚物加尾碱性磷酸酶切除末端磷酸基

第40页：限制性核酸内切酶定义限制性核酸内切酶(

限制性核酸内切酶定义限制性核酸内切酶(

• 限制性核酸内切酶定义限制性核酸内切酶(restrictionendonuclease,RE)是识别DNA的特异序列,并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类内切酶。GGATCCCCTAGGGCCTAGGATCCG+Bam HⅠ

第41页：作用与甲基化酶共同构成细菌的限制修饰系统

作用与甲基化酶共同构成细菌的限制修饰系统

• 作用与甲基化酶共同构成细菌的限制修饰系统，限制外源DNA，保护自身DNA。分类Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ（基因工程技术中常用Ⅱ型）

第42页：第一个字母取自产生该酶的细菌属名

第一个字母取自产生该酶的细菌属名

• 第一个字母取自产生该酶的细菌属名，用大写；第

第三个字母

该细菌的种名，用小写；第四个字母代表株；用罗马数字表示发现的先后次序。命名HindⅢ属系株序Haemophilus influenzae d株流感嗜血杆菌d株的第三种酶

第43页：Ⅱ类酶识别序列特点——回文结构(

Ⅱ类酶识别序列特点——回文结构(

• Ⅱ类酶识别序列特点——回文结构(palindrome)切口：平端切口、粘端切口GGATCCCCTAGG

第44页：Bam HⅠ

Bam HⅠ

• Bam HⅠGTCCAGGCCTAGGATCCG+GGATCCCCTAGGHindⅡGTCGACCAGCTGGACCTG+平端切口粘端切口

第45页：同功异源酶来源不同的限制酶

同功异源酶来源不同的限制酶

• 同功异源酶来源不同的限制酶，但能识别和切割同一位点，这些酶称同功异源酶。GGATCCCCTAGGGCCTAGGATCCG+Bam HⅠGGATCCCCTAGGGCCTAGGATCCG+BstⅠ

第46页：同尾酶有些限制性内切酶虽然识别序列不完全

同尾酶有些限制性内切酶虽然识别序列不完全

• 同尾酶有些限制性内切酶虽然识别序列不完全相同，但切割DNA后，产生相同的粘性末端，称为同尾酶。这两个相同的粘性末端称为配伍未端(compatibleend)。BamHⅠBglⅡGGATCCCCTAGGAGATCTTCTAGAGCCTAGGATCCG++ATCTAGGATCTA

第47页：目的基因

目的基因

• cDNA (complementary DNA)
• 基因组DNA (genomic DNA)

第48页：基因载体定义为携带目的基因

基因载体定义为携带目的基因

基因载体

携带目的基因，实现其无性繁殖或表达有意义的蛋白质所采用的一些DNA分子。常用载体质粒DNA噬菌体DNA病毒DNA

第49页：克隆载体(cloningvector)为

克隆载体(cloningvector)为

• 克隆载体(cloningvector)为使插入的外源DNA序列被扩增而特意设计的载体称为克隆载体。表达载体(expressionvector)为使插入的外源DNA序列可转录翻译成多肽链而特意设计的载体称为表达载体。

第50页：载体的选择标准

载体的选择标准

• 能自主复制；
• 具有两个以上的遗传标记物，便于重组体的筛选和鉴定；
• 有克隆位点（外源DNA插入点），常具有多个单一酶切位点，称为多克隆位点；
• 分子量小，以容纳较大的外源DNA。

第51页：质粒(plasmid)特点能在宿主细胞内

质粒(plasmid)特点能在宿主细胞内

1. 质粒(plasmid)特点能在宿主细胞内独立自主复制；带有某些遗传信息,会赋予宿主细胞一些遗传性状。

第52页：

第53页：

第54页：λ噬菌体DNA改造系统λgt系列（插入型

λ噬菌体DNA改造系统λgt系列（插入型

• λ噬菌体DNA改造系统λgt系列（插入型，适用cDNA克隆）EMBL系列（置换型，适用基因组克隆）

1. 噬菌体(phage)M13噬菌体DNA改造系统（含lacZ基因）M13mp系列pUC系列

第55页：粘性质粒(cosmid)

粘性质粒(cosmid)

第56页：酵母人工染色体(yeast

酵母人工染色体(yeast

• 酵母人工染色体(yeast artificial chromosome, YAC)细菌人工染色体(bacterial artificial chromosome, BAC)动物病毒DNA改造的载体（如腺病毒，腺病毒相关病毒，逆转录病毒）其他

第57页：重组DNA技术基本原理基本原理目的基因的

重组DNA技术基本原理基本原理目的基因的

• 重组DNA技术基本原理基本原理目的基因的获取DNA导入受体菌外源基因与载体的连接克隆载体的选择和构建重组体的筛选克隆基因的表达

第58页：以质粒为载体的DNA克隆过程

以质粒为载体的DNA克隆过程

第59页：目的基因的获取

目的基因的获取

化学合成法要求

已知目的基因的核苷酸序列或其产物的氨基酸序列。

1. 基因组DNA文库(genomic DNA library)
2. cDNA文库(cDNA library)
3. 聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)（见第22章）

第60页：

第61页：组织或细胞染色体DNA基因片断克隆载体重

组织或细胞染色体DNA基因片断克隆载体重

• 组织或细胞染色体DNA基因片断克隆载体重组DNA分子含重组分子的转化菌限制性内切酶受体菌基因组DNA文库存在于转化细胞内由克隆载体所携带的所有基因组DNA的集合* 从基因组DNA文库获取目的基因

第62页：限制酶切位点限制酶消化除去中间片段

限制酶切位点限制酶消化除去中间片段

• 限制酶切位点限制酶消化除去中间片段cos LR coscos L左臂R cos右臂真核生物染色体DNA限制酶部分消化外源DNA与载体DNA混合连接反应体外包装用重组噬菌体感染大肠杆菌~20 Kb DNA 片段cos LR cos~20 Kb 外源DNA 片段基因文库

第63页：mRNAcDNA双链cDNA重组DNA分

mRNAcDNA双链cDNA重组DNA分

• mRNAcDNA双链cDNA重组DNA分子cDNA文库反转录酶载体受体菌复制* 从cDNA文库获取目的基因逆转录酶A A A AT T T TAAAASI核酸酶DNA聚合酶Ⅰ碱水解T T T T

第64页：外源基因与载体的连接

外源基因与载体的连接

1. 粘性末端连接方式：

• 同一限制酶切位点连接
• 不同限制酶切位点连接配伍末端连接非配伍末端连接
• 克隆载体的选择和构建

第65页：Bam HⅠ切割反应

Bam HⅠ切割反应

• Bam HⅠ切割反应GGATCCCCTAGGT4DNA连接酶15ºCGATCCGGCCTAG+目的基因用Bam HⅠ切割载体DNA用Bam HⅠ切割重组体载体自连目的基因自连同一限制酶切位点连接

第66页：不同限制酶切位点（非配伍末端）的连接

不同限制酶切位点（非配伍末端）的连接

• 不同限制酶切位点（非配伍末端）的连接Eco RⅠ切割位点BglⅡ切割位点+EcoRⅠ+ BglⅡ双酶切Eco RⅠ+ BglⅡ双酶切T4DNA连接酶15ºC重组体配伍末端的连接情况和同一限制酶切位点连接相似。

第67页：平端连接适用于

平端连接适用于

平端连接适用于

限制性内切酶切割产生的平端粘端补齐或切平形成的平端

第68页：目的基因载体限制性内切酶限制性内切酶

目的基因载体限制性内切酶限制性内切酶

• 目的基因载体限制性内切酶限制性内切酶T4 DNA连接酶15ºC重组体载体自连目的基因自连

第69页：同聚物加尾连接在末端转移酶(

同聚物加尾连接在末端转移酶(

1. 同聚物加尾连接在末端转移酶(terminal transferase)的作用下，在DNA片段末端加上同聚物序列、制造出粘性末端，再进行粘端连接。

第70页：5´3´3´5´载体DNA5´3´3´

5´3´3´5´载体DNA5´3´3´

• 5´3´3´5´载体DNA5´3´3´5´目的基因限制酶或机械剪切限制酶5´3´3´5´5´3´T(T)nT T(T)nT 3´5´5´3´3´5´5´3´A(A)nAA(A)nA3´5´λ-核酸外切酶λ-核酸外切酶末端转移酶+ dATP末端转移酶+ dTTPT(T)nTA(A)nAA(A)nA T(T)nTT4DNA连接酶15ºC重组体

第71页：人工接头(linker)连接由平端加上新

人工接头(linker)连接由平端加上新

1. 人工接头(linker)连接由平端加上新的酶切位点，再用限制酶切除产生粘性末端，而进行粘端连接。

第72页：人工接头及其应用CCGAATTCG

人工接头及其应用CCGAATTCG

• 人工接头及其应用CCGAATTCG GGCTTAAGC5´-3´-Eco RⅠEco RⅠEco RⅠEco RⅠ

第73页：受体菌条件安全宿主菌限制酶和重组酶缺陷处

受体菌条件安全宿主菌限制酶和重组酶缺陷处

• 受体菌条件安全宿主菌限制酶和重组酶缺陷处于感受态(competent)导入方式转化(transformation)转染(transfection)感染(infection)
• 重组DNA导入受体菌

第74页：重组体的筛选

重组体的筛选

1. 直接选择法

• 抗药性标记选择
• 标志补救(marker rescue)
• 分子杂交法原位杂交Southern印迹

1. 免疫学方法如免疫化学方法及酶免检测分析等

第75页：(插入失活法)抗药性标记选择

(插入失活法)抗药性标记选择

第76页：组氨酸缺陷型大肠杆菌无组氨酸的培养基酵母

组氨酸缺陷型大肠杆菌无组氨酸的培养基酵母

• 组氨酸缺陷型大肠杆菌无组氨酸的培养基酵母咪唑甘油磷酸脱水酶基因促进组氨酸合成λDNA重组体标志补救

第77页：α互补

α互补

第78页：α 互补的检测

α 互补的检测

第79页：原位杂交

原位杂交

第80页：Southern印迹

Southern印迹

第81页：鸡的β肌球蛋白的克隆和检出

鸡的β肌球蛋白的克隆和检出

第82页：重组DNA技术操作过程可形象归纳为小结分

重组DNA技术操作过程可形象归纳为小结分

• 重组DNA技术操作过程可形象归纳为小结分分离目的基因切限制酶切目的基因与载体接拼接重组体转转入受体菌筛筛选重组体

第83页：重组DNA技术操作的主要步骤载体质粒噬菌

重组DNA技术操作的主要步骤载体质粒噬菌

• 重组DNA技术操作的主要步骤载体质粒噬菌体病毒目的基因（外源基因）基因组DNAcDNA人工合成PCR产物限制酶消化开环载体DNA目的基因连接酶重组体转化体外包装，转染带重组体的宿主筛选表型筛选酶切电泳鉴定菌落原位杂交

第84页：表达体系的建立表达载体的构建受体细胞的建

表达体系的建立表达载体的构建受体细胞的建

• 表达体系的建立表达载体的构建受体细胞的建立表达产物的分离纯化
• 克隆基因的表达

第85页：原核表达体系（E.coli表达体系最为常

原核表达体系（E.coli表达体系最为常

1. 原核表达体系（E.coli表达体系最为常用）标准：选择标志强启动子翻译调控序列多接头克隆位点E.coli表达体系的不足不宜表达真核基因组DNA不能加工表达的真核蛋白质表达的蛋白质常形成不溶性包涵体(inclusion body)很难表达大量可溶性蛋白

第86页：大鼠胰岛素原cDNA的表达和分泌

大鼠胰岛素原cDNA的表达和分泌

第87页：

第88页：优点：可表达克隆的cDNA及真核基因组

优点：可表达克隆的cDNA及真核基因组

优点

可表达克隆的cDNA及真核基因组DNA可适当修饰表达的蛋白质表达产物分区域积累点缺：操作技术难、费时、经济转染——将表达载体导入真核细胞的过程方法：磷酸钙转染DEAE葡聚糖介导转染电穿孔脂质体转染显微注射

1. 真核表达体系酵母、昆虫、乳类动物细胞

第89页：表达载体pFASTBACI 的物理图谱

表达载体pFASTBACI 的物理图谱

第90页：

第91页：疾病基因的发现与克隆根据基因定位克隆之并

疾病基因的发现与克隆根据基因定位克隆之并

• 疾病基因的发现与克隆根据基因定位克隆之并研究其性质，而认识疾病的分子机制。
• 重组技术与医学的关系
• 生物制药

第92页：重组DNA医药产品产品功能组织胞浆素原激

重组DNA医药产品产品功能组织胞浆素原激

• 重组DNA医药产品产品功能组织胞浆素原激活剂抗凝血液因子VIII促进凝血颗粒细胞-巨噬细胞集落剌激因子剌激白细胞生成促红细胞生成素剌激白细胞生成生长因子(bFGF, EGF)刺激细胞生长与分化生长素治疗侏儒症胰岛素治疗糖尿病干扰素(
• 1b,
• 2a,
• 2b,
• )抗病毒感染及某些肿瘤白细胞介素激活、剌激各类白细胞超氧化物歧化酶抗组织损伤单克隆抗体利用其结合特异性进行诊断试验、肿瘤导向治疗乙肝疫苗(CHO, 酵母)预防乙肝口服重组B亚单位菌体霍乱菌苗预防霍乱

第93页：基因诊断(

基因诊断(

• 基因诊断(geneticdiagnosis)是利用分子生物学及分子遗传的技术和原理，在DNA水平分析、鉴定遗传疾病所涉及基因的置换、缺失或插入等突变。
• 基因诊断基本过程区分或鉴定DNA的异常分离、扩增待测的DNA片断

第94页：标准. 能正确扩增靶基因

标准. 能正确扩增靶基因

• 标准. 能正确扩增靶基因；. 能准确区分单个碱基的差别；. 本底或噪声低，不干扰DNA的鉴定;. 便于完全自动化操作，适合大面积、大人群普查。

第95页：基因治疗定义基因治疗(gene

基因治疗定义基因治疗(gene

• 基因治疗定义基因治疗(gene therapy)是向有功能缺陷的细胞补充相应功能的基因，以纠正或补偿其基因的缺陷，从而达到治疗的目的。方式体细胞基因治疗(somatic cell gene therapy)性细胞基因治疗(germ line gene therapy)

第96页：产前诊断

产前诊断

1. 携带者测试
2. 症候前诊断
3. 遗传病易感性

• 遗传疾病的预防