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第1页：厌氧性细菌及检验

厌氧性细菌及检验

本章内容包括厌氧菌的定义与分类、感染特点、标本采集与送检、分离培养与鉴定，以及破伤风梭菌、产气荚膜梭菌等重要病原菌。

第2页：厌氧性细菌的定义

一、定义

• 有氧条件下不能生长，无氧条件（不是绝对）下才可以生长的一类细菌。
• 1836年Pasteur提出。
• 临床上日益受到重视，60%临床标本存在厌氧菌感染——需要重视。

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第4页：厌氧性细菌的分类

二、分类

• 1. 有芽孢厌氧性细菌：一个梭菌属，包括83个种。
• 2. 无芽孢厌氧性细菌：40多个菌属，300多个菌种和亚种。

第5页：厌氧菌感染概述

三、感染

• 分布
• 原因
• 临床症状

第6页：厌氧菌在正常人体内的分布

厌氧菌在正常人体内的分布：观察部位包括皮肤、上呼吸道、口腔、肠道、尿道、阴道。

• 一、芽孢菌：G⁺杆菌——梭状芽孢杆菌属。
• 二、无芽孢菌：
  • （一）G⁺的杆菌——双歧杆菌；
  • （二）G^-的杆菌——类杆菌属；
  • （三）G⁺的球菌——消化球菌属；
  • （四）G^-的球菌——韦荣氏菌属。

原文中各部位分布结果以“0／＋／±”符号连续粘连排布，无法与各菌种安全对应，本页未还原为表格，建议对照原课件图片补全分布结果。

第7页：厌氧菌感染的致病原因

致病的原因：

• 1. 组织缺氧或氧化还原电势降低：穿刺伤等封闭性伤口、血管压迫、肿瘤压迫等。
• 2. 机体免疫力低下。

第8页：厌氧菌感染的临床症状

临床的症状：

• 1. 感染部位产生大量气体，组织脓肿和坏死，皮下有捻发音，是产气荚膜梭菌感染的特征。
• 2. 分泌物有恶臭，或为暗红色；分泌物涂片经革兰氏染色发现细菌，而培养阴性。
• 3. 其它等等。

第9页：厌氧菌标本的采集和送检

厌氧菌标本的采集和送检：

• 1. 标本决不能被正常菌群污染；
• 2. 应尽量避免空气。

第10页：厌氧菌标本来源与收集方法

标本的采集：不同标本来源对应的收集方法如下。

原文连续列出6种标本来源与7种收集方法，条目数不等；此处按出现顺序配对，其中「静脉注射的塑料导管穿入」归入窦道、子宫腔、深部创伤组织一行，建议对照原课件核对。

第11页：标本的送运与处理

标本的送运与处理：

• 针筒送运法
• 无菌小瓶送运法
• 棉拭送运法
• 大量标本送运法
• 组织块送运法
• 厌氧袋送运法

第12页：分离和鉴定

分离和鉴定

厌氧菌的检验包括直接镜检、分离培养与鉴定实验三部分。

第13页：

第14页：厌氧菌直接镜检

检验的方法　1. 直接镜检

一些特殊的特点，临床工作中的总结可对初步判断及临床应用做早一步的指导作用。

第15页：厌氧菌分离培养的培养基

2. 分离培养　1）培养基的选择

• 强化血琼脂平板
• 卡那万古霉素冻溶血琼脂平板
• 七叶苷胆汁平板等等

第16页：厌氧菌标本的接种

2）标本的接种

每份标本应接种3个培养平板，分别放置于有氧、无氧和含5%～10%的CO₂的容器中，有时需要专用的培养基。

第17页：厌氧培养法

3）厌氧培养法

• a. 厌氧罐培养法
• b. 气袋法
• c. 气体喷射法
• d. 厌氧手套箱法
• e. 其它等等

第18页：次代培养和厌氧菌的确定

2. 次代培养和厌氧菌的确定

经初步培养后，需通过次代培养并观察其在有氧与无氧条件下的生长情况，以确定是否为专性厌氧菌。

第19页：分离培养失败的原因

3. 分离培养中可能失败的原因

1. 培养前未做标本的直接涂片和染色镜检；
2. 标本在空气中放置太久或接种时时间过长；
3. 未用新鲜配制的培养基。

第20页：分离培养失败的原因（续）

1. 未用选择性培养基；
2. 无合适的厌氧罐或装备出现问题；
3. 培养时间不足；
4. …………………

第21页：厌氧菌形态和染色鉴定

鉴定实验　1. 形态和染色

• 重要的是为下一步的鉴定提供参考，注意培养时间的影响。
• 破伤风梭菌革兰氏染色改变：陈旧培养物可由阳性转为阴性。
• 拉丝实验：加KOH 30g/l一滴，能拉丝为阴性，不能拉丝为阳性。

第22页：pH对厌氧菌染色的影响

pH对染色的影响：

• 痤疮丙酸杆菌：pH 7.0时呈阴性及多型性；
• pH 6.0及以下：呈革兰氏阳性杆菌。

第23页：厌氧菌菌落性状鉴定

2. 菌落性状

• 1）色素：产黑色素类杆菌2～10天可产生黑色素；溶齿放线菌培养3～4天产生粉红色色素。
• 2）溶血：产气荚膜梭菌在新鲜的血琼脂平板上可产生双溶血环。
• 3）荧光。

第24页：厌氧菌的其他鉴定方法

3. 抗生素敏感实验

• 4. 一些特殊的敏感实验——聚茴香脑磺酸钠敏感实验；
• 5. 生化特性；
• 6. 气液相色谱；
• 7. PCR等等。

第25页：有芽孢的厌氧菌概述

有芽孢的厌氧菌

简介：梭菌属，G⁺；陈旧性培养基中可呈G^-。

第26页：破伤风梭菌概述

四、破伤风梭菌

• 大量存在于人和动物的肠道，经粪便污染；伤口被污染导致感染——注意消毒清洁。
• 芽孢位于顶部，呈鼓槌状，直径比菌体粗，呈梭状。
• 可以被用于生物技术。
• 外毒素致毒。

第27页：破伤风梭菌生物学性状要点

（一）生物学性状

染色、培养、生化——对我们实验诊断来说最重要。

第28页：破伤风梭菌形态与培养

• 破伤风梭菌菌体细长，长4～8μm，宽0.3～0.5μm，周身鞭毛；芽胞呈圆形，位于菌体顶端，直径比菌体宽大，似鼓槌状，是本菌形态上的特征。
• 繁殖体为革兰氏阳性，带芽胞的菌体易转为革兰氏阴性。
• 破伤风梭菌为专性厌氧菌，最适生长温度为37℃，pH 7.0～7.5。

第29页：破伤风梭菌培养特性

• 营养要求不高，在普通琼脂平板上培养24～48小时后，可形成直径1mm以上不规则的菌落，中心紧密、周边疏松，似羽毛状菌落，易在培养基表面迁徙扩散。
• 在血液琼脂平板上有明显溶血环。
• 在疱肉培养基中培养，肉汤浑浊，肉渣部分被消化，微变黑，产生气体，生成甲基硫醇（有腐败臭味）及硫化氢。

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第31页：破伤风梭菌生化与抵抗力

• 一般不发酵糖类，能液化明胶，产生硫化氢，形成吲哚，不能还原硝酸盐为亚硝酸盐；对蛋白质有微弱消化作用。
• 本菌繁殖体抵抗力与其他细菌相似，但芽胞抵抗力强大：在土壤中可存活数十年，能耐煮沸40～50分钟。
• 对青霉素敏感，磺胺类有抑菌作用。

第32页：破伤风梭菌感染条件

（二）致病性与免疫性

• 破伤风梭菌芽胞广泛分布于自然界中，可由伤口侵入人体，发芽繁殖而致病；但本菌是厌氧菌，在一般伤口中不能生长，伤口的厌氧环境是破伤风梭菌感染的重要条件。
• 窄而深的伤口（如刺伤），有泥土或异物污染，或大面积创伤、烧伤、坏死组织多，局部组织缺血，或同时有需氧菌或兼性厌氧菌混合感染，均易造成厌氧环境，局部氧化还原电势降低，有利于破伤风杆菌生长。

第33页：破伤风痉挛毒素

• 破伤风梭菌能产生强烈的外毒素，即破伤风痉挛毒素（Tetanospasmin），或称神经毒素（Neurotoxin）。
• 该毒素为蛋白质，由十余种氨基酸组成，不耐热，可被肠道蛋白酶破坏，故口服毒素不起作用。
• 在菌体内的痉挛毒素是单一的一条多肽链，分子量15万。
• 破伤风毒素的毒性非常强烈，仅次于肉毒毒素；破伤风梭菌没有侵袭力。

第34页：破伤风梭菌微生物学检验

（三）微生物学检验

1. 标本采集
2. 检验程序
3. 检验方法和鉴定

第35页：气性坏疽病原菌

五、气性坏疽病原菌

• 以组织坏死、水肿、产气及全身中毒为特征的严重急性外伤感染。
• 包括很多菌种——重点为产气荚膜梭菌。

原文写作「产气夹膜梭菌」，按通用菌名规范为「产气荚膜梭菌」。

第36页：产气荚膜梭菌内容提纲

产气荚膜梭菌

• 生物学性状：形态和染色、培养特性
• 生化反应
• 致病性

第37页：产气荚膜梭菌形态和染色

• 为革兰氏阳性粗大梭菌，3～4×1～1.5μm，单独或成双排列，有时也可成短链排列。
• 芽胞呈卵圆形，芽胞宽度不比菌体大，位于中央或次末端；培养时芽胞少见，须在无糖培养基中才能生成芽胞。
• 在脓汁、坏死组织或感染动物脏器的涂片上，可见有明显的荚膜，无鞭毛，不能运动。

第38页：产气荚膜梭菌培养特性

• 厌氧程度不如破伤风梭菌要求高。
• 在血液琼脂平板上菌落较大、灰白色、不透明，边缘呈锯齿状；多数菌株有双层溶血环，内环是θ毒素的作用，而外环不完全溶血是α毒素所致。
• 不能消化已凝固的蛋白质和血清。

第39页：汹涌发酵现象

• 在疱肉培养基中肉渣不被消化，有时呈肉红色。
• 在牛乳培养基中能分解乳糖产酸，使酪蛋白凝固，同时生成大量气体，将凝固的酪蛋白冲成海绵状碎块。
• 管内气体常将覆盖在液体上的凡士林层向上推挤，这种现象称为“汹涌发酵”，是本菌的特点之一。

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第41页：产气荚膜梭菌生化反应

• 能分解多种糖类，如葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和乳糖，产酸产气。
• 不发酵甘露糖或水杨苷。
• 能液化明胶，产生硫化氢。

第42页：产气荚膜梭菌致病性

• 致病条件与破伤风梭菌相似。
• 产气荚膜梭菌既能产生强烈的外毒素，又有多种侵袭性酶，并有荚膜，构成其强大的侵袭力，引起感染致病。

第43页：产气荚膜梭菌所致疾病

所致疾病：

1. 气性坏疽
2. 食物中毒
3. 急性坏死性肠炎

第44页：气性坏疽直接涂片镜检

• 1. 直接涂片镜检：从伤口深部取材涂片，革兰氏染色镜检，可见革兰氏阳性大杆菌，并有荚膜，常伴有其他杂菌，白细胞甚少，形态不规则，这是气性坏疽标本涂片的特点。

第45页：气性坏疽分离培养与鉴定

• 2. 分离培养与鉴定：取坏死组织制成悬液，接种于血琼脂平板上或疱肉培养基中，厌氧培养，观察生长情况；取细菌培养物涂片镜检，并进一步用生化反应鉴定。

第46页：气性坏疽动物实验

• 3. 动物实验：取培养液0.5～1ml给小鼠或家兔静脉内注射，10分钟后杀死动物，置37℃ 5～8小时。
• 如动物躯体膨胀，即行解剖，可见脏器和肌肉内有大量气泡，尤以肝脏最为明显，称“泡沫肝”。
• 取内脏或心血涂片镜检或分离培养，可发现有革兰氏阳性大杆菌，并有明显荚膜。

第47页：无芽孢厌氧菌的分类

无芽孢的厌氧菌

• 革兰氏阴性的杆菌
• 革兰氏阳性的杆菌
• 革兰氏阴性的球菌
• 革兰氏阳性的球菌

第48页：革兰氏阴性无芽孢杆菌

革兰氏阴性的杆菌——正常菌群的组成部分

• 类杆菌属