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本课件讲述酶，从酶作为生物催化剂的定义与蛋白质本质讲起，说明高效性、专一性与可调控等作用特点，介绍六大类酶的分类命名、辅酶辅基与维生素的关系、单体酶与寡聚酶及活性中心，并展开酶的作用机理、酶促反应速度与米氏方程及抑制类型。
第三章 酶 目录：第三章酶第一节酶的概念第二节酶的分类和命名第三节酶的组成与结构第四节酶的作用机理第五节影响酶促反应速度的因素第六节变构酶、同工酶和诱导酶
酶的定义与胞内外作用：第三章酶第一节酶的概念一、酶是生物催化剂（一）酶的定义酶（Enzyme）：是生物活细胞产生的，以蛋白质为主要成分的生物催化剂。酶虽是由细胞产生的,但并非必须在细胞内才能起作用,有些酶被分泌到细胞外才发生作用。这类酶称“胞外酶”。大部分酶在细胞内起催化作用称为“胞内酶”。
酶的化学本质是蛋白质：（二）酶的化学本质1、酶是蛋白质1926年Sumner第一次从刀豆种子中提取了脲酶结晶，证明其具有蛋白质性质30年代，Northrop又分离出结晶的胃蛋白酶、胰蛋白酶及胰凝乳蛋白酶，证明酶的化学本质是蛋白质
酶具有蛋白质性质的证据：1酶具有蛋白质的特性如：两性解离、胶体性质、加热使酶变性、颜色反应等2酶可以被蛋白酶水解而丧失活性(3）许多酶的氨基酸顺序已被测定（4）1969年人工合成了牛胰核糖核酸酶
核酶的发现：在已鉴定过的数千种酶中，绝大多数酶的化学本质是蛋白质。但在1982年，美国科学家T.Cech发现原生动物四膜虫的26SrRNA前体具有自我拼接的催化活性。T.Cech将这种RNA命名为“Ribozyme”。核酶（Ribozyme）：指对RNA具有催化活性的RNA。2、Ribozyme的化学本质是RNA
酶与无机催化剂的共同点
酶催化的高效性与专一性：（二）酶的作用特点1、酶催化的高效性 脲酶CO2+2NH3Fe粉脲酶的催化效率比Fe粉高1015倍。2、酶催化的专一性一种酶只能作用于某一类或某种特定的物质。
酶活性的可调控与易失活：己糖激酶 当生物体内G-6-P积累时，会抑制己糖激酶的活性，避免G和ATP的过分消耗。4、酶易失活（易变性）凡使Pr变性的因素均使酶破坏而失活.5、常需要辅助因子3、酶活性的可调控性
绝对专一性：脲酶NH2－C－ 脲酶1、绝对专一性：酶对底物的要求非常严格，只作用于一种底物。如：ONH2－C－NHCl+H2O过氧化氢酶琥珀酸脱氢酶底物：过氧化氢底物：琥珀酸
基团专一性与相对专一性：（1）基团专一性：化学键键一端的基团a-葡萄糖苷酶a-糖苷键糖苷键的一端是葡萄糖底物：麦芽糖、蔗糖2、相对专一性：对底物要求程度较低，能作用于结构相似的一类物质。
键专一性：OR－C－O－RO酯酶酯键二肽酶H2N－CH－C－N－CH－COOH肽键RHR（2）键专一性：只要求作用于一定的化学键，而对键两端的基团无严格的要求。
旋光与顺反异构专一性：1旋光异构专一性：当底物具有旋光异构体时一酶只能作用于其中的一种。如：L-AA氧化酶只能催化L-AA氧化，而对D-AA无作用。2顺反异构专一性：对具有顺式和反式异构的底物具严格的选择性。如：延胡索酸水化酶反－丁烯二酸+H2O延胡索酸水化酶苹果酸顺－丁烯二酸+H2O延胡索酸水化酶3、立体异构专一性
酶的国际系统分类：下表列出相关内容。
| 类别 | 催化反应类型 | 举例 |
|---|---|---|
| 氧化还原酶类 | 催化氧化还原反应 | 琥珀酸脱氢酶、多酚氧化酶 |
| 转移酶类 | 催化分子间基团转移 | 转氨酶、己糖激酶 |
| 水解酶类 | 催化水解反应 | 蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶 |
| 裂合酶类 | 从底物移去基团形成双键及其逆反应 | 醛缩酶、脱氨酶、脱羧酶 |
| 异构酶类 | 催化同分异构体的相互转变 | 葡萄糖异构酶、甘油变位酶 |
| 合成酶类 | 催化与ATP分解相偶联的合成反应 | 谷氨酰胺合成酶、丙酮酸羧化酶 |
本页源文件仅完整列出氧化还原酶类，其余五类依同节后续各页整理，供对照原图核对。
转移酶类与水解酶类：2、转移E类：催化分子间基团转移的EAR+BA+BR如：转氨E、己糖激E3、水解E类：催化水解反应的 如：蛋白E、淀粉E、脂肪E
裂合酶类与异构酶类：4、裂多酶类：催化从底物上移去某些基团而形成双键的非水解性反应及其逆反应的EABA+B如：醛缩酶、脱氨E、脱羧酶5、异构酶类：催化同分异构体的相互转变的EAB如：G异构E、甘油变位E
合成酶类与酶的编号：6、合成E类：催化一切必须与ATP分解相偶联的合成反应的EAB+ADP+Pi丙酮酸羧化EA+B+ATP如：Gln合成E,酶的编号如：乳酸脱氢E顺序号亚亚类亚类类酶学委员会27·1·1·1EC
酶的命名：二、酶的命名1、习惯命名法底物名称反应性质两者结合酶的来源脲酶、淀粉酶、蛋白酶脱氢酶、加氧酶、转氨酶琥珀酸脱氢酶、谷丙转氨酶胃蛋白酶、木瓜蛋白酶2、国际系统命名法底物1：底物2反应类型如：琥珀酸：FAD氧化还原酶
酶的组成成分分类
酶蛋白与辅助因子的关系：酶蛋白和辅助因子单独存在时均无活性，二者只有结合成完整的分子时，才具有活性。酶蛋白及辅助因子结合起来成为全酶。辅因子+全酶酶蛋白作为电子、原子或基团的载体参与反应并促进反应决定酶促反应的专一性和高效性
辅酶、辅基与金属离子：辅因子：辅酶、辅基、金属离子辅酶：与酶蛋白结合疏松，用透析法可以除去辅基：与酶蛋白结合紧密，不能用透析法除去小分子有机化合物金属离子：与酶蛋白结合，有的紧，有的松
维生素的概念：辅酶、辅基往往是由维生素参与形成的小分子有机物（二）维生素(Vitamin)维生素：维持机体正常生命活动不可缺少的一类小分子有机物。维生素既不是能源，也不构成细胞的原料，但却是机体不可缺少的物质。这些化合物人体不能合成，必须从食物中摄取，对人体的生长和健康是必需的，缺乏时使代谢过程发生障碍。
脂溶性维生素：下表列出相关内容。
| 种类 | 化学本质 | 功能 | 缺乏症 |
|---|---|---|---|
| 维生素A | 不饱和一元醇 | 与视觉有关 | 干眼病、夜盲症 |
| 维生素D | 类固醇衍生物 | 与钙、磷代谢有关 | — |
| 维生素E | 生育酚 | 与生育有关，抗氧化 | — |
| 维生素K | 奈醌衍生物 | 凝血维生素 | — |
源文件表格中功能列与缺乏症列的文字错位粘贴，上表按课件表格顺序整理，未提取到文字的单元格以「—」表示。
水溶性维生素：下表列出相关内容。
| 种类 | 别名 | 缺乏病 | 存在（食物来源） |
|---|---|---|---|
| 维生素B1 | 硫胺素 | 脚气病 | 谷物种子 |
| 维生素B2 | 核黄素 | 口角炎 | 小麦、青菜、蛋黄、肝脏 |
| 维生素B3 | 泛酸 | 未发现 | 自然界中广泛 |
| 维生素B5 | 烟酸 | 赖皮病 | 肉类、谷物、花生 |
| 维生素B6 | 吡哆素 | 皮炎 | 动、植物中分布广泛 |
| 维生素B7（VH） | 生物素 | 未发现 | 动物组织均含有 |
| 维生素B11 | 叶酸 | 恶性贫血 | 青菜、肝脏 |
| 维生素B12 | 氰钴胺素 | 恶性贫血 | 植物、鱼肉蛋 |
| 维生素C | 抗坏血酸 | 坏血病 | 新鲜果蔬 |
| 硫辛酸 | — | 未发现 | 肝、酵母 |
TPP与黄素辅酶：（一）辅酶、辅基1、TPP：焦磷酸硫胺素（含VB1）功能基团：噻唑环功能：羧化辅酶，与a-酮酸的氧化脱羧有关2、FMN：黄素单核苷酸（含VB2）FAD：黄素腺嘌呤二核苷酸功能基团：异咯嗪环功能：传递氢 二、几个重要的辅助因子
辅酶A与烟酰胺辅酶：3、COA：辅酶A（含VB3）功能基团：β-巯基乙胺的巯基，-SH功能：传递酰基（酰基载体）4、NAD+：烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（COⅠ）（含VB5也称VPP）NADP+：烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（COⅡ）功能基团：烟酰胺的吡啶环功能：传递氢
磷酸吡哆醛、生物素与四氢叶酸：5、磷酸吡哆醛、磷酸吡哆醛胺（含VB6）功能基团：—CHO、—CH2NH2功能：传递氨基（氨基载体）6、生物素（VH或VB7）功能基团：尿素环功能：传递CO2（CO2载体）7、四氢叶酸（含VB11）功能基团：N-5，N-10是转一碳基团的反应位置功能：传递一碳基团（一碳基团载体）
维生素C与硫辛酸：8、维生素C：VC功能基团：2、3位碳原子上的烯醇式羟基功能：传递氢（氢载体）SH9、硫辛酸：LSH功能基团：—SH功能：酰基和氢的载体
辅酶作用中的负碳离子：C2上的氢原子一个质子易形成负碳离子，负碳离子作为有效的亲核剂参与共价催化作用。
本页为辅酶A的组成结构的化学反应式或分子结构式图示，源文件仅提取到结构符号与少量文字，建议对照原课件图片查看本页的反应过程与结构变化。
NAD与NADP的结构：NAD+和NADP+
金属离子的作用：（二）金属离子1、活性中心的组成成分如多酚氧化E中的Cu2、在E与S之间起作用如羧肽酶中的Zn3、稳定结构
单体酶、寡聚酶与多酶复合体：（一）酶的结构与蛋白质的结构相同，都有一定的空间结构（二）根据酶蛋白的结构特点，酶可分为：1、单体酶:只有一条多肽链,分子量在13,000-35,000之间，一般是水解E,如蛋白E、羧肽E。三、酶的结构
寡聚酶与多酶复合体
酶的活性中心：（一）含义酶的活性中心：指酶分子中直接和底物结合，并和酶催化作用直接有关的部位。结合部位：与底物结合，决定酶的专一性活性中心催化部位：底物的敏感键在此处断裂而形成新键，决定酶的高效性四、酶的活性中心
必需基团与活性中心：活性中心酶分子必需基团结合部位催化部位维持活性中心的必需基团其它部分（非必需基团）必需基团：E分子中有些基团若经化学修饰则活性丧失，这些基团称为必需基团，包括活性中心基团及维持活性中心的基团。
活性中心的形成与结构特征：（二）酶活性中心的形成E蛋白多肽链经过盘绕折叠形成特定的空间结构，使相关的AA形成微区。（三）酶活性中心的结构特征1、活性中心是E分子表面的一个凹穴，有一定的大小和特殊的构象，在与底物接触时表现一定的柔性。
活性中心的疏水微环境
酶原与酶原激活：（四）酶原1、酶原：某些酶在细胞内合成或初分泌时没有催化活性，这种无活性状态的酶前身物称为酶原。2、酶原激活：酶原变成酶的过程（切去几个AA的肽段）。实质：酶活性中心的形成或暴露过程。
活化能与酶催化本质：一、酶催化作用的本质（一）活化能达到或超过能阈的分子——活化分子使常态分子变为活化分子的途径：1加热或光照射，直接增加活化分子数目；2降低活化能（能阈），间接增加活化分子数目。酶催化作用的本质：降低反应的活化能。第四节酶的作用机理
中间产物学说：（二）中间产物学说——酶降低活化能的原因非酶促反应SP酶促反应E+SES*EPE+P酶在催化过程中,酶先与底物（S）形成中间产物ES（酶的活化中心与底物形成多个次级键），使反应活化能降低，然后中间产物再生成反应产物P。
锁钥学说
诱导契合学说：2、诱导契合学说1964年Koshland提出“诱导契合”假说:底物结合可诱导酶活性中心构象的变化,使酶的活性中心与底物楔合而形成中间络合物。
诱导契合的要点：(1)酶有其原来的形状,不一定一开始就是底物的模板。(2)底物能诱导酶Pr分子形状发生一定的变化(3)酶分子发生变化后就能与底物互补楔合。(4)在酶反应过程中,活性中心构象的变化是可逆的。
诱导契合假说示意：“诱导契合”假说
邻近及定向效应：1.邻近及定向效应邻底物与酶活性近中心邻近效底物分子反应基团应邻近降低反应活化能增加底物有效浓度反应速度上升三、与酶的高效性有关的因素
定向效应：定向催化基团与结合基团正确定位效应底物分子与酶活性中心定向契合分子间反应类似于分子内反应,活化能降低反应速度上升
酸碱催化：－COOH－N+H3－SH－COO－－NH2－S－2、酸碱催化酶活性中心的某些基团可以作为良好的质子供体或受体进行酸碱催化。广义酸（质子供体）广义碱（质子受体）
组氨酸咪唑基的催化作用：组氨酸的咪唑基：1pK值约为6.7-7.1，在接近中性的条件下，一半以广义酸的形式存在，另一半以广义碱的形式存在，因而它既能作为质子供体，又能作为质子受体，有效地进行酸碱催化。2咪唑基供出和接受质子的速度很快，其半衰期短，小于0.1毫微秒。所以许多酶活性中心都有组氨酸残基
张力与变形、共价催化
亲核基团与共价催化：指酶分子中具有非共用电子对的亲核基团攻击底物分子中具有部分正电性的原子，并与之作用形成共价键而产生不稳定的过渡态复合物，活化能降低。亲核基团：Ser的羟基Cys的巯基His的咪唑基（1）亲核催化
亲电基团与低介电区域：亲电基团：Zn2+、Fe3+、Mg2+、NH3等+5、酶活性中心是低介电区域（疏水的微环境）酶活性中心是低介电区，有利于使底物分子的敏感键和酶的催化基团之间形成很大的反应力。（2）亲电催化
胰凝乳蛋白酶的特点：(一)E的特点胰凝乳蛋白酶:(EC3.4,4.5)1、241个AA残基组成，分子量250002、专一性AA－AA－AA－AA1N端芳香族AAAA2－AA－AA－AAC端Trp、Tyr、Phe3、活性中心Ser195,His57, Asp102，构成一个氢键体系,His57成为桥梁四、酶催化机理的实例
胰凝乳蛋白酶的作用机理：（二）作用机理1、通过电荷转移，使Ser有更强的亲核力2、形成酰化酶，放出产物P13、脱酰（水解），形成产物P2
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酶促反应速度的表示：一、酶促反应速度酶促反应速度（V）：单位时间内产物的生成量单位时间内底物的消耗量[P]斜率=[P]/t=Vt第五节影响酶促反应速度的因素
酶活力单位与测定
酶的比活力与Kat：比活力=酶蛋白(mg)比活力是表示酶制剂纯度的一个指标。Kat：1Kat指在最适条件下，每秒钟催化1mol底物转化所需的酶量。1Kat=6×107U3、酶的比活力酶的比活力：是指每mg蛋白所含的酶活力单位或每kg蛋白中所含的Kat数。活力单位（U）
Kcat与酶活力测定：Kcat：指酶充分被底物饱和的情况下，每个酶分子在单位时间（秒）内催化的底物分子数。单位：时间的倒数S-1它相当于底物—酶中间物形成后，酶将底物转换为产物的效率。（二）酶活力的测定要求：测定初速度最适条件[S]》[E]4、酶的转换数（Kcat）
底物浓度对反应速度的影响：（一）底物浓度对酶反应速度的影响pH、T、[E]固定时，V对[S]作下图：SABCDAB一级反应V=K[S]CD零级反应V=VmaxBC混合级反应三、底物浓度对酶反应速度的影响
米氏方程的基础与前提：（二）米氏方程（ ）1、基础中间产物学说E+SESP+E2、前提1S与E形成中间产物，且整个反应速度取决于ESP+E2产物浓度为0（初速度）（3）[S]》[E]（4）反应达到平衡
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米氏常数Km的意义：（三）米氏常数Km1、意义：1Km：当酶反应速度达到最大反应速度的一半时的底物浓度，单位mol.L-1。2Km是酶的特征常数之一。只与酶的性质有关,而与酶浓度无关。
Km与最适底物：3如果一种酶有几种底物,就有几种Km值，Km值最小的底物称该酶的最适底物。Km值还受pH及温度影响。因此Km值作为常数是在一定条件下而言的。4当K2>K3时，1/Km可以近似地表示酶对底物亲和力的大小，1/Km愈大，Km愈小，达到最大反应速度一半时所需浓度就愈小，亲和力就越大。
双倒数作图法求Km：2、Km值的求法——双倒数作图法测定一个酶促反应的Km的方法很多,一般最常用双倒数作图法:Vmax·[S]V=改成直线方程
双倒数作图：注意：米氏方程只是反映了底物单分子时酶反应速度与底物浓度之间的定量关系，但这个方程不适应包括一种以上的底物和其他物质的影响的酶反应。但可以根据这个方程推出各种复杂酶促反应的动力学方程。1/Vmax
酶浓度对反应速度的影响：四、酶浓度对酶反应速度的影响[S]》[E]V[E]
pH对酶促反应的影响：五、pH对酶促反应的影响最适pH值4-8V植物5.5-6.5、动物6.5-8.0酶的最适pH值受酶的纯度、底物的种类和浓度、缓冲液pH的种类和浓度等的影响。酶有最适PH值的原因：pH值酶分子的解离状态影响底物的解离状态ES的形成
温度对酶促反应的影响：六、温度对酶促反应的影响植物酶40-50℃，动物酶35-40℃最适温度不是酶的特征物理常数,受底物种类、作用时间等因素的影响。
温度系数Q10：温度对酶作用的影响：（1）在达到最适温度之前，温度升高，活化分子数增加，反应速度加快。温度系数（Q10）：温度每提高10℃其反应速度与原来的反应速度之比。对于许多酶来说，Q10多为1-2。(2)超过最适温度时,温度升高，酶逐步变性，V降低。
激活剂的种类：凡能提高酶活性的物质,都称为激活剂,其中大部分是离子或简单有机化合物。按其分子大小可分为：1、无机离子1金属离子,K+、Na+、Mg2+、Zn2+、Fe3+、Cu2+等2阳离子,α-淀粉酶受Cl-激活3H+，胃蛋白酶受H+激活七、激活剂对酶反应速度的影响
有机分子类激活剂：1某些还原剂GSH、半胱氨酸2EDTA金属螯合剂，能除去酶中的重金属杂质，解除抑制。3、具有蛋白质性质的大分子物质蛋白酶酶原酶2、有机分子
抑制作用的类型：抑制作用的类型：根据抑制剂与酶的作用方式及抑制作用是否可逆，分为两大类：可逆性抑制作用不可逆性抑制作用八、抑制剂对酶促反应的影响
可逆性抑制作用：（一）可逆性抑制作用可逆性抑制作用：抑制剂与酶Pr以非共价键可逆结合，可用透析的方法除去。可逆性抑制作用可以分为三种类型：竞争性抑制作用非竞争性抑制作用反竞争性抑制作用
反竞争性抑制作用：反竞争性抑制作用：抑制剂不能与游离酶结合，只与ES复合物结合形成ESI，形成的ESI不能转变为产物。
竞争性抑制作用的特点：1、竞争性抑制作用1抑制剂的化学结构与底物相似，与底物竞争酶活性中心，形成EI，减少了酶与底物的结合，降低酶反应速度。2抑制作用的强弱取决于[I]/[S]。3可采用提高[S]来消除这种抑制作用。
本页为竞争性抑制的米氏方程的化学反应式或分子结构式图示，源文件仅提取到结构符号与少量文字，建议对照原课件图片查看本页的反应过程与结构变化。
竞争性抑制的实例：例1：CH2COOH+FAD琥珀酸脱氢酶 丙二酸、戊二酸、草酰乙酸是琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制剂。例2：对氨基苯甲酸叶酸合成酶叶酸四氢叶酸（细菌）对氨基苯磺酰胺（黄胺药）
非竞争性抑制作用的特点：2、非竞争性抑制作用1非竞争性抑制剂与酶活性中心以外的部位结合，引起酶分子构象变化，使酶活性中心催化作用降低。2抑制作用的强弱取决于抑制剂的绝对浓度。3不能用增大[S]的方法来消除抑制作用。
本页为非竞争性抑制的米氏方程的化学反应式或分子结构式图示，源文件仅提取到结构符号与少量文字，建议对照原课件图片查看本页的反应过程与结构变化。
重金属离子对巯基酶的抑制：如：重金属离子（Ag2+、Cu2+、、Pb2+等）对巯基酶的抑制作用；E－SH+Ag2+E－S－Ag+Hg2+H+加过量的巯基化合物（Cys、巯基乙醇等）可除去重金属而解除抑制。
本页为两类抑制的米氏曲线的化学反应式或分子结构式图示，源文件仅提取到结构符号与少量文字，建议对照原课件图片查看本页的反应过程与结构变化。
本页为两类抑制的动力学异同的化学反应式或分子结构式图示，源文件仅提取到结构符号与少量文字，建议对照原课件图片查看本页的反应过程与结构变化。
本页为抑制作用的动力学参数变化的化学反应式或分子结构式图示，源文件仅提取到结构符号与少量文字，建议对照原课件图片查看本页的反应过程与结构变化。
不可逆抑制作用：（三）不可逆抑制作用抑制剂以比较牢固的共价键和酶结合，不能用透析的方法除去。按照不可逆抑作用的选择性不同,又可分为专一性的不可逆抑制和非专一性不可抑制两类。非专一性不可抑制作用：抑制剂可作用于酶分子上的不同基团或作用于几类不同的酶。
烷化剂与酰化剂：抑制剂有：碘乙酸、DNFB等烷化剂；磺酰氯、酸酐等酰化剂。如:E—SH+ICH2COO－ES—CH2COO－+HI专一性不可逆抑制作用：抑制剂只作用于酶蛋白的一种AA侧链基团或仅作用于一类酶。
有机磷化物抑制胆碱酯酶：如：有机磷化物专一性作用于丝AA酶的—OH。R—OO胆碱酯酶R—OOP+E—CH2OHP+HFR—OOCH2ER—OF二异丙基氟磷酸（DIPF）胆碱酯酶乙酰胆碱乙酸+胆碱乙酰胆碱是神经递质，若积累，将影响神经传导，使昆虫功能失调，失去知觉而死亡。
变构酶的特征
变构酶的动力学与同工酶
乳酸脱氢酶同工酶：如：乳酸脱氢酶同工酶（LDH）是1959年发现的第一个同工酶，由2—4个亚基组成，亚基分为M型（骨骼肌型）和H型（心肌型）2、分离鉴定用聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离。聚丙烯酰胺由丙烯酰胺(Acr)和甲叉双丙烯酰胺（Bis）聚合而成。通过电场效应和分子筛效应使酶分开。三、诱导酶诱导酶：一般不存在有诱导物时大量产生的一类酶。如：NR是典型的诱导酶
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