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第1页：影响分离的因素与操作条件的选择

第十章 液相色谱分析法 第四节 影响分离的因素与操作条件的选择

• 影响分离的因素
• 分离类型的选择
• 液相色谱的应用
• 液相制备色谱

第2页：影响分离的因素

影响分离的因素

• 1.影响分离的因素与提高柱效的途径•在高效液相色谱中,液体的扩散系数仅为气体的万分之一
• 则速率方程中的分子扩散项B/U较小
• 可以忽略不计
• 即：H=A+Cu故液相色谱H-u曲线与气相色谱的形状不同
• 如图所示。

第3页：•液体的黏度比气体大一百倍

•液体的黏度比气体大一百倍

• 密度为气体的一千倍，故降低传质阻力是提高柱效主要途径
• •由速率方程，降低固定相粒度可提高柱效
• •液相色谱中，不可能通过增加柱温来改善传质
• 恒温•改变淋洗液组成、极性是改善分离的最直接的因素

第4页：流速流速大于

流速流速大于

• 0.5cm/s时,H～u曲线是一段斜率不大的直线
• 降低流速，柱效提高不是很大
• 但在实际操作中，流量仍是一个调整分离度和出峰时间的重要可选择参数
• 3.固定相及分离柱气相色谱中的固定液原则上都可以用于液相色谱，其选用原则与气相色谱一样
• 但在高效液相色谱中，分离柱的制备是一项技术要求非常高的工作，一般很少自行制备

第5页：分离类型选择

分离类型选择。

第6页：HPLC的应用

HPLC的应用

• 1.环境中有机氯农药残留量分析固定相：薄壳型硅胶(37～50μm)
• 流动相
• 正己烷流速：1.5mL/min
• 色谱柱：50cm×2.5mm(内径)
• 检测器：差示折光检测器可对水果、蔬菜中的农药残留量进行分析

第7页：稠环芳烃的分析

稠环芳烃的分析

• 稠环芳烃多为致癌物质
• 固定相：十八烷基硅烷化键合相流动相：20%甲醇-水～100%甲醇线性梯度淋洗，2%/min
• 流速：1mL/min
• 柱温：50ºC
• 柱压：70×104Pa
• 检测器：紫外检测器

第8页：制备型液相色谱

制备型液相色谱

• 获得高纯物质（色谱纯）的有效方法
• 半制备柱（内径8mm，长度15～30cm），一次制备量０.1～１mg
• 1.色谱柱的柱容量（柱负荷）
• 对分析柱：不影响柱效时的最大进样量
• 对制备柱：不影响收集物纯度时的最大进样量
• 超载：进样量超过柱容量
• 柱效迅速下降，峰变宽
• 超载可提高制备效率，以柱效下降一半或容量因子k降低10%为宜

第9页：液相制备色谱的方法收集组分时

液相制备色谱的方法收集组分时

• 通常有以下情况
• 可获得良好分离，主峰使用制备柱，超载提高效率
• 两主成分之间的小组分；超载，分离切分使待分离组分成为主成分（富集）后，再次分离制备

第10页：制备型液相色谱（续）

制备型液相色谱（续）

• 制备型液相色谱：结构与分析型一样，但泵流量大、进样量大、采用制备柱
• 柱后馏分收集器
• 制备柱：内径20～50mm，柱长50cm

第11页：液相色谱分析法内容选择

液相色谱分析法内容选择

• 高效液相色谱的特点与仪器
• 基本原理与主要分离类型
• 固定相与流动相
• 影响分离的因素与操作条件选择
• 离子色谱法
• 超临界流体色谱