19 第二十二章 常用分子生物学技术的原理及其应用.ppt

第1页：常用分子生物学技术的原理及其应用封面

常用分子生物学技术的原理及其应用封面

• 医本<生物化学>周爱儒第六版第二十二章常用分子生物学技术的原理及其应用The Popular Technology in Molecular Biology: Principle and Application

第2页：第一节分子杂交与印迹技术

第一节分子杂交与印迹技术

• 第一节分子杂交与印迹技术Molecular Hybridization andBlotting Technology

第3页：一. 分子杂交(nucleic

一. 分子杂交(nucleic

• 一. 分子杂交(nucleic acid hybridization)不同来源的单链核酸经退火形成双链结构的过程。DNA DNADNA RNA基础：核酸的变性与退火二. 核酸探针(probe):标记的DNA或RNA一小段用同位素、生物素或荧光染料标记其末端或全链的已知序列的多聚核苷酸，与固定在NC膜上的核酸结合，判断是否有同源的核酸分子存在。

第4页：三.印迹技术将在凝胶中分离的生物大分子转

三.印迹技术将在凝胶中分离的生物大分子转

• 三.印迹技术将在凝胶中分离的生物大分子转移(印迹)或直接放在固定化介质上并加以检测分析的技术。链接DNA印迹技术(Southern bloting)RNA印迹技术(Northern bloting)蛋白质印迹技术(Western bloting)链接其它: 斑点印迹、原位杂交、DNA chip。杂交及印迹技术的意义:亲缘关系分析, 遗传病分析等

第5页：第二节PCR技术的原理与应用

第二节PCR技术的原理与应用

• 第二节PCR技术的原理与应用Polymerase chain reaction

第6页：一. 聚合酶链式反应(

一. 聚合酶链式反应(

• 一. 聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)

全称为聚合酶链反应,

一种对特定的DNA片段在体外进行快速扩增的技术,可以将微量目的DNA片段扩增一百万倍以上。

• Taq DNA聚合酶

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第8页：PCR的基本反应步骤变性95˚C延伸

PCR的基本反应步骤变性95˚C延伸

• PCR的基本反应步骤变性95˚C延伸72˚C退火Tm-5˚C2n

第9页：模板DNA

模板DNA

• 特异性引物
• 耐热DNA聚合酶
• 底物dNTPs
• Mg2+三. PCR体系基本组成：一对引物决定了所扩增的DNA的区域。

第10页：四. PCR的主要用途

四. PCR的主要用途

• 目的基因的克隆
• 基因的体外突变
• DNA和RNA的微量分析
• DNA序列测定
• 基因突变分析

第11页：五. PCR特点快速

五. PCR特点快速

• 五. PCR特点快速、特异、灵敏、简便。可用于极微量，甚至单个DNA模板的体外分子克隆。几种重要的PCR技术：RT-PCR、原位PCR、实时PCR。（锚定PCR, 反向PCR, 多重PCR, 定量PCR, 免疫PCR，以及具前沿性的简并PCR技术，DDRT-PCR，AP-PCR，RFLP-PCR，IS-PCR等）

第12页：第三节核酸序列分析Nucleic

第三节核酸序列分析Nucleic

• 第三节核酸序列分析Nucleic acid sequenceanalysis

第13页：核苷酸序列分析

核苷酸序列分析

1. Sanger双脱氧核苷酸末端终止法链接原料：单链模板DNA引物*DNA聚合酶Ⅰ底物*：dATP、dGTP、dCTP、dTTPddNTP2. 序列分析的自动化链接

第14页：第四节基因文库Gene

第四节基因文库Gene

• 第四节基因文库Gene library

第15页：基因文库是指一个包含了某一生物体全部

基因文库是指一个包含了某一生物体全部

基因文库

指一个包含了某一生物体全部DNA序列的克隆群体。

• 基因组文库
• cDNA文库

第16页：第五节疾病相关基因的克隆与鉴定

第五节疾病相关基因的克隆与鉴定

• 第五节疾病相关基因的克隆与鉴定Cloning and identification ofdisease relative gene(略)

第17页：第六节遗传修饰动物模型的建立及应用

第六节遗传修饰动物模型的建立及应用

• 第六节遗传修饰动物模型的建立及应用The establishment andapplication of heredity-modified animal model

第18页：一. 转基因技术采用基因转移技术使目的基

一. 转基因技术采用基因转移技术使目的基

• 一. 转基因技术采用基因转移技术使目的基因整合入受精卵细胞或胚胎干细胞，然后将细胞导入动物子宫，使之发育成个体。二. 核转移技术即动物整体克隆技术，将动物体细胞核全部导入另一个体的去核的受精卵内，使之发育成个体。三. 基因剔除技术也称基因靶向灭活。

第19页：第七节生物芯片技术

第七节生物芯片技术

• 第七节生物芯片技术Biological chip technology

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第21页：第八节蛋白质相互作用研究技术

第八节蛋白质相互作用研究技术

• 第八节蛋白质相互作用研究技术Research technology ofinteraction of protein

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第24页：酵母双杂交系统的应用

酵母双杂交系统的应用

• 分析已知蛋白之间的相互作用
• 对蛋白质功能域的分析
• 分析未知蛋白相互作用
• 绘制蛋白质相互作用系统图
• 在药物设计中的应用

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第27页：三种印迹技术的比较

三种印迹技术的比较

第28页：实时PCR技术原理

实时PCR技术原理

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