第1页：高效液相色谱的特点与仪器
第十章 高效液相色谱分析法 第一节 高效液相色谱的特点与仪器
- 高效液相色谱仪HPLC
- 高效液相色谱法的特点
- 流程及主要部件
第2页：液相色谱仪器
液相色谱仪器。
第3页：液相色谱仪（2）
液相色谱仪（2）。
第4页：液相色谱仪（3）
液相色谱仪（3）。
第5页：液相色谱仪（4）
液相色谱仪（4）。
第6页：高效液相色谱法的特点
特点：高压、高效、高速高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。
第7页：流程及主要部件
1.流程。
第8页：主要部件
主要部件
- 高压输液泵
- 主要部件之一，；压力：150～350×105Pa
- 为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（<10μm），液体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高速是高效液相色谱的特点之一
- 应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性（动画）
第9页：梯度淋洗装置外梯度
梯度淋洗装置外梯度
- 利用两台高压输液泵，将两种不同极性的溶剂按一定的比例送入梯度混合室，混合后进入色谱柱
- 内梯度:一台高压泵,通过比例调节阀,将两种或多种不同极性的溶剂按一定的比例抽入高压泵中混合
第10页：进样装置流路中为高压力工作状态
通常使用耐高压的六通阀进样装置，其结构如图所示。
第11页：高效分离柱柱体为直型不锈钢管
高效分离柱柱体为直型不锈钢管
- 内径1～6mm，柱长5～40cm
- 发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效
第12页：液相色谱检测器
液相色谱检测器
- a.紫外检测器应用最广，对大部分有机化合物有响应
- 特点：灵敏度高
- 线形范围高
- 流通池可做的很小（1mm×10mm，容积8μL）
- 对流动相的流速和温度变化不敏感
- 波长可选，易于操作
- 可用于梯度洗脱
第13页：b.光电二极管阵列检测器紫外
b.光电二极管阵列检测器紫外
- 检测器的重要进展
- 光电二极管阵列检测器：1024个二极管阵列，各检测特定波长，计算机快速处理，三维立体谱图，如图所示
第14页：
第15页：光电二极管阵列检测器
光电二极管阵列检测器。
第16页：c.示差折光检测器
c.示差折光检测器
- 除紫外检测器之外应用最多的检测器
- 可连续检测参比池和样品池中流动相之间的折光指数差值
- 差值与浓度呈正比
- 通用型检测器（每种物质具有不同的折光指数）
- 灵敏度低、对温度敏感、不能用于梯度洗脱
- 偏转式、反射式和干涉型三种
第17页：示差折光检测器
示差折光检测器。
第18页：d.荧光检测器
d.荧光检测器
- 高灵敏度、高选择性
- 对多环芳烃，维生素B、黄曲霉素、卟啉类化合物、农药、药物、氨基酸、甾类化合物等有响应
第19页：高效液相色谱分析法内容选择
高效液相色谱分析法内容选择
- 高效液相色谱的特点与仪器
- 基本原理与主要分离类型
- 固定相与流动相
- 影响分离的因素与操作条件选择
- 离子色谱法
- 超临界流体色谱
