33 实验14 高效液相色谱法.ppt

第1页：高效液相色谱法

高效液相色谱法HighPerformanceLiquidChromatographyFor Short：HPLC精品课程

第2页：实验目

• 实验目的
• 了解HPLC仪器基本结构,掌握实验仪器的一般使用方法；
• 加深对色谱分离原理的理解，掌握主要实验条件的选择；
• 掌握液相色谱定性定量分析技术。实验内容反相高效液相色谱法分离测定烷基苯系物

第3页：实验讲解要点一

实验讲解要点一、色谱分离原理二、色谱分析技术三、HPLC仪器和使用方法四、HPLC和GC的比较五、RP-HPLC测定烷基苯化合物原理建议在实验过程中，对比前面的气相色谱实验技术，进一步巩固和提高所学知识和实验技能。

第4页：色谱分离原理

• 一、色谱分离原理色谱法是一类高效分离方法。
• 色谱分离原理是什么？
• HPLC和GC仪器的分离部件是什么？它们有什么不同？
• HPLC和GC的主要差别？

第5页：色谱分析技术色谱分析

• 二、色谱分析技术色谱分析是一类重要的仪器分析方法，其特点是分离能力强、定量准确，适合于复杂样品或多组分样品分析。
• 常见的色谱定性方法？
• 色谱定量分析的依据？
• 气相色谱实验采用那种定量分析方法？有何特点？
• HPLC和GC的应用特点

第6页：仪器和实验技术

• 三、HPLC仪器和实验技术
• HPLC仪器的基本组分？
• 主要部件的工作原理？
• HPLC和GC仪器的比较
• HPLC和GC实验技术的比较
• 有人认为色谱分析实验很简单，就是打一针样品而已，你是怎么认为的？你是否给病人打过针？为什么没有？

第7页：高效液相色谱

四、高效液相色谱仪的基本组成分几个系统？和GC有何不同？高压泵工作原理？GC是如何进样的？记录系统和GC一样吗？

第8页：高压泵工作原理（单向阀）

• 高压液体有危险吗？
• 高压泵如何改变流速？

第9页：高压泵工作原理（单向阀）

• HPLC进样针与GC有何不同？
• 为什么HPLC与GC进样要求不同？六通阀工作原理（流路切换）

第10页：测定烷基苯化合物原理

• 五、RP-HPLC测定烷基苯化合物原理
• 什么是正相色谱？什么是反相色谱？
• 什么是键合固定相？
• 预测一下苯和甲苯在C18反相柱上的保留顺序？
• 什么是反相色谱疏水机理？
• 本实验的主要色谱分析条件有那些？
• 流动相组成对保留时间有何影响？举例说明？
• 改变检测波长对色谱图有何影响？

第11页：溶剂选择

• HPLC的溶剂选择
• 本实验采用什么流动相？
• 什么是HPLC级甲醇、乙腈溶剂？
• 如何获得超纯水？
• 本实验所用的流动相如何配制？
• 流动相为什么要除气？如何除气？

第12页：实验部分一、溶液配制1

六、实验部分一、溶液配制1 配制标准系列溶液三组分混标液：每mL溶液分别含1.00mg苯、甲苯和乙苯。分别准确移取0.40、0.80、1.20、1.60和2.00mL三组分混标液于10mL容量瓶中，用流动相溶剂定容。2 流动相的配制、过滤和除气。五组分混标液：含适量苯、甲苯、乙苯、丙苯和丁苯。标准苯测试液。未知样品1号、2号和3号。

第13页：色谱实验条件

二、色谱实验条件A组

Waters HPLC仪色谱柱：Nova Pak C18 (3.9×150mm, 4μm)流动相：CH3OH-H2O (70/30, v/v)流速：0.8 mL/min检测波长：254nm进样体积：20μLB组：TSP HPLC仪色谱柱：Hypersil BDS C18 (4.0×200mm, 5μm)流动相：CH3OH-H2O (80/20, v/v)流速：0.8 mL/min检测波长：254nm进样体积：20μL

第14页：实验内容与主要步骤1

三、实验内容与主要步骤1 更换流动相。2 开动仪器，让色谱柱平衡。3 设置色谱工作站参数。4 进样、采集色谱图。1）五组分混标液2）标准溶液系列3）未知样品5 色谱数据分析，打印色谱图及分析报告。6 更换甲醇流动相，清洗色谱柱。7 关闭仪器。