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05 第四章 微生物的营养.ppt

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本课件为微生物学第四章「微生物的营养」,从微生物的化学组成出发,依次讲解碳源、氮源、能源、生长因子、无机盐和水六大营养要素及其来源谱系;随后按碳源、能源与电子供体的不同介绍光能无机自养型等四种营养类型及其可变性,并比较营养物质进入细胞的四种运输方式,最后系统说明培养基的配置原则、理化条件与常见类型。

第四章微生物的营养章节封面,标示本章主题与营养要素、营养类型等内容主线
营养与营养物质定义页,说明营养是微生物获得和利用营养物质的过程
微生物化学组成饼图,区分主要元素与微量元素及其占细胞干重比例
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第1页:第四章微生物的营养封面

第四章微生物的营养:第一节 微生物的营养六要素;第二节 微生物的营养类型;第三节 营养物质进入细胞的方式;第四节 培养基。

第2页:营养与营养物质的概念

营养物质是微生物生存的物质基础,而营养是微生物维持和延续其生命形式的一种生理过程。

营养物质
能够满足机体生长、繁殖和完成各种生理活动所需要的物质
营养
微生物获得和利用营养物质的过程

第3页:微生物的化学组成

第一节微生物的营养六要素 一、微生物的化学组成:

  • 主要元素:碳、氢、氧、氮、磷、硫、钾、镁、钙等,占细菌细胞干重的 97%
  • 微量元素:锌、锰、氯、钼、硒、钴、铜等

第4页:微生物的营养六要素

二、微生物的营养要素六要素:碳源、氮源、能源、生长因子、无机盐和水。营养物质按照它们在机体中的生理作用不同,可以区分成六大类。

1.碳源:在微生物生长过程中能为微生物提供碳素来源的物质。

碳源谱:有机碳(供异养微生物利用)、无机碳(供自养微生物利用)。

第5页:碳源谱与常用碳源

微生物利用的碳源物质主要有糖类、有机酸、醇、脂类、烃、CO2 及碳酸盐等。目前在微生物工业发酵中所利用的碳源物质主要是单糖、淀粉、麸皮、米糠等。对于为数众多的化能异养微生物来说,碳源是兼有能源功能的营养物。

第6页:氮源谱

1.氮源:凡是能被用来构成菌体物质中或代谢产物中氮素来源的营养物质称为氮源。

氮源谱:

  • 有机氮:蛋白质、核酸、氨基酸、尿素等
  • 无机氮:NH3、铵盐、硝酸盐、N2 等

第7页:按氮源划分的生物类型

按氮源的不同生物可分为:

  • 氨基酸自养型生物:能利用尿素、铵盐、硝酸盐甚至氮气的生物
  • 氨基酸异养型生物:不能利用上述简单氮源,需要外源氨基酸的生物

常用的蛋白质类氮源包括蛋白胨、鱼粉、蚕蛹、黄豆饼粉、玉米浆、牛肉浸膏、酵母浸膏等。

注:源文件「氨基酸自异养型生物」一句表述有误,按微生物学教材口径更正为「氨基酸异养型生物」。

第8页:能源与能源谱

3.能源:能为微生物的生命活动提供最初能量来源的营养物或辐射能。

能源谱:

  • 化学物质:有机物(化能异养微生物的能源)、无机物(化能自养微生物的能源)
  • 辐射能:光能自养和光能异养微生物的能源

第9页:微生物对生长因子的需要量

4.生长因子:那些微生物生长所必需而且需要量很小,但微生物自身不能合成或合成量不足以满足机体生长需要的有机化合物。

几种微生物对生长因子的需要量
微生物生长因子需要量(mL-1)
Ⅲ型肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)胆碱6 μg
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)硫胺素0.5 ng
白喉棒杆菌(Corynebacterium diphtheriae)β-丙氨酸1.5 μg
破伤风梭状芽孢杆菌(Clostridium tetani)尿嘧啶0~4 μg
肠膜状串珠菌(Leuconostoc mesenteroides)吡哆醛0.025 μg

第10页:无机盐与矿质元素

5.矿质元素的作用:

  • 参与微生物中氨基酸和酶的组成
  • 调节微生物的原生质胶体状态,维持细胞的渗透与平衡
  • 酶的激活剂

根据微生物对矿质元素需要量大小可分为:

  • 大量元素:Na、K、Mg、Ca、S、P 等
  • 微量元素:锌、锰、钠、氯、钼、硒、钴、铜、钨、镍、硼等,通常需要量在 10-6~10-8 mol/L

第11页:水的生理功能

6.水的生理功能主要有:

  • 起到溶剂与运输介质的作用
  • 参与细胞内一系列化学反应
  • 维持蛋白质、核酸等生物大分子稳定的天然构象
  • 通过水合作用与脱水作用控制由多亚基组成的结构
  • 热的良好导体

第12页:营养类型的划分依据

第二节微生物的营养类型:

  • 按生长所需要的营养物质:异养型生物、自养型生物
  • 按生物生长过程中能量的来源:光能营养型、化能营养型

第13页:微生物的四种营养类型

根据碳源、能源及电子供体性质的不同,可将微生物分为:

  • 光能无机自养型(photolithoautotrophy)
  • 光能有机异养型(photoorganoheterotrophy)
  • 化能无机自养型(chemolithoautotrophy)
  • 化能有机异养型(chemoorganoheterotrophy)

第14页:光能无机自养型

1.光能无机自养型(光能自养型):

  • 能以 CO2 为唯一或主要碳源
  • 进行光合作用获取生长所需要的能量
  • 以无机物如 H2、H2S、S 等作为供氢体或电子供体,使 CO2 还原为细胞物质

例如,藻类及蓝细菌和植物一样,以水为电子供体(供氢体),进行产氧型的光合作用合成细胞物质;而红硫细菌以 H2S 为电子供体产生细胞物质,并伴随硫元素的产生。

反应式:CO2 + 2H2S —(光能、光合色素)→ [CH2O] + 2S + H2O

第15页:光能有机异养型

2.光能有机异养型(光能异养型):

  • 不能以 CO2 为主要或唯一的碳源
  • 以有机物作为供氢体,利用光能将 CO2 还原为细胞物质
  • 在生长时大多数需要外源的生长因子

例如,红螺菌属中的一些细菌能利用异丙醇作为供氢体,将 CO2 还原成细胞物质,同时积累丙酮。

反应式:2CH3CHOHCH3 + CO2 —(光能、光合色素)→ 2CH3COCH3 + [CH2O] + H2O

第16页:化能无机自养型

3.化能无机自养型(化能自养型):

  • 生长所需要的能量来自无机物氧化过程中放出的化学能
  • 以 CO2 或碳酸盐作为唯一或主要碳源进行生长,利用 H2、H2S、Fe2+、NH3 或 NO2- 等作为电子供体使 CO2 还原成细胞物质

化能无机自养型只存在于微生物中,可在完全无机及无光的环境中生长,广泛分布于土壤及水环境中,参与地球物质循环。

第17页:化能有机异养型

4.化能有机异养型(化能异养型):

  • 生长所需要的能量均来自有机物氧化过程中放出的化学能
  • 生长所需要的碳源主要是一些有机化合物,如淀粉、糖类、纤维素、有机酸等
  • 有机物通常既是碳源也是能源

大多数细菌、真菌、原生动物都是化能有机异养型微生物,所有致病微生物均为化能有机异养型微生物。

第18页:营养类型的可变性

不同营养类型之间的界限并非绝对:异养型微生物并非绝对不能利用 CO2;自养型微生物也并非不能利用有机物进行生长;有些微生物在不同生长条件下生长时,其营养类型也会发生改变。

例如紫色非硫细菌(purple nonsulphur bacteria):

  • 没有有机物时,同化 CO2,为自养型微生物
  • 有机物存在时,利用有机物进行生长,为异养型微生物
  • 光照和厌氧条件下,利用光能生长,为光能营养型微生物
  • 黑暗与好氧条件下,依靠有机物氧化产生的化学能生长,为化能营养型微生物

微生物营养类型的可变性无疑有利于提高其对环境条件变化的适应能力。

第19页:营养物质进入细胞的影响因素

第三节营养物质进入细胞的方式:营养物质能否进入细胞取决于三个方面的因素:

  • 营养物质本身的性质(相对分子量、质量、溶解性、电负性等)
  • 微生物所处的环境(温度、pH 等)
  • 微生物细胞的透过屏障(原生质膜、细胞壁、荚膜等)

第20页:物质运输方式的分类

根据物质运输过程的特点,可将物质的运输方式分为:

  • 自由扩散
  • 促进扩散
  • 主动运输
  • 基团转移

第21页:自由扩散

1.自由扩散:原生质膜是一种半透性膜,营养物质通过原生质膜上的小孔,由高浓度的胞外环境向低浓度的胞内进行扩散。

特点:

  • 物质在扩散过程中没有发生任何反应
  • 不消耗能量,不能逆浓度运输
  • 运输速率与膜内外物质的浓度差成正比

第22页:

第23页:促进扩散

2.促进扩散(协助扩散)特点:

  • 不消耗能量
  • 参与运输的物质本身的分子结构不发生变化
  • 不能进行逆浓度运输
  • 运输速率与膜内外物质的浓度差成正比
  • 需要载体参与

第24页:

第25页:

第26页:基团移位(PTS系统)

4.基团移位:又称磷酸烯醇式丙酮酸—磷酸糖转移酶运输系统(PTS)。基团移位是另一种类型的主动运输,它与主动运输方式的不同之处在于它有一个复杂的运输系统来完成物质的运输,而物质在运输过程中发生化学变化。

PTS 通常由五种蛋白质组成,包括酶Ⅰ、酶Ⅱ(包括 a、b、c 三种亚基)和一种低相对分子量的热稳定蛋白质(HPr)。

反应过程:PEP-P + HPr → HPr-P + 丙酮酸;HPr-P + 糖 → 糖-P + HPr

第27页:

第28页:四种运送营养方式的比较

四种运送营养方式的比较:

单纯扩散、促进扩散、主动运输与基团移位的比较
比较项目单纯扩散促进扩散主动运输基团移位
特异载体蛋白无有有有
运送速度慢快快快
溶质运送方向由浓至稀由浓至稀由稀至浓由稀至浓
平衡时内外浓度内外相等内外相等内部高内部高
运送分子无特异性特异性特异性特异性
能量消耗不需要需要需要需要
运送前后溶质分子不变不变不变改变
载体饱和效应无有有有
与溶质类似物无竞争性有竞争性有竞争性有竞争性
运送抑制剂无有有有
运送对象举例水、O2糖、SO42-氨基酸、乳糖葡萄糖、嘌呤

第29页:培养基的概念与灭菌

第四节培养基:培养基是人工配制的、适合微生物生长繁殖或产生代谢产物的营养基质,几乎是一切对微生物进行研究和利用工作的基础。

任何培养基都应该具备微生物生长所需要的六大营养要素:碳源、氮源、无机盐、能源、生长因子、水。

任何培养基一旦配成,必须立即进行灭菌处理,常规高压蒸汽灭菌条件:

  • 1.05 kg/cm2,121.3 ℃,15~30 分钟
  • 0.56 kg/cm2,112.6 ℃,15~30 分钟

第30页:选用和设计培养基的原则

一、选用和设计培养基的原则和方法:

  • 目的明确
  • 营养协调
  • 理化条件适宜
  • 经济节约

第31页:目的明确的培养基配方举例

1.目的明确:根据不同的微生物的营养要求配制针对性强的培养基。

两种典型培养基的化学组成(每 1000 mL)
氧化硫杆菌培养基用量大肠杆菌培养基用量
S10 g葡萄糖5 g
MgSO4·7H2O0.5 gNH4H2PO41 g
(NH4)2SO40.4 gNaCl5 g
FeSO40.01 gMgSO4·7H2O0.2 g
H2PO44 gK2HPO41 g
CaCl20.25 g——

第32页:培养四大类微生物的常用培养基

常见的培养四大类微生物的培养基:

四大类微生物的常用培养基配方(每 1000 mL)
微生物类群培养基名称主要成分
细菌牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏 3 g、蛋白胨 10 g、NaCl 5 g
放线菌高氏 1 号淀粉 20 g、KNO3 1 g、K2HPO4 0.5 g、NaCl 0.5 g、MgSO4·7H2O 0.5 g、FeSO4 0.01 g
酵母菌麦芽汁培养基干麦芽粉加四倍水,50~60 ℃ 保温糖化 3~4 小时,调糖液浓度为 10 巴林,煮沸过滤,调 pH 为 6.0
霉菌查氏合成培养基蔗糖 30 g、NaNO3 3 g、K2HPO4 1 g、KCl 0.5 g、MgSO4·7H2O 0.5 g、FeSO4 0.01 g

第33页:营养协调与碳氮比

2.营养协调:培养基中营养物质浓度合适时微生物才能生长良好——浓度过低不能满足微生物正常生长所需,浓度过高则可能对微生物生长起抑制作用。

培养基中各营养物质之间的浓度配比也直接影响微生物的生长繁殖和代谢产物的形成与积累,其中碳氮比(C/N)的影响较大。碳氮比指培养基中碳元素与氮元素的物质的量比值,有时也指培养基中还原糖与粗蛋白之比。

例如,在利用微生物发酵生产谷氨酸的过程中:培养基碳氮比为 4/1 时,菌体大量繁殖,谷氨酸积累少;当培养基碳氮比为 3/1 时,菌体繁殖受到抑制,谷氨酸产量则大量增加。

第34页:理化条件适宜的三项指标

3.理化条件适宜:主要控制 pH、水活度与氧化还原电位三项。

第35页:培养基的 pH

a. pH:培养基的 pH 必须控制在一定的范围内,以满足不同类型微生物的生长繁殖或产生代谢产物。通常培养条件:

  • 细菌与放线菌:pH 7~7.5
  • 酵母菌和霉菌:pH 4.5~6 范围内生长

为了维持培养基 pH 的相对恒定,通常在培养基中加入 pH 缓冲剂,或在进行工业发酵时补加酸、碱。

第36页:水活度

b. 水活度:在天然环境中,微生物可实际利用的自由水或游离水的含量,一般用在一定的温度和压力条件下,溶液的蒸汽压力与同样条件下纯水蒸汽压力之比表示,即:

αw = Pw / P0w,式中 Pw 代表溶液蒸汽压力,P0w 代表纯水蒸汽压力。

纯水 αw 为 1.00,溶液中溶质越多,αw 越小。微生物一般在 αw 为 0.60~0.99 的条件下生长;αw 过低时,微生物生长的迟缓期延长,比生长速率和总生长量减少。微生物不同,其生长的最适 αw 不同。

第37页:氧化还原电位

c. 氧化还原电位:又称氧化还原电势(redox potential),是度量某氧化还原系统中的还原剂释放电子或氧化剂接受电子趋势的一种指标,其单位是 V(伏)或 mV(毫伏)。不同类型微生物生长对氧化还原电位的要求不同:

  • 好氧性微生物:+0.1 伏以上时可正常生长,以 +0.3~+0.4 伏为宜
  • 厌氧性微生物:低于 +0.1 伏条件下生长
  • 兼性厌氧微生物:+0.1 伏以上时进行好氧呼吸,+0.1 伏以下时进行发酵

第38页:经济节约的八条措施

4. 经济节约:以粗代精、以野代家、以废代好、以国代进、以简代繁、以氮代朊、以烃代粮、以纤代糖。

第39页:天然培养基与合成培养基

二、培养基的类型及应用:按成分不同划分:

  • 天然培养基:含用化学成分还不清楚或化学成分不恒定的天然有机物,如牛肉膏蛋白胨培养基、麦芽汁培养基
  • 合成培养基:由化学成分完全了解的物质配制而成的培养基,如高氏 1 号培养基、查氏培养基

第40页:固体、半固体与液体培养基

按物理状态不同划分:

三类培养基的凝固剂含量与用途
类型凝固剂(琼脂)含量主要用途
固体培养基1.5%~2.0%微生物的分离、鉴定、活菌计数及菌种保藏
半固体培养基0.2%~0.7%观察微生物的运动特征、分类鉴定及噬菌体效价滴定
液体培养基不加任何凝固剂大规模工业生产及实验室基础理论与应用研究

第41页:按用途划分的培养基类型

按用途不同划分:

基础培养基
含有一般微生物生长繁殖所需的基本营养物质的培养基,牛肉膏蛋白胨培养基是最常用的基础培养基
选择培养基
用来将某种或某类微生物从混杂的微生物群体中分离出来的培养基
鉴别培养基
用于鉴别不同类型微生物的培养基,微生物产生的代谢产物与培养基中的特殊化学物质发生特定反应,产生明显的特征变化
加富培养基
在基础培养基中加入某些特殊营养物质(血液、血清、酵母浸膏、动植物组织液等)制成的一类营养丰富的培养基
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