第1页：第三节 细胞分离技术
第三章细胞生物学实验技术METHODS AND TECHNIQUES
第2页：本章内容提要（分离技术）
第三节细胞分离技术
第3页：离心技术的用途
一、离心技术
- 是分离细胞器（如细胞核、线粒体、高尔基体）及各种大分子基本手段。
- 转速为10~25kr/min的离心机称为高速离心机。
- 转速>25kr/min，离心力>89Kｇ者称为超速离心机。
- 目前超速离心机的最高转速可达100000r/min，离心力超过500Kg。
第4页：差速离心
- （一）差速离心Differential centrifugation
- 特点：
- 介质密度均一；
- 速度由低向高，逐级离心。
- 用途：分离大小相差悬殊的细胞和细胞器。
- 沉降顺序：核——线粒体——溶酶体与过氧化物酶体——内质网与高基体——核蛋白体。
- 可将细胞器初步分离，
第5页：差速离心示意图
Low speedHigh speedDifferential centrifugation
第6页：密度梯度离心
（二）密度梯度离心
- 用介质在离心管内形成一连续或不连续的密度梯度，将细胞混悬液或匀浆置于介质的顶部，通过离心力场的作用使细胞分层、分离。
- 类型：速度沉降、等密度沉降。
- 常用介质：氯化铯、蔗糖、多聚蔗糖。
第7页：速度沉降
1、速度沉降velocity sedimentation
- 用途：分离密度相近而大小不等的细胞或细胞器。
- 特点：介质密度较低，介质的最大密度应小于被分离生物颗粒的最小密度。
- 原理：介质密度梯度平缓，分离物按各自的沉降系数以不同的速度沉降而达到分离。
第8页：等密度沉降
2.等密度沉降isopycnic sedimentation
- 用途：分离密度不等的颗粒。
- 特点：
- 介质密度较高，陡度大，介质的最高密度应大于被分离组分的最大密度。
- 所需的力场通常比速率沉降法大10~100倍，往往需要高速或超速离心。
第9页：速度沉降与等密度沉降对比
Velocity (A) and Equilibrium (B) sedimentation
第10页：流式细胞术
二、流式细胞术
- 用途：对单个细胞进行快速定量分析与分选的一门技术。
- 原理：包在鞘液中的细胞通过高频振荡控制的喷嘴，形成包含单个细胞的液滴，在激光束的照射下，这些细胞发出散射光和荧光，经探测器检测，转换为电信号，送入计算机处理，输出统计结果
第11页：
第12页：细胞电泳
三、细胞电泳
- 原理：在一定PH值下细胞表面带有净的正或负电荷，能在外加电场的作用下发生泳动。
- 各种细胞或处于不同生理状态的同种细胞荷电量有所不同，故在一定的电场中的泳动速度不同。
- 用途：检测细胞生理状态和病理状态、分离不同种类的细胞，如分离哺乳动物的XY精子。
