22 实验4 分子荧光分析法.ppt

第1页：实验10分子荧光分析法

实验10分子荧光分析法MolecularFluorimetryFor short:M-F精品课程仪器分析(含实验)

第2页：分子荧光

一、分子荧光分析法简介(对光的吸收)

第3页：发生激发态反应分子内

发生激发态反应分子内的激发和衰变过程1.1荧光的产生激发态能量的跃迁与转化的形式和速率：A1,A2吸收: 10-15sVR振动松弛：≤10-12 sic内转化：≤10-11sisc系间窜越：10-6~ 10-2sF荧光：10-9~ 10-6sP磷光：10-6~ 100s

第4页：激发光谱

• 激发光谱发射光谱1.2荧光光谱任何荧光化合物，都具有两种特征的光谱：激发光谱和发射光谱。组成、结构与衍化信息
• 物质的化学结构
• 环境与介质条件
• 与其它溶质的相互作用
• 反应动力学

第5页：激发光谱（续）

第6页：荧光定量

• 1.3荧光定量F = K﹒I0﹒φf﹒C I0：光源强度；φf：荧光量子产率；C：荧光体浓度）1）影响相对荧光强度的因素有哪些？2）试比较荧光法与紫外-可见分光光度法的分析性能。?问题：（
• 注意：在一定浓度范围内适用）

第7页：荧光仪的基本构造

1.4荧光仪的基本构造？问题

荧光光度计与紫外-可见分光光度计在光路设置上有什么不同？为什么？

第8页：分子荧光分析法的应用简介

• 1.5分子荧光分析法的应用简介
• 常规分析应用：
• 定性分析：φf；λex；λem；峰形等
• 定量检测：F = K﹒I0﹒φf﹒C
• 其它（略）
• 高端生化研究：
• 分子相互作用研究；
• 代谢动力学跟踪；
• 显微成像（物理迁移与化学衍化的原位“显迹”）

第9页：分子荧光分析法的应用（接上）

第10页：维生素

• 二、维生素B6注射液中维生素B6含量的荧光法测定2.1 实验原理
• 在近中性的水溶液中有较强的荧光发射:（323nm/392nm 附近）
• 在碱性介质中不稳定
• 易发生光降解VB6的化学结构

第11页：实验流程

2.2实验流程１、试液配制２、VB6的荧光光谱的绘制３、标准工作曲线的制作４、未知液的配制

第12页：注意事项

• 2.3注意事项：
• 注射液的移取与稀释
• 系列标液的测定顺序
• 即放即测，防光降解
• 荧光仪的开关机顺序

第13页：数据处理1.从荧光光谱图

2.4数据处理1.从荧光光谱图上读出最大激发（λex）和发射波长（λem）2.用标准工作曲线法算出所配实测试液的浓度3.计算注射液中维生素B6的含量，病计算测定量占标示量的百分数