02 食源醒病原感染和食物中毒及其控制.ppt

第1页：

第2页：

第3页：

第4页：

第5页：

第6页：

第7页：

第8页：

第9页：

第10页：

第11页：

第12页：

第13页：

第14页：

第15页：

第16页：

第17页：

第18页：

第19页：

第20页：葡萄球菌

葡萄球菌

本页为葡萄球菌章节标题页，引出金黄色葡萄球菌在不同培养基上的菌落特征、致病性与检验方法。

第21页：金黄色葡萄球菌在BP琼脂上的菌落特征

金黄色葡萄球菌在BP琼脂上的典型特征

• 菌落呈圆形，表面光滑、凸起、湿润，直径2～3mm
• 颜色灰黑色至黑色，有光泽
• 常有浅色（非白色）的边缘
• 周围绕以不透明圈（沉淀），其外常有一清晰带（卵磷脂环）

第22页：金葡菌在显色培养基上的菌落特征

金黄色葡萄球菌在显色培养基上的典型特征

• 典型的金黄色葡萄球菌为灰黑色菌落，其外围有一不透明圈
• 本培养基用于直接鉴定金黄色葡萄球菌
• 18-24小时没有出现典型菌落时，需再培养18-24小时
• 有时菌落不显灰黑色，但其外围有一不透明圈

第23页：金葡菌在甘露醇高盐琼脂上的菌落特征

金黄色葡萄球菌在甘露醇高盐琼脂培养基上的典型特征

• 典型特征：菌落显黄色
• 其外围有一黄色的晕环

第24页：

第25页：

第26页：过氧化氢酶（接触酶）试验

过氧化氢酶试验

• 操作方法：菌落上加1滴3％的过氧化氢
• 结果判定：出现气泡为阳性
• 过氧化氢酶又称接触酶，能催化过氧化氢分解成水和氧

第27页：

第28页：

第29页：

第30页：

第31页：

第32页：

第33页：

第34页：

第35页：金黄色葡萄球菌的致病性

致病性

• 金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，临床表现多种多样
• 可引起局部化脓感染
• 可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等
• 严重时可引起败血症、脓毒症等全身感染

第36页：葡萄球菌皮肤感染

葡萄球菌皮肤感染

本页展示葡萄球菌引起的皮肤感染图片，说明其化脓性感染的临床表现，具体病灶特征建议对照原图说明。

第37页：

第38页：

第39页：

第40页：

第41页：

第42页：

第43页：

第44页：

第45页：

第46页：

第47页：检测步骤一：耐盐增菌

检测步骤——增菌

• 利用金黄色葡萄球菌耐盐的特性（可耐受15%的氯化钠）
• 用含10%氯化钠的胰酪胨大豆肉汤增菌

第48页：检测步骤二：血平板分离与溶血环

检测步骤——分离（血平板）

• 金黄色葡萄球菌可以产生溶血素，在血平板上产生明显的溶血环
• 典型菌落呈金黄色，有时也为白色
• 菌落大而突起、圆形、不透明、表面光滑，有溶血圈

第49页：BP平板各成分的作用

第50页：BP平板上金葡菌的典型菌落

BP平板上金黄色葡萄球菌的典型菌落

• 圆形、光滑突起、湿润，直径2-3mm
• 颜色呈灰色到黑玉色，边缘常为淡色（米黄色或灰白色略带灰色或黄色的白色）
• 周围为一混浊带，其外缘常有一透明圈
• 用接种针接触菌落似有黄油树胶的粘稠感
• 偶然遇到不分解脂肪的菌株，除无混浊带及透明圈外，其他外观基本相同
• 长期保存的冷冻或干燥食品中分离的菌落黑色常较淡，外观可能粗糙、质地较干燥

第51页：B-P平板菌落照片

B-P平板上的典型菌落

本页为B-P（Baird-Parker）平板上金黄色葡萄球菌典型菌落的实物照片，可见灰黑色菌落及周围的混浊带与透明圈，建议对照原图说明。

第52页：检测步骤三：血浆凝固酶试验鉴定

检测步骤——鉴定

• 金黄色葡萄球菌可以产生凝固酶，鉴别的主要实验是测定其凝固酶
• 凝固不完全的菌株可做厌氧葡萄糖发酵进一步确认
• 可做溶葡萄球菌酶敏感性实验
• 可做耐热核酸酶实验
• 所有这些实验不能作为鉴别其产毒与否的依据

第53页：金黄色葡萄球菌定性检验程序

金黄色葡萄球菌定性检测程序

1. 25g样品加225mL生理盐水制成1:10样品匀液
2. 取5mL样品匀液加入50mL胰酪胨大豆肉汤，36±1℃培养24小时
3. 划线接种血平板，36±1℃培养24小时
4. 镜检并接种营养肉汤，36±1℃培养24小时
5. 血浆凝固酶实验，36±1℃ 6小时
6. 报告结果

第54页：金黄色葡萄球菌MPN法定量检测

金黄色葡萄球菌定量检测（MPN法）

1. 25g样品加225mL生理盐水，梯度稀释
2. 选三个连续梯度，每个梯度各取3mL加入3管胰酪胨大豆肉汤
3. 36±1℃培养48小时
4. 将有生长的管划线接种，36±1℃培养24小时
5. 镜检并接种营养肉汤，36±1℃培养24小时
6. 血浆凝固酶实验，36±1℃ 6小时
7. 查MPN表报告MPN/g（mL）

MPN法适用于检测可能含有少量金黄色葡萄球菌、却带有大量竞争菌的样品。

第55页：金黄色葡萄球菌平板计数法定量检测

金黄色葡萄球菌定量检测（平板法）

1. 25g样品加225mL生理盐水，梯度稀释
2. 选三个连续梯度，每个梯度分别取1mL接种至表面干燥的BP平板（如0.4mL、0.3mL、0.3mL）
3. 36±1℃培养48小时
4. 平板计数，分别记录每种类型的菌落数
5. 每种类型至少选取一个菌落镜检并接种营养肉汤，36±1℃培养24小时
6. 血浆凝固酶实验，36±1℃ 6小时
7. 报告金黄色葡萄球菌数/g（mL）

平板法适用于检测金黄色葡萄球菌数不小于10/g（mL）的食品。

第56页：3M金葡菌快速检验程序

3M™ Petrifilm™金黄色葡萄球菌快速检验法

本页为3M™ Petrifilm™金黄色葡萄球菌快速检验法的检验程序图示，采用预制干膜培养基直接分离计数典型菌落，具体操作步骤与判读方式建议对照原图说明。

第57页：

第58页：

第59页：

第60页：沙门氏菌

沙门氏菌

本页为沙门氏菌章节标题页，介绍沙门氏菌在选择性培养基上的菌落特征、常用生化试验与国内外标准检验方法。

第61页：沙门氏菌在HE琼脂上的菌落特征

第62页：沙门氏菌在SS琼脂上的菌落特征

第63页：沙门氏菌在XLD琼脂上的菌落特征

第64页：三糖铁TSI与尿素酶试验结果判读

第65页：吲哚试验与VP试验结果判读

第66页：赖氨酸脱羧酶与丙二酸盐试验结果判读

第67页：ONPG试验结果判读

第68页：

第69页：

第70页：

第71页：

第72页：

第73页：

第74页：

第75页：

第76页：

第77页：

第78页：

第79页：

第80页：国内外沙门氏菌检测方法的标准与规程

第81页：GB 4789.4沙门氏菌检验流程

GB 4789.4-2003 沙门氏菌检验流程

1. 冻肉、蛋品、乳品及其他加工食品采用前增菌法：25g＋BPW 225mL，36℃±1℃一般4h（干蛋品18h～24h）
2. 鲜肉、鲜蛋、鲜乳或其他未经加工的食品采用直接增菌法：25g＋灭菌生理盐水25mL
3. 取10mL转种MM（或TTB）100mL，42℃培养18h～24h；同时取10mL转种SC 100mL，36℃±1℃培养18h～24h
4. 划线接种BS、DHL（或HE、WS、SS）平板，36℃±1℃培养40h～48h
5. TSI、靛基质、尿素、KCN、赖氨酸等生化试验，排除A/A H2S－的结果
6. 符合H2S＋靛－尿－KCN－赖＋等反应者做沙门氏菌血清学试验
7. ONPG－且甘露醇、山梨醇反应符合者判为沙门氏菌，否则为非沙门氏菌并报告结果

第82页：SN 0170出口食品沙门氏菌检验流程

SN 0170-92 出口食品沙门氏菌属检验流程

1. 样品经缓冲胨水（BPW）前增菌，37℃ 4h或20～24h
2. 直接选择性增菌：亚硒酸盐胱氨酸（SC）或四硫磺酸盐煌绿（TTB），37℃ 24±2h
3. 划线接种BS和DHL（亚利桑那菌琼脂）平板，37℃ 24～48h
4. TSI与赖氨酸脱羧酶试验、TSI与尿素酶试验，37℃ 24～48h
5. 生化试验与血清学试验（O抗原、Vi抗原）
6. 结果判定

第83页：FDA BAM第五章沙门氏菌检验流程

FDA细菌学分析手册（BAM）第五章沙门氏菌属检验流程

1. 25g样品加225mL乳糖肉汤（LB）、胰酪胨大豆肉汤（TSB）、煌绿溶液（BG）、通用前增菌肉汤（UPB）、营养肉汤（NB）或再造脱脂奶粉，pH6.8±0.2，35℃ 24±2h前增菌
2. 转种RV（42±0.2℃）或TT（35±2.0℃或42±0.2℃）选择性增菌24±2h（TT为43±0.2℃或35±2.0℃）
3. 划线接种BS、XLD和HE平板，35℃ 24±2h
4. TSI与LIA（赖氨酸铁琼脂）初步判定，LIA－者结合TSI结果排除
5. 生化试验：H抗原（多价H抗血清或Spicer-Edwards鞭毛试验）、赖氨酸脱羧酶、酚红卫矛醇肉汤、色氨酸肉汤（KCN、丙二酸盐、吲哚）、酚红乳糖肉汤、酚红蔗糖肉汤、MR-VP、西蒙氏柠檬酸盐
6. O抗原与H抗原血清学试验，可用API 20E、Enterotube II、Enterobacteriaceae II、MICRO-ID或Vitek GNI等商业生化鉴定系统

第84页：USDA肉禽蛋中沙门氏菌检验流程

USDA/FSIS MLG 4.02 肉、禽和蛋品中沙门氏菌的分离和鉴定流程

1. 样品加BPW或含结晶紫的BPW，35±1℃ 20～24h前增菌
2. 取0.5±0.05mL加10mL TT（42±0.5℃ 22～24h）与0.1±0.02mL加10mL RV（42±0.5℃ 22～24h）选择性增菌
3. 划线接种BGS和DMLIA或XLT4平板，35±1℃ 18～24h及48h观察
4. TSI与LIA试验
5. 血清学试验
6. 商业生化试剂盒或自动鉴定系统，或按AOAC官方方法967.27等传统生化鉴定
7. 报告结果

第85页：

第86页：AOAC沙门氏菌官方方法构成

第87页：AOAC沙门氏菌检验流程

AOAC官方方法967.25-967.28检验流程

1. 处理样品后取1mL分别加入10mL SC和10mL TT，35℃ 24±2h增菌
2. 划线接种XLD、HE和BS平板，35℃ 24±2h（BS平板观察24h及48h）
3. 挑取可疑菌落接种TSI和LIA，35℃ 24±2h
4. 纯培养物做尿素酶试验，阴性者继续后续试验
5. 生化试验：H抗原、LIA、酚红卫矛醇肉汤、色氨酸肉汤（KCN、丙二酸盐、吲哚）、O抗原
6. 补充生化试验：酚红乳糖肉汤、酚红蔗糖肉汤、MR-VP、西蒙氏柠檬酸盐
7. 不纯的培养物接种MAC或XLD或HE平板纯化后再行鉴定

第88页：ISO 6579沙门氏菌通用检测流程

ISO 6579:1993(E) 沙门氏菌检测通用方法流程

1. 25g样品加225mL缓冲胨水（BPW），35℃或37℃ 16～20h前增菌
2. 取0.1mL加10mL RV（42℃ 24h）与10mL加100mL SC（35℃或37℃ 24h及48h）选择性增菌
3. 划线接种酚红煌绿琼脂（亮绿琼脂）及第二种选择性平板，35℃或37℃ 20～24h
4. 无典型菌落时再培养18～24h，典型菌落呈粉红色
5. 每个平板选5个菌落接种营养琼脂纯化，35℃或37℃ 18～24h
6. TSI、尿素酶、赖氨酸脱羧酶、ONPG、VP、吲哚等生化试验
7. O抗原、Vi抗原和H抗原血清学试验，必要时送参考实验室分型
8. 报告结果

第89页：ISO 6785奶制品沙门氏菌检测流程

ISO 6785-1985(E) 牛奶和奶制品沙门氏菌检测流程

1. 25mL（g）牛奶和奶制品加入225mL TT和SC增菌液（牛奶另加225mL煌绿溶液与BPW），37±1℃ 20～24h
2. 划线接种煌绿酚红琼脂（亮绿琼脂）和BS平板，37±1℃ 18～24h，之后再培养18～24h
3. 每个平板选5个可疑菌落接种营养琼脂纯化，37±1℃ 18～24h
4. TSI、尿素酶、赖氨酸脱羧酶、ONPG、VP、吲哚等生化试验或商业化快速诊断系统
5. O抗原、Vi抗原和H抗原血清学试验，必要时送参考实验室分型
6. 报告结果

第90页：加拿大MFO-21沙门氏菌检验流程

加拿大官方食品微生物分析方法（MFO-21）沙门氏菌检验流程

1. 25g样品加入脱脂牛奶培养基、煌绿水溶液、营养肉汤或缓冲胨水，35℃ 18～24h前增菌
2. 取1mL加9mL SC（35℃ 24±2h）与1mL加9mL TBG（即TT，42.5℃ 24±2h）选择性增菌
3. 划线接种BS和BGS（煌绿磺胺）平板，35℃ 24±2h及48±2h观察
4. 纯培养物接种TSI、LIA和尿素琼脂
5. 不纯培养物接种MAC平板纯化后再行鉴定
6. O多价血清与H多价血清试验
7. 报告结果

第91页：沙门氏菌显色培养基与VIDAS SLM

沙门菌检测显色培养基与快速系统

• 沙门氏菌在CHROMagar显色培养基上的菌落呈紫色
• 沙门氏菌在海博公司显色培养基上的菌落呈红色
• VIDAS SLM为配套的快速检测系统

第92页：沙门氏菌仪器检测法

沙门菌仪器检测法

• VIDAS（生物梅里埃公司）
• BAX（杜邦公司）

第93页：VIDAS酶联免疫荧光分析原理

VIDAS酶联荧光免疫分析原理

VIDAS是应用酶联免疫技术制造的全自动免疫分析仪，用荧光分析技术通过固相吸附器，以已知抗体捕捉目标生物体，再以带荧光的酶联抗体结合，经充分冲洗后通过激发光源检测，自动读出发光的阳性标本。其优点是检测灵敏度高、速度快，可在48小时内快速鉴定沙门氏菌、大肠杆菌O157:H7、单核李斯特菌、空肠弯曲杆菌和葡萄球菌肠毒素等。

第94页：VIDAS全自动免疫分析仪

VIDAS全自动免疫分析仪

本页为VIDAS全自动免疫分析仪实物图，配合固相吸附器（SPR）与试剂条完成酶联荧光免疫分析，具体组成与操作流程建议对照原图说明。

第95页：BAX全自动PCR检测原理

DUPONT Qualicon BAX System检测原理

BAX系统是应用DNA分子核酸探针或基因探针技术制造的全自动PCR分析仪。将已知核苷酸序列的DNA片段用同位素或其他方法标记，加入已变性的被检DNA样品中，在一定条件下即可与该样品中有同源序列的DNA区段形成杂交双链，从而达到鉴定样品中DNA的目的。

第96页：杜邦BAX全自动PCR分析仪

DUPONT Qualicon BAX System

本页为DUPONT Qualicon BAX System全自动PCR分析仪实物图，用于食品中致病菌的快速核酸检测，具体组成建议对照原图说明。

第97页：VITEK GNI+生化鉴定卡原理

VITEK GNI+生化鉴定原理

VITEK GNI+应用一系列小的多孔聚苯乙烯卡片进行测试，卡片含有干燥的抗菌药物和生化基质。先制备一定浓度的欲鉴定菌株菌悬液，接种到卡片上后放入具有读数功能的孵箱内，每隔一定时间仪器自动检测培养基的发酵情况，并换算成能被计算机接受的生物编码，最后由计算机判定并打印鉴定结果。

第98页：VITEK全自动微生物鉴定仪

VITEK全自动微生物鉴定系统

本页为VITEK全自动微生物鉴定系统实物图，配合GNI+卡片完成革兰氏阴性杆菌的生化鉴定，具体组成建议对照原图说明。

第99页：API 20E生化鉴定系统原理

API 20E生化鉴定系统原理

API 20E生化鉴定是根据快速酶促反应及代谢产物的检测技术发展起来的细菌编码鉴定法，通过20项生化反应的组合结果换算成编码，广泛应用于临床与食品中革兰氏阴性杆菌的快速鉴定。

第100页：API 20E生化谱与编码判读

API 20E反应结果组合编码

本页列出API 20E的21项生化反应（ONPG、ADH、LDC、ODC、CIT、H2S、URE、TDA、IND、VP、GEL、GLU、MAN、INO、SOR、RHA、SAC、MEL、AMY、ARA、OX）及其按七位数分组的编码判读示例，沙门菌应得的组合编码为6704752。因反应项与结果数字在源文件中严重粘连，未逐项切分为表格，建议对照原课件补全各项反应结果。

第101页：API 20E试剂条

API 20E试剂条

本页为API 20E试剂条实物图，可见各生化反应孔及接种培养后的显色结果，具体判读建议对照原图说明。

第102页：沙门菌检测显色培养基

沙门菌检测显色培养基

• 沙门氏菌在CHROMagar显色培养基上的菌落呈紫色
• 沙门氏菌在海博公司显色培养基上的菌落呈红色

第103页：

第104页：

第105页：

第106页：

第107页：

第108页：

第109页：

第110页：

第111页：

第112页：

第113页：

第114页：

第115页：

第116页：

第117页：

第118页：

第119页：

第120页：吲哚（Indole）试验原理

吲哚（Indole）试验

某些细菌能分解蛋白胨中的色氨酸，生成吲哚。吲哚与对二甲基氨基苯醛结合，形成玫瑰吲哚，为红色化合物，据此判断吲哚试验阳性。

第121页：V-P试验原理

V-P试验

某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸缩合、脱羧成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下被空气中的氧氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称V-P（+）反应。

第122页：甲基红（MR）试验原理

甲基红（Methyl Red）试验

肠杆菌科各菌属都能发酵葡萄糖，在分解葡萄糖过程中产生丙酮酸，进一步分解时由于糖代谢途径不同，可产生乳酸、琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性产物，使培养基pH值下降至4.5以下，甲基红指示剂变红，即为甲基红试验阳性。

第123页：柠檬酸盐利用试验原理

柠檬酸盐利用试验

某些细菌能利用枸橼酸盐作为碳源、磷酸铵作为氮源，将枸橼酸盐分解为二氧化碳，培养基反应后呈碱性，在指示剂的作用下培养基变为深蓝色，即为柠檬酸盐利用试验阳性。

第124页：

第125页：大肠杆菌O157:H7

大肠杆菌O157:H7

本页为大肠杆菌O157:H7章节标题页，介绍致泻大肠埃希氏菌的概念与分类地位、生物学特性、卫生学意义与现代快速检测方法。

第126页：大肠杆菌及其纤毛

大肠杆菌及其纤毛

本页为大肠杆菌及其纤毛的电镜或示意图片，展示菌体表面的鞭毛与菌毛结构及其与致病性的关系，建议对照原图说明。

第127页：大肠杆菌在LST肉汤中的产气特征

大肠杆菌在月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（LST）上的典型特征

• LST肉汤用于大肠菌群的初发酵试验
• 大肠杆菌分解乳糖产生气体
• 小倒管内收集有气泡，即为产气阳性

第128页：

第129页：

第130页：O157:H7显色培养基菌落特征

大肠杆菌O157菌在O157菌显色培养基上的典型特征

• 典型O157:H7菌显紫色
• 大肠杆菌和大肠菌群显暗蓝色

第131页：大肠杆菌与大肠菌群显色培养基特征

大肠杆菌在大肠杆菌/大肠菌群显色培养基上的典型特征

• 大肠杆菌典型菌落为蓝色至紫色
• 大肠菌群为粉红色菌落
• 其它细菌为无色菌落

第132页：伊红美蓝琼脂EMB菌落特征

大肠杆菌在伊红美蓝琼脂（EMB）上的典型特征

• 典型菌落呈黑色中心
• 有或无金属光泽

第133页：

第134页：

第135页：

第136页：

第137页：

第138页：

第139页：

第140页：

第141页：

第142页：

第143页：

第144页：

第145页：

第146页：

第147页：致泻大肠埃希氏菌与O157:H7

中文名称

致泻大肠埃希氏菌，肠出血性大肠杆菌O157：H7

英文名称

enterovirulent Escherichia coli；enterohemorrhagic Escherichia coli O157:H7

课程属性

食品微生物国际标准与现代快速检测方法培训内容

第148页：本章内容提要

内容提要：本章围绕致泻大肠埃希氏菌依次展开五个部分。

• 一、概念及分类地位
• 二、生物学特性
• 三、卫生学意义
• 四、检测方法
• 五、希望

第149页：致泻大肠埃希氏菌的概念

致泻大肠埃希氏菌

大肠杆菌为人和动物肠道中的常居菌，一般多不致病，在一定条件下可引起肠道外感染；某些血清型菌株致病性强，能引起腹泻等疾病，这一群大肠杆菌称为致泻大肠埃希氏菌。

第150页：致泻大肠埃希氏菌的分类地位

分类地位：致泻大肠埃希氏菌在分类上隶属肠杆菌科埃希氏菌属。

• 肠杆菌科 → 埃希氏菌属 → 大肠埃希氏菌 → 致泻大肠埃希氏菌
• 肠道致病性大肠埃希氏菌（EPEC）
• 肠道出血性大肠埃希氏菌（EHEC）
• 产肠毒素大肠埃希氏菌（ETEC）
• 肠道侵袭性大肠埃希氏菌（EIEC）

第151页：四类致泻大肠埃希氏菌的比较

四类致泻大肠埃希氏菌的致病特点：

肠致病性大肠杆菌（EPEC）

婴儿腹泻的主要病原菌，高度传染性，严重者可致死，成人少见。

肠出血性大肠杆菌（EHEC）

引起散发性或暴发性出血性结肠炎，可产生志贺氏毒素样细胞毒素；1987年由Levine提出，以O157：H7血清型为代表菌株，感染可引起腹泻、出血性结肠炎（HC）、肾溶血性尿毒综合征（HUS）、血栓性血小板减少性紫癜（TIP）等，其中HUS病程凶险，易造成急性肾衰竭乃至死亡。

肠产毒性大肠杆菌（ETEC）

引起婴幼儿和旅游者腹泻，轻度水泻，也可呈严重的霍乱样症状。

肠侵袭性大肠杆菌（EIEC）

引起痢疾样腹泻和脓血便，有的可引起较大规模的食物中毒、医院内感染或水源性腹泻暴发。

第152页：O157:H7的生物学特性

生物学特性：

• 形态：革兰氏染色阴性、两端钝圆的短小杆菌，约0.5µm~0.8µm×1.0µm~3.0µm，多单独或成双存在，不呈长链状排列；约50%菌株有周生鞭毛而能运动，多数有菌毛，不形成芽胞。
• 培养：在含无机盐、胺盐、葡萄糖的普通培养基上生长良好；最适生长温度37℃，15℃~46℃可生长，42℃~44℃仍能生长。
• 抵抗力：无芽胞菌中最强，室温存活数周，土壤、水中存活数月；60℃、30分钟可灭活；耐胆盐，在一定程度上抵抗煌绿等染料，选择性培养基常利用此性质。
• EHEC O157：H7：鞭毛抗原可丢失而成O157：NM，动力试验阴性；耐酸性较强，pH2.5~3.0、37℃可耐受5小时；耐低温，可在冰箱内长期生存；75℃1分钟即被灭活；可被1mg/L余氯杀灭；适宜生长温度33~42℃。
• 生化：除不发酵或迟缓发酵山梨醇外，其余与普通大肠埃希氏菌基本相似；虽有uidA基因，但β-葡萄糖醛酸酶无活性，不能分解MUG产生荧光，即MUG阴性。

第153页：大肠杆菌的卫生学意义

卫生学意义：

• 作为饮水、牛奶或食品粪源性污染的卫生细菌学指标，是国际公认的卫生监测指示菌、微生物污染状况监测指标和HACCP实施效果评估指标。
• 致泻性大肠杆菌引起的腹泻病例始终位于第二位；可常年引发腹泻，以夏秋季为高峰，住院患者中婴幼儿占60%以上。
• 1982年在美国首次发现O157：H7型大肠杆菌，此后在美国、英国、加拿大、澳大利亚接连发生；1993年美国发生700人感染的暴发流行，至今美国暴发60多起，每年约2万人感染。
• 1996年夏天日本因萝卜苗及牛肉污染暴发集体食物中毒，波及40多个府县，患者累计9000余人，7人死亡。
• 世界卫生组织于1997年4月-5月召开专家会议，将汉堡包、碎牛肉、生乳、苹果汁、酸奶、奶酪和发酵香肠等列为重点注意的食品。
• 国家质检总局曾多次从美国进口鸡腿中检出O157：H7型大肠杆菌并作销毁处理。

第154页：

第155页：四类致泻大肠埃希氏菌特征对比表

四类致泻大肠埃希氏菌特征对比表：

第156页：致泻大肠埃希氏菌检测方法概览

检测方法：传统经典检测方法灵敏度只能达到200cfu/g，而食品、环境样品中EHEC O157:H7含量较低，致病量仅3cfu/g，故检测技术不断改进，现已建立6-10种检测方法。

• 一、致泻大肠埃希氏菌经典培养生化鉴定法
• 二、肠出血性大肠杆菌O157：H7：经典培养生化鉴定法、显色培养筛选法、PCR方法、实时PCR方法、VIDAS快速筛选法、BAX®全自动PCR方法、免疫磁珠富集方法、胶体金方法

第157页：经典培养生化鉴定法流程

致泻大肠埃希氏菌（经典培养生化鉴定法）流程环节：

• 1.1 增菌
• 1.2 分离
• 1.3 生化试验
• 1.4 血清学试验
• 1.5 肠毒素试验（略）
• 1.6 结果报告

第158页：增菌分离与生化试验

1.1增菌：无菌操作取检样25g（mL）加在225mL营养肉汤中均质，取适量接种乳糖胆盐培养基测定大肠菌群MPN，其余移入500mL广口瓶内于36℃±1℃培养6h；挑取1环接种于30mL肠道菌增菌肉汤内，42℃培养18h。

1.2分离：将乳糖发酵阳性的乳糖胆盐发酵管和增菌液分别划线接种麦康凯或伊红美蓝琼脂平板；污染严重的检样可直接划线接种，36℃±1℃培养18h~24h观察菌落，同时注意乳糖不发酵和迟缓发酵的菌落。

1.3生化试验：

• 接种三糖铁琼脂（TSI）或克氏双糖铁琼脂（KI）、蛋白胨水、半固体、pH7.2尿素琼脂、KCN肉汤和赖氨酸脱羧酶，36℃培养过夜。
• TSI斜面产酸或不产酸、底层产酸、H2S阴性、KCN阴性和尿素阴性的培养物为大肠埃希氏菌。
• TSI底层不产酸，或H2S、KCN、尿素有任一项阳性的培养物均非大肠埃希氏菌；必要时做氧化酶试验和革兰氏染色。

第159页：血清学试验与结果报告

1.4血清学试验：

• 假定试验：用致病性、侵袭性、产肠毒素大肠埃希氏菌多价O血清和出血性大肠埃希氏菌O157血清做玻片凝集试验；与某一种多价O血清凝集时再与所含单价O血清试验，呈强凝集即为假定试验阳性。
• 证实试验：制备O抗原悬液稀释至与MacFarland 3号比浊管相当浓度；原效价（1:160）~（1:320）的O血清用0.5%盐水稀释至1:40，在10mm×75mm试管内等量混合做单管凝集试验，50℃水浴16h后观察结果，出现凝集即可证实为该O抗原。

1.5肠毒素试验；1.6结果报告：综合生化试验、血清学试验、肠毒素试验作出报告。

• 检测周期：4-6天，灵敏度差，易造成漏检。

第160页：O157:H7经典培养鉴定流程

肠出血性大肠杆菌O157：H7（经典培养生化鉴定法）流程：

• 检样25g加入225mL m(EC)n肉汤，41℃增菌24h。
• 取10^-4、10^-5、10^-6三个稀释度各0.1mL，涂布SMAC（山梨醇麦康凯琼脂）平板，37℃培养24h。
• 挑取5-8个无色菌落转种MUG、LST发酵管培养基，37℃培养24h。
• 挑取阴性培养物转种普通营养琼脂，进行生化反应鉴定与血清凝集鉴定。
• 可采用EHEC乳胶凝集试验；按仪器生产厂说明采用VIDAS快速筛选法，45min可获初步结果。

第161页：VIDAS快速筛选法原理

检测原理：VIDAS快速筛选检测EHEC O157：H7是在自动VIDAS仪器上进行的酶联荧光免疫分析（ELFA）方法。

• 固相容器（SPR）：类似加样头的一次性使用装置，在检测中起固相和加样器作用，用抗EHEC O157：H7抗体包被。
• 各种试剂密封在试剂条内，所有检测步骤由仪器自动完成。
• 煮沸过的增菌肉汤加入试条孔后，样品在SPR内、外反复循环；标记有碱性磷酸酶的抗体与固定在SPR壁上的抗原结合，洗去未结合物。
• 荧光底物为磷酸4-甲基伞形物，结合在SPR壁上的酶将其转变为荧光产物4-甲基伞形酮，由光扫描器检测荧光强度，计算机自动分析结果并打印实验报告。

第162页：VIDAS样品制备与检测步骤

样品制备：225mL mEC+n中加入25克（25mL）样本；已加工的肉，向225mL mEC+n中加入50克样本，37℃振荡（120rpm）孵育24小时。

检测步骤：

1. VIDAS EHEC O157：H7试剂盒恢复到室温，其余试剂放回2~8℃贮存。
2. 标记样品并建立worklist，输入样品信息。
3. 将对照液或样品加入ECO试剂条样品孔中央。
4. 将ECO试剂条和SPR放入VIDAS仪相应位置。
5. 根据VIDAS操作手册开始检测，检测约需45分钟。
6. 所有用过的SPR和试条丢弃于适当容器。

第163页：VIDAS结果判断

结果判断：每份样品有两个荧光读数，第一个数值表示SPR未加入底物时容器和底物的本底，第二个数值表示酶复合物与底物反应后的结果，减去本底即为相对荧光值（RFV）；检测值由样品的RFV与标准对照值相比得出，再与计算机存储的阈值比较。

• 阈值<0.10：样品检测结果为阴性。
• 阈值≥0.10：样品检测结果为阳性。
• 优点：快速性（1-2天）、特异性、准确性、灵敏性。

第164页：BAX全自动PCR法原理

检测原理：BAX®EHEC O157：H7检测系统是应用多重PCR技术检测食品中该菌的自动方法。

• 检测对象为EHEC O157：H7特有的一段DNA片段，此片段稳定且不受环境影响。
• 只需微量的菌，PCR技术即可扩增出目的DNA片段，为菌体存在提供可靠证明。
• 系统将引物、多聚酶和核酸合并成稳定、干燥的人造药片装入PCR管，简化PCR过程；扩增后管子保持密封，显著降低扩增产物的潜在污染。
• PCR片剂中的荧光染料与双链DNA结合，光照时发出荧光信号，自动荧光检测分析产物得出阳性或阴性结果。

第165页：BAX操作步骤与结果判断

操作步骤：

1. 样品制备、增菌培养和分离见经典培养生化鉴定方法。
2. 细菌模板DNA的制备按BAX®系统EHEC O157：H7检测试剂盒说明书进行。
3. 按BAX®用户指导书准备试剂、进行检测和读取结果；按实验室工作指南装配、操作设备并记录使用情况。

结果判断和报告：

• 检测结果为阴性的样品可以出具阴性报告。
• 检测结果为阳性的样品需要继续按传统方法确认。
• 结果不确定或错误的样品，需用BAX®系统确认，直至显示为阴性或阳性结果。
• 优点：快速性（1-2天）、特异性、准确性、灵敏性。

第166页：免疫磁珠富集方法

免疫磁珠富集方法流程：

• 检样25g经传统增菌培养。
• 取一定量增菌液加入Dynabeads anti-O157磁珠，反应一定时间。
• 在磁场中倒掉液体，用缓冲液清洗几次。
• 收集磁珠与大肠杆菌O157复合体，在选择性培养基上进行培养。
• 优点：准确率高、可靠、灵敏度高、特异性强。

第167页：胶体金方法原理

原理：Reveal®大肠杆菌O157：H7检测系统利用不同富集培养基为该菌提供易利用的营养成分和快速生长因子，可在8小时内获得结果；使用细菌学分析指南（BAM，1998）或USDA/FSIS提供的富集培养基结合Reveal检测装置，可在20小时内完成检测。

• 将少量富集培养物（120µL）滴加到检测卡圆形样品区，样品经毛细管作用渗过含金标抗体的试剂区。
• 样品中存在抗原即与胶体金标记抗体结合，复合物渗过硝化纤维膜时被带状分布的抗体捕获，显示一条可见线。
• 试剂区还含金复合物指示剂，无论抗原存在与否都会迁移至阴性对照捕获区形成对照线，保证操作正确无误。

第168页：胶体金检测8小时与20小时步骤

Reveal 8小时培养基：

1. 培养基制备：1瓶Reveal 8小时培养基加入无菌袋，加225mL 42℃无菌水，用力混匀至溶解；使用前保持42℃不超过6小时，最好制备好立即使用。
2. 加样：取25g样品到无菌袋内彻底混匀。
3. 培养：松散地紧闭袋子，42±1℃培养8小时。
4. 混匀：取出袋子抓牢顶部2-3英寸处支撑底部，左右剧烈混匀。
5. 样品处理：移取5mL样品到试管内加热，聚丙烯试管水浴20分钟、玻璃试管10分钟，或微波加热至沸腾；取出冷却至室温15-30℃。

Reveal 20小时培养基：加225mL 36±1℃无菌水溶解培养基；加入25g样品到含225mL mEC+N的无菌袋中，封紧后置于细菌分离器2分钟；松散地紧闭袋子36±1℃培养20小时（不要密闭，空气交换为该菌适宜生长所必需）；培养后同法剧烈混匀。

第169页：Reveal检测与结果判断

Reveal检测：

1. 检测装置使用前放置到室温（25℃）。
2. 从锡箔袋中取出所需数量的检测装置置于平面，对每个样品贴标签。
3. 用移液器加入120µL样品至样品区；移液器垂直于样品区，加入5滴样品。
4. 显色15分钟后观察并记录结果，20分钟后观察因过度显色而不准确。

结果判断：

• 15分钟内在C、T区都出现显色线：阳性。
• 只有C区出现显色线，T区无显色线：阴性。
• C区无显色线，无论T区是否显色：无效。
• 优点：操作简便、快速、灵敏。

第170页：检测方法小结与展望

五、希望：

• 能够全面掌握检测方法。
• 能够在检测工作中总结出经验。
• 能够大胆拓宽思路，将方法相互融合贯通。
• 将检出阳性的菌株保存完好。
• 注意在适当情况下采取防护措施。

第171页：

第172页：

第173页：

第174页：

第175页：

第176页：

第177页：

第178页：

第179页：

第180页：

第181页：

第182页：

第183页：

第184页：

第185页：

第186页：

第187页：

第188页：

第189页：

第190页：

第191页：

第192页：

第193页：

第194页：

第195页：

第196页：

第197页：

第198页：

第199页：

第200页：

第201页：

第202页：

第203页：单核细胞增生李斯特菌

章节主题

单核细胞增生李斯特菌

本章内容

李斯特氏菌属、生物学特性、流行病学、致病性、实验室危害及其预防、检测程序与快速检测方法

第204页：

第205页：

第206页：

第207页：

第208页：

第209页：

第210页：

第211页：

第212页：单核增生李斯特氏菌检测概述

章节标题

单核增生李斯特氏菌检测概述

承接内容

紧接致泻大肠埃希氏菌检测之后，介绍李斯特氏菌属及单核增生李斯特氏菌的检测技术

第213页：本章内容目录

内容：

• 简介李斯特氏菌属
• 单核增生李斯特氏菌生物学特性
• 流行病学
• 致病性
• 实验室危害及其预防
• 检测程序
• 快速检测方法

第214页：李斯特氏菌属的六个种

李斯特氏菌属（Listeria）普遍存在于环境中，最新分类学研究将其分为六个种；其中只有单核增生李斯特氏菌和伊氏李斯特氏菌两种致病菌可引起老鼠和其他动物发病，通常只有单核增生李斯特氏菌与人类李斯特氏菌症相关，因此最具检测意义。

第215页：菌体形态及染色特征

菌体形态及染色特征：

• 革兰氏阳性。
• 小的、类似球形的杆菌，0.4~0.5×0.5~2µm，在有些培养基中稍弯，两端钝圆；单个、成短链、细胞彼此连成V形，或成群的细胞沿长轴方向平行排列；较老或生长不良的培养物中可形成丝状。
• 20-25℃以4根周生鞭毛运动，37℃只有较少鞭毛或1根鞭毛。
• 无芽孢、无荚膜。

第216页：

第217页：培养特性（一）

培养特性：

• 兼性厌氧。
• 20~25℃培养有动力；穿刺培养2-5天可见倒立伞状生长，肉汤培养物显微镜下可见翻跟斗运动。
• 生长温度范围2-42℃（亦有报道0℃能缓慢生长），最适培养温度35~37℃。
• pH范围pH4.4~pH9.6。

第218页：培养特性（二）菌落形态

菌落形态：

• 固体培养基上菌落初始很小、透明、边缘整齐、呈露滴状，随菌落增大变得不透明。
• 5-7%血平板上菌落通常不大、灰白色，刺种培养后可产生窄小的β-溶血环。
• 0.6%酵母浸膏胰酪大豆琼脂（TSAYE）上，用45度角入射光照射菌落、通过解剖镜垂直观察，菌落呈蓝色、灰色或蓝灰色。

第219页：生化反应特征

生化反应：

• 触酶阳性，氧化酶阴性。
• 发酵多种糖类产酸不产气：葡萄糖、乳糖、水杨素、麦芽糖、鼠李糖、七叶苷、蔗糖（迟发酵）、山梨醇、海藻糖、果糖。
• 不发酵木糖、甘露醇、肌醇、阿拉伯糖、侧金盏花醇、棉子糖、卫矛醇和纤维二糖。
• 不利用枸橼酸盐，40%胆汁不溶解；吲哚、硫化氢、尿素、明胶液化、硝酸盐还原、赖氨酸、鸟氨酸均阴性。
• VP、甲基红试验和精氨酸水解阳性。

第220页：血清型

血清型：根据菌体（O）抗原和鞭毛（H）抗原，将单增李氏菌分成13个血清型。

• 13个血清型：1/2a、1/2b、1/2c、3a、3b、3c、4a、4b、4ab、4c、4d、4e和"7"。
• 致病菌株的血清型一般为1/2b、1/2c、3a、3b、3c、4a、1/2a和4b，后两型尤多。

第221页：抵抗力

抵抗力：

• 对理化因素抵抗力较强，在土壤、粪便、青储饲料和食品中能长期存活。
• 对碱和盐抵抗力强；60-70℃经5-20min可杀死；70%酒精5min、2.5%石炭酸、2.5%氢氧化钠、2.5%福尔马林20min可杀死此菌。
• 湿热灭菌（121℃，至少15min）和干热灭菌（160-170℃，至少1hr）可杀灭该菌；对紫外线和γ射线敏感。
• 对青霉素、氨苄青霉素、四环素（已产生抗性）、氨基糖苷类、氯霉素均敏感。

第222页：流行病学：分布与寄主

流行病学：

• 分布：广泛存在于自然界中，土壤、地表水、污水、废水、青储饲料、动植物及其食品中均有该菌存在，动物很容易食入该菌，并通过口腔-粪便途径传播。
• 寄主范围：哺乳动物、鸟类、鱼类、甲壳类和昆虫。

第223页：食品污染率与相关食品

污染情况：据报道有1-10%的人类肠道中存在单核增生李斯特氏菌，85-90%的病例是由被污染的食品引起的。

相关食品：鲜奶、巴氏消毒奶、奶酪（尤其是软奶酪）、冰激凌、生的蔬菜、发酵过的生肉制作的香肠、生的和加工过的禽肉、各种生的肉类、生的和烟熏的鱼肉。

第224页：1996至1999年回收食品种类

本页内容

1996年至1999年因单核增生李斯特氏菌回收的食品种类统计图示。

数据来源

USDA及FDA报告。

补充建议

源文件未提取到图中具体食品类别与数量，建议对照原图补充各类食品的回收批次数据。

第225页：致病性与治疗

临床表现：健康成人个体出现轻微类似流感症状；新生儿、孕妇、免疫缺陷患者表现为呼吸急促、呕吐、出血性皮疹、化脓性结膜炎、发热、抽搐、昏迷、自然流产或死婴、脑膜炎、败血症直至死亡。

怀孕期妇女的感染，母亲通常能存活下来。抗生素治疗用青霉素或氨苄青霉素注射给药，或与氨基糖苷类抗生素一起用药。

第226页：感染人群与易感者

感染人群：感染剂量未知，与该菌毒力和易感人群的年龄、免疫状态有关。

易感者：

• 孕妇/胎儿——围产期和新生儿的感染。
• 接受皮质激素、抗癌剂治疗、器官移植治疗、艾滋病患者等免疫缺损者。
• 癌症病人——尤其是白血病患者。
• 较少见的报道：糖尿病、肝硬化、哮喘和溃疡性结肠炎患者。
• 年纪较大的人。
• 无免疫缺陷的健康人，食用被该菌尤其是大量污染的食品后也有患病危险。

第227页：致病机理

致病机理：单增李氏菌的抗原结构与毒力无关，其致病性与毒力机理如下。

1. 寄生物介导的细胞内增生，使其附着及进入肠细胞与巨噬细胞。
2. 抗活化的巨噬细胞：该菌有细菌性过氧化物歧化酶，能抗活化巨噬细胞内过氧物的分解。
3. 溶血素，即李氏杆菌素O，可从培养物上清液中获得，有α和β两种，为毒力因子。

第228页：实验室危害

实验室危害：

• 不是一种普遍的与实验室相关的传染病，目前只有少数有报道的案例发生。
• 直接摄取是最普遍的感染方式。
• 暴露在该菌高浓度的气溶胶中，也可通过眼睛和破损的皮肤、粘膜进入体内造成感染。

第229页：实验室操作注意事项

注意事项：

• 生物安全2级，操作时应有相应的防污染设施；进行可能产生气溶胶的操作时应在生物安全柜内完成。
• 直接接触有感染性的材料时，必须穿着实验服，戴手套和护目镜。
• 怀孕的妇女应避免接触传染物。

第230页：溅洒废弃与储存要求

溅洒

使气溶胶沉降，穿着防护服装，用纸巾轻轻覆盖溅洒处，加入1%次氯酸钠溶液，由周边向中心加，清理前留充足的接触时间（30min）。

废弃

废弃前先采取净化措施：高压蒸汽灭菌、化学消毒、焚烧等。

储存

在有适当标记的密封容器内储存。

第231页：检测程序：增菌肉汤

检测程序——增菌：目前常用的单核增生李斯特氏菌检测增菌肉汤主要有五种。

• 半量Fraser肉汤
• Fraser肉汤（FB）
• UVM（Modified University of Vermont broth，也叫UVM1）
• LEB（Listeria enrichment broth）
• BLEB（buffered Listeria enrichment broth）

第232页：Fraser肉汤与半量Fraser肉汤

半量Fraser肉汤和Fraser肉汤：具有选择性和区别性。加入柠檬酸铁铵和七叶灵起到区别作用，李斯特氏菌可水解七叶灵，与培养基中铁离子反应使培养基变黑，可直观判断是否有单核李斯特氏菌生长；氯化锂、吖啶黄和萘啶酮酸作为选择性因子，两种肉汤所用添加剂种类相同。

第233页：UVM增菌肉汤

UVM（Modified University of Vermont broth）：

• 只有选择性，没有区别性。
• 加入萘啶酮酸和盐酸吖啶黄作为选择性因子。
• 虽含有七叶灵，但未添加柠檬酸铁铵，不能发生黑色的颜色反应。

第234页：LEB与BLEB增菌肉汤

LEB和BLEB：只有选择性，没有区别性。

• LEB：在TSB-YE基础上加入盐酸吖啶黄、萘啶酮酸和放线菌酮等选择性因子；加入丙酮酸钠有助于受损细胞恢复；不含七叶灵和柠檬酸铁铵，无颜色反应。
• BLEB：在LEB基础上加入缓冲体系——磷酸二氢钾和磷酸氢二钠。

第235页：检测程序：分离培养基

检测程序——分离：

• 分离培养基有OXA、PALCOM、LPM、MOX等，但首选仍然是OXA。
• 分离原理：基于李斯特氏菌具有β-D-葡萄糖苷酶活性，能水解培养基中的七叶灵，产生七叶苷，与铁离子产生颜色反应，使菌落为棕褐色并带有褐色晕圈；致病性和非致病性李斯特氏菌都能发生这种反应。
• 选择性显色培养基：BCM、ALOA、CHROMagar listeria、Rapid’L. mono等，原理主要是检测毒力基因编码的溶血素，此种溶血素只存在于单核增生李斯特氏菌和伊氏李斯特氏菌中，可将此两种菌与李斯特属其他种分开。

第236页：OXA平板单增李斯特菌菌落

培养基与菌株

OXA平板，单核增生李斯特氏菌ATCC 19117。

培养条件

48h，35℃培养。

观察要点

菌落因水解七叶灵与铁离子反应呈棕褐色并带褐色晕圈。

第237页：OXA平板无害李斯特菌菌落

培养基与菌株

OXA平板，无害李斯特氏菌ATCC 33090。

培养条件

48h，35℃培养。

鉴别提示

非致病李斯特氏菌在OXA上同样显色，需结合溶血与糖发酵等试验区分。

第238页：检测程序：鉴定项目

检测程序——鉴定：

第239页：动力试验伞形生长

试验项目

动力试验。

典型结果

穿刺培养后沿穿刺线呈伞形生长，为该菌动力判定的重要依据。

培养时间

一般观察至7天。

第240页：血平板单增李斯特菌菌落

培养基与菌株

血平板，单核增生李斯特氏菌ATCC 19117。

培养条件

36h，35℃培养。

观察要点

菌落灰白色不大，刺种后可产生窄小的β-溶血环。

第241页：血平板无害李斯特菌菌落

培养基与菌株

血平板，无害李斯特氏菌ATCC 33090。

培养条件

36h，35℃培养。

鉴别提示

与单核增生李斯特氏菌在血平板上的溶血表现存在差异，可辅助区分。

第242页：血平板伊氏李斯特菌菌落

培养基与菌株

血平板，伊氏李斯特氏菌ATCC 19119。

培养条件

24h，35℃培养。

观察要点

伊氏李斯特氏菌为李斯特氏菌属中另一个致病种，常与单核增生李斯特氏菌同步对照观察。

第243页：单增李斯特菌检测流程

单核增生李斯特氏菌检测流程：

• 25g样品加入225mL BLEB基础（加入丙酮酸钠），再加入萘啶酮酸、盐酸吖啶黄、放线菌酮，30℃增菌4hr。
• 划线接种OXA平板，30℃培养24hr和48hr；同时接种科玛嘉李氏菌显色培养基，35℃培养24hr。
• TSA-YE分纯，35℃培养24hr-48hr（或18-24hr）。
• 过氧化氢酶试验、革兰氏染色、溶血试验、糖发酵试验（木糖、鼠李糖）、API Listeria，35℃培养24-48hr。
• 报告结果。

第244页：各官方方法比较（一）

各官方方法比较：方法一为加工与未加工样品分别列出的两套流程。

第245页：各官方方法比较（二）

各官方方法比较（续）：

第246页：红肉禽蛋与环境样品分离方法

本页内容

红肉、禽、蛋和环境样品中分离和鉴定单核增生李斯特氏菌的方法图示。

补充建议

源文件未提取到流程细节文字，建议对照原图补充增菌、分离、鉴定各环节的条件与判定要点。

第247页：红肉禽蛋环境样品方法（续）

本页内容

上一页同题内容的续页，仍为红肉、禽、蛋和环境样品中分离和鉴定方法的图示。

补充说明

源文件仅重复记录该标题，未提取到后续步骤文字，建议对照原图合并补充完整流程。

第248页：FDA李斯特氏菌属快速筛选试剂盒

FDA：李斯特氏菌属的快速筛选试剂盒（Listeria Genus Detection Test Kits Prescribed for Regulatory Screening）：

第249页：FDA生化鉴定的替代方法

FDA：生化鉴定的替代方法：

• Vitek Automicrobic Gram Positive and Gram Negative Identification cards（bioMerieux）。
• API Listeria（bioMerieux），无需额外做CAMP试验。
• MICRO-ID^TMkit（bioMerieux），在已知CAMP反应时可用于李斯特氏菌的种间鉴定。
• The Phenotype MicroArray for Listeria（BiOLOG），新近推出的鉴定试剂盒。

第250页：FDA确证单增李斯特菌试剂盒

FDA：鉴定单核增生李斯特氏菌的试剂盒（Test Kits Useful in Confirming Listeria Isolates as Listeria monocytogenes or not）：

• AccuProbe^TM Listeria monocytogenes culture confirmation test（Gen-Probe）。
• GeneTrak Listeria monocytogenes test kit（Neogen）。
• Probelia Listeria monocytogenes test kit（BioControl）。
• VIDAS Listeria monocytogenes test kit（bioMerieux）。
• Transia Plate Listeria monocytogenes（Diffchamb SA）。
• FDA、SRL应用Niederhauser等人的PCR检测与鉴定方法。
• BAX Listeria monocytogenes test（Qualicon）。

第251页：单增李斯特菌快速方法总览

单核增生李斯特氏菌检测快速方法：

• VIDAS
• VITEK
• API Listeria
• BAX
• TECTA

第252页：VIDAS LMO与VIDAS LIS

VIDAS LMO

检测单核增生李斯特氏菌（Listeria monocytogenes）。

VIDAS LIS

检测李斯特氏菌属（Listeria spp.）。

第253页：VITEK快速鉴定

方法名称

VITEK。

用途

单核增生李斯特氏菌检测的快速方法之一，用于分离菌株的自动化生化鉴定。

补充建议

本页为仪器与试剂图示，建议对照原图补充卡片类型与上机流程说明。

第254页：API Listeria快速鉴定

方法名称

API Listeria。

用途

单核增生李斯特氏菌检测的快速方法之一，无需额外做CAMP试验即可完成鉴定。

补充建议

本页为试剂盒图示，建议对照原图补充生化反应谱与判读说明。

第255页：BAX全自动PCR检测

方法名称

BAX。

用途

单核增生李斯特氏菌检测的快速方法之一，应用PCR技术完成自动化筛查。

补充建议

本页为仪器与试剂图示，建议对照原图补充增菌与模板制备流程。

第256页：TECRA检测试剂

方法名称

TECRA^®UNIQUE PLUS^TM、TECRA^®UNIQUE^TM。

用途

李斯特氏菌属免疫检测试剂，其中TECRA Listeria Visual Immunoassay被列为AOAC官方方法995.22。

补充建议

本页为试剂图示，建议对照原图补充检测步骤与结果判读说明。

第257页：

第258页：

第259页：

第260页：

第261页：

第262页：

第263页：

第264页：

第265页：

第266页：

第267页：

第268页：

第269页：

第270页：

第271页：

第272页：

第273页：

第274页：

第275页：

第276页：

第277页：

第278页：

第279页：

第280页：

第281页：

第282页：

第283页：

第284页：

第285页：

第286页：

第287页：

第288页：

第289页：

第290页：

第291页：

第292页：

第293页：

第294页：

第295页：

第296页：

第297页：

第298页：

第299页：

第300页：

第301页：

第302页：

第303页：

第304页：

第305页：

第306页：

第307页：

第308页：

第309页：

第310页：

第311页：

第312页：

第313页：

第314页：

第315页：

第316页：

第317页：

第318页：

第319页：

第320页：

第321页：

第322页：

第323页：

第324页：

第325页：

第326页：

第327页：

第328页：

第329页：

第330页：

第331页：

第332页：

第333页：

第334页：

第335页：

第336页：

第337页：

第338页：

第339页：

第340页：

第341页：

第342页：

第343页：

第344页：

第345页：

第346页：

第347页：

第348页：

第349页：

第350页：

第351页：

第352页：

第353页：

第354页：

第355页：

第356页：

第357页：

第358页：

第359页：

第360页：

第361页：

第362页：

第363页：

第364页：

第365页：

第366页：

第367页：

第368页：

第369页：

第370页：

第371页：

第372页：

第373页：

第374页：

第375页：

第376页：

第377页：

第378页：

第379页：

第380页：

第381页：