第1页：细胞生物学实验技术
第三章细胞生物学实验技术METHODS AND TECHNIQUES
第2页：第二节 生化与分子生物学技术
第二节生物化学与分子生物学技术
第3页：组织化学与细胞化学染色
- 组织化学和细胞化学染色方法（histochemicalandcytochemicalstainingmethod）用于对某些细胞成分进行定性和定位研究。
- （一）固定1.物理固定：血膜空气快速干燥、冷冻干燥。2.化学固定：如甲醇、乙醇、丙酮、甲醛、戊二醛和锇酸等试剂。显示多糖常用乙醇固定，
第4页：显色显示方法
（二）显示方法1.金属沉淀法：如磷酸酶分解磷酸酯底物后，反应产物最终生成CoS或PbS有色沉淀，而显示出酶活性。2.Schiff反应：细胞中的醛基可使Schiff试剂中的无色品红变为红色。用于显示糖和脱氧核糖核酸（Feulgen反应）。3
第5页：免疫细胞化学
二、免疫细胞化学immunocytochemistry
- 概念：根据免疫学原理，利用抗体同特定抗原专一结合，对抗原进行定位测定的技术。常用的标记物有荧光素和酶。
- 免疫荧光法（immunofluorescenttechnique）：常用的萤光素有异硫氰酸荧光素、罗丹明等。
第6页：显微光谱分析技术
三、显微光谱分析技术
- 细胞中有一些成分具有特定的吸收光谱，核酸、蛋白质、细胞色素、维生素等都有自己特征性的吸收曲线。
- 可利用显微分光光度计对某些成分进行定位、定性和定量测定。
第7页：放射自显影术
四、放射自显影术
- 用于研究标记化合物在机体、组织和细胞中的分布、定位、排出以及合成、更新、作用机理、作用部位等等。
- 原理：将放射性同位素标记的化合物导入生物体内，经过一段时间后，制取切片，涂上卤化银乳胶，经放射性曝光，使乳胶感光。
第8页：分子杂交技术
五、分子杂交技术
- 具有互补核苷酸序列的两条单链核苷酸分子片段，在适当条件下，通过氢键结合，形成DNA-DNA，DNA-RNA或RNA-RNA杂交的双链分子。这种技术可用来测定单链分子核苷酸序列间是否具有互补关系。
- （一）原位杂交（insituhybridization）。
- 用于检测染色体上的特殊DNA序列。
第9页：Southern杂交
（二）Southern杂交
- 是体外分析特异DNA序列的方法，操作时先用限制性内切酶将核DNA或线粒体DNA切成DNA片段，经凝胶电泳分离后，转移到醋酸纤维薄膜上，再用探针杂交，通过放射自显影，即可辨认出与探针互补的特殊核苷序列。
- 将RNA
第10页：PCR技术
六、PCR技术
- PCR即：polymerase chain reaction。
- 反应体系：①样品DNA；②引物（primer），约15-20个核苷酸；③4种dNTP；④Tag DNA聚合酶，来自于嗜热水生菌Thermus aquaticus，最适作用温度75~80℃，短时间在95℃下不失活。⑤缓冲体系和Mg2+。
第11页：PCR原理
PCR原理
