41 第四节高效毛细管电泳分离模式.ppt

第1页：高效毛细管电泳分离模式

第十一章 高效毛细管电泳分析法 第四节 高效毛细管电泳分离模式

• 毛细管区带电泳(
• 毛细管凝胶电泳(
• 胶束电动毛细管色谱
• 毛细管等电聚焦(
• 毛细管等速电泳

第2页：分离类型八种

分离类型八种

• 分离类型，介绍常用的几种
• 根据试样性质不同，采用不同的分离类型
• 每种机理的选择性不同

第3页：毛细管区带电泳

毛细管区带电泳

• CZE带电粒子的迁移速度=电泳和电渗流速度的矢量和
• 正离子：两种效应的运动方向一致，在负极最先流出
• 中性粒子：无电泳现象，受电渗流影响，在阳离子后流出
• 阴离子：两种效应的运动方向相反
• ν电渗流>ν电泳时,阴离子在负极最后流出,在这种情况下,不但可以按类分离,同种类离子由于差速迁移被相互分离
• 最基本、应用广的分离模式

第4页：毛细管凝胶电泳

毛细管凝胶电泳

• CGE将聚丙烯酰胺等在毛细管柱内交联生成凝胶
• 其具有多孔性，类似分子筛的作用，试样分子按大小分离
• 能够有效减小组分扩散，所得峰型尖锐，分离效率高
• 蛋白质、DNA等的电荷/质量比与分子大小无关，CZE模式很难分离，采用CGE能获得良好分离，DAN排序的重要手段
• 特点：抗对流性好，散热性好，分离度极高
• 无胶筛分技术：采用低粘度的线性聚合物溶液代替高粘度交联聚丙烯酰胺
• 柱便宜、易制备

第5页：缓冲溶液中加入离子型表面活性剂

缓冲溶液中加入离子型表面活性剂

• 其浓度达到临界浓度，形成一疏水内核、外部带负电的胶束
• 三、胶束电动毛细管色谱（MECC，，MEKC在电场力的作用下，胶束在柱中移动

第6页：电泳流和电渗流的方向相反

电泳流和电渗流的方向相反

• 且ν电渗流>ν电泳，负电胶束以较慢的速度向负极移动
• 5.色谱与电泳分离模式的结合
• 3.中性分子在胶束相和溶液（水相）间分配，疏水性强的组分与胶束结合的较牢，流出时间长
• 4.可用来分离中性物质，扩展了高效毛细管电泳的应用范围

第7页：根据等电点差别分离生物大分子

根据等电点差别分离生物大分子

• 的高分辨率电泳技术
• 2.毛细管内充有两性电解质（合成的具有不同等电点范围的脂肪族多胺基多羧酸混合物），当施加直流电压（6～8V）时，管内将建立一个由阳极到阴极逐步升高的pH梯度
• 3.氨基酸、蛋白质、多肽等的所带电荷与溶液pH有关，在酸性溶液中带正电荷，反之带负电荷
• 在其等电点时，呈电中性，淌度为零
• 四、毛细管等电聚焦，CIEF

第8页：聚焦

聚焦

• 具有不同等电点的生物试样在电场力的作用下迁移，分别到达满足其等电点pH的位置时，呈电中性，停止移动，形成窄溶质带而相互分离
• 5.阳极端装稀磷酸溶液，阴极端装稀NaOH溶液
• 6.加压将毛细管内分离后的溶液推出经过检测器检测
• 7.电渗流在CIEF中不利，应消除或减小

第9页：将两种淌度差别很大的缓冲液分

将两种淌度差别很大的缓冲液分

• 别作为前导离子(充满毛细管)和尾随离子，试样离子的淌度全部位于两者之间，并以同一速度移动
• 2.负离子分析时，前导电解质的淌度大于试样中所有负离子的
• 所有试样都按前导离子的速度等速向阳极前进，逐渐形成各自独立的区带而分离
• 阴极进样，阳极检测
• 五、毛细管等速电泳，CITP

第10页：不同离子的淌度不同

不同离子的淌度不同

• 所形成区带的电场强度不同(ν=μE)，淌度大的离子区带电场强度小
• 沿出口到进口，将不同区带依次排序1、2、3、4××××电场强度依次增大
• 假设“2”号中离子扩散到“3”号，该区电场强度大，离子被加速，返回到“2”区
• 当“2”号中离子跑到“1”号区，离子被减速使之归队
• 4.
• 特点：界面明显，富集、浓缩作用
• CITP

第11页：在毛细管壁上键合或涂渍高效液

在毛细管壁上键合或涂渍高效液

• 相色谱的固定液，以电渗流为流动相，试样组分在两相间的分配为分离机理的电动色谱过程
• 六、毛细管电渗色谱，CEC

第12页：高效毛细管电泳分析法内容选择

高效毛细管电泳分析法内容选择

• 概述
• 高效毛细管电泳的理论基础
• 高效毛细管电泳仪器
• 高效毛细管电泳的分离模式
• 应用与进展