04 第4节高效毛细管电泳分离模式.4.ppt

第1页：高效毛细管电泳分离模式

高效毛细管电泳分离模式

本页为章节封面与目录，列出本章主要内容。

• 一、毛细管区带电泳(
• 二、毛细管凝胶电泳(
• 三、胶束电动毛细管色谱
• 四、毛细管等电聚焦(
• 五、毛细管等速电泳

第2页：分离类型

分离类型

• 八种分离类型，介绍常用的几种。
• 根据试样性质不同，采用不同的分离类型。
• 每种机理的选择性不同。

第3页：毛细管区带电泳

毛细管区带电泳

• CZE带电粒子的迁移速度=电泳和电渗流速度的矢量和。
• 正离子：两种效应的运动方向一致，在负极最先流出。
• 中性粒子：无电泳现象，受电渗流影响，在阳离子后流出。
• 阴离子：两种效应的运动方向相反。
• ν电渗流>ν电泳时,阴离子在负极最后流出,在这种情况下,不但可以按类分离,同种类离子由于差速迁移被相互分离。
• 最基本、应用广的分离模式。

第4页：毛细管凝胶电泳

毛细管凝胶电泳

• CGE将聚丙烯酰胺等在毛细管柱内交联生成凝胶。
• 其具有多孔性，类似分子筛的作用，试样分子按大小分离。
• 能够有效减小组分扩散，所得峰型尖锐，分离效率高。
• 蛋白质、DNA等的电荷/质量比与分子大小无关，CZE模式很难分离，采用CGE能获得良好分离，DAN排序的重要手段。
• 特点：抗对流性好，散热性好，分离度极高。
• 无胶筛分技术：采用低粘度的线性聚合物溶液代替高粘度交联聚丙烯酰胺。
• 柱便宜、易制备。

第5页：缓冲溶液中加入离子型表面活性剂

缓冲溶液中加入离子型表面活性剂

• 浓度达到临界浓度，形成一疏水内核、外部带负电的胶束。
• 三、胶束电动毛细管色谱（MECC，MEKC），MEKC在电场力的作用下，胶束在柱中移动。

第6页：电泳流和电渗流

电泳流和电渗流

• 方向相反，且ν电渗流> ν电泳，负电胶束以较慢的速度向负极移动。
• 色谱与电泳分离模式的结合。
• 中性分子在胶束相和溶液（水相）间分配，疏水性强的组分与胶束结合的较牢，流出时间长。
• 可用来分离中性物质，扩展了高效毛细管电泳的应用范围。

第7页：根据等电点差别分离

根据等电点差别分离

• 生物大分子的高分辨率电泳技术。
• 毛细管内充有两性电解质（合成的具有不同等电点范围的脂肪族多胺基多羧酸混合物），当施加直流电压（6～8V）时，管内将建立一个由阳极到阴极逐步升高的pH梯度。
• 氨基酸、蛋白质、多肽等的所带电荷与溶液pH有关，在酸性溶液中带正电荷，反之带负电荷。
• 在其等电点时，呈电中性，淌度为零。
• 四、毛细管等电聚焦，CIEF。

第8页：聚焦

聚焦

• 具有不同等电点的生物试样在电场力的作用下迁移，分别到达满足其等电点pH的位置时，呈电中性，停止移动，形成窄溶质带而相互分离。
• 阳极端装稀磷酸溶液，阴极端装稀溶液。
• 加压将毛细管内分离后的溶液推出经过检测器检测。
• 电渗流在CIEF中不利，应消除或减小。

第9页：两种淌度

两种淌度

• 差别很大的缓冲液分别作为前导离子(充满毛细管)和尾随离子，试样离子的淌度全部位于两者之间，并以同一速度移动。
• 负离子分析时，前导电解质的淌度大于试样中所有负离子的。
• 所有试样都按前导离子的速度等速向阳极前进，逐渐形成各自独立的区带而分离。
• 阴极进样，阳极检测。
• 五、毛细管等速电泳，CITP。

第10页：不同离子的淌度

不同离子的淌度

• 不同，所形成区带的电场强度不同(ν=μ)，淌度大的离子区带电场强度小。
• 沿出口到进口，将不同区带依次排序1、2、3、4电场强度依次增大。
• 假设“2”号中离子扩散到“3”号，该区电场强度大，离子被加速，返回到“2”区。
• 当“2”号中离子跑到“1”号区，离子被减速使之归队。
• 特点：界面明显，富集、浓缩作用。

第11页：在毛细管壁上键合或涂渍高效液相色谱

在毛细管壁上键合或涂渍高效液相色谱

• 固定液，以电渗流为流动相，试样组分在两相间的分配为分离机理的电动色谱过程。
• 六、毛细管电渗色谱，CEC。

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• 一、毛细管区带电泳
• 二、毛细管凝胶电泳
• 三、胶束电动毛细管色谱
• 四、毛细管等电聚焦
• 五、毛细管等速电泳
• 六、毛细管电渗色谱