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06 蛋白质的生物合成.pptx

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本课件讲述把核酸遗传信息解读为蛋白质氨基酸序列的翻译过程,先介绍三种RNA与氨基酰-tRNA合成酶组成的合成体系,再说明遗传密码与核糖体、tRNA作用,随后分述原核与真核生物的翻译起始、延长与终止,最后介绍翻译后加工。

蛋白质生物合成章起始页,说明翻译是将核酸中4种核苷酸序列编码的遗传信息解读为蛋白质中20种氨基酸序列的过程
蛋白质生物合成原料页,列出mRNA、rRNA、tRNA三种RNA与20种编码氨基酸及起始因子、延长因子等酶类
参与翻译的酶与蛋白因子页,说明氨基酰-tRNA合成酶的绝对特异性、转肽酶催化成肽及转位酶的作用
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第1页:翻译的概念

蛋白质的生物合成(翻译)蛋白质的生物合成,即翻译,就是将核酸中由4种核苷酸序列编码的遗传信息,通过遗传密码破译的方式解读为蛋白质一级结构中20种氨基酸的序列。(Protein Biosynthesis,Translation)

第2页:蛋白质生物合成的原料

第一节蛋白质生物合成体系

  • 20种编码氨基酸作为原料。
  • 酶及众多蛋白因子,如IF、eIF。
  • ATP、GTP、无机离子。
  • 合成原料
  • 三种RNAmRNA(信使RNA)rRNA(核糖体RNA)tRNA(转运RNA)一、蛋白质生物合成的原料和所需酶类(Protein Biosynthesis System)

第3页:参与翻译的酶与蛋白因子

  • 酶及蛋白因子
  • 氨基酰-tRNA合成酶ATP存在下合成氨基酰-tRNA,具有绝对特异性。
  • 转肽酶催化核糖体“P位”上的肽酰基转移至“A位”的氨基酰-tRNA的氨基上,使酰基与氨基缩合形成肽键。
  • 转位酶催化核糖体向mRNA的3′端移动定位于“A位”。
  • 蛋白因子起始因子(initiation factor,IF);延长因子(elongation factor,EF);释放因子(releasing factor,RF)。
  • 能量物质及离子能量物质为ATP和GTP;无机离子有Mg2+和K+等。

第4页:顺反子

二、mRNA与遗传密码

  • 遗传学将编码一个多肽的遗传单位称为顺反子。
  • 原核细胞中数个结构基因常串联为一个转录单位,转录生成的mRNA可编码几种功能相关的蛋白质,为多顺反子(polycistron)。
  • 真核mRNA只编码一种蛋白质,为单顺反子(singlecistron)。
  • 顺反子(cistron)

第5页:多顺反子与单顺反子

原核生物的多顺反子真核生物的单顺反子非编码序列核糖体结合位点起始密码子终止密码子编码序列PPP53蛋白质mG-53蛋白质PPP

第6页:遗传密码及其特点

  • 遗传密码及其特点
  • mRNA分子上从5至3方向,由AUG开始,每3个核苷酸为一组,决定肽链上某一个氨基酸或蛋白质合成的起始、终止信号,称为三联体密码(tripletcoden)。
  • 起始密码(initiation coden): AUG(3)终止密码(termination coden):UAAUAGUGA(4)从mRNA5端起始密码子AUG到3端终止密码子之间的核苷酸序列,各个三联体密码连续排列编码一个蛋白质多肽链,称为开放阅读框架(openreadingframe,ORF)。
  • 连续性(commaless)

第7页:遗传密码表

遗传密码表:下表按三联体密码中第一、第二、第三位核苷酸的顺序列出各密码子所编码的氨基酸。

遗传密码表(三联体密码)
第一碱基(5′端)第二碱基第三碱基 U第三碱基 C第三碱基 A第三碱基 G
UU苯丙氨酸苯丙氨酸亮氨酸亮氨酸
UC丝氨酸丝氨酸丝氨酸丝氨酸
UA酪氨酸酪氨酸终止密码终止密码
UG半胱氨酸半胱氨酸终止密码色氨酸
CU亮氨酸亮氨酸亮氨酸亮氨酸
CC脯氨酸脯氨酸脯氨酸脯氨酸
CA组氨酸组氨酸谷氨酰胺谷氨酰胺
CG精氨酸精氨酸精氨酸精氨酸
AU异亮氨酸异亮氨酸异亮氨酸甲硫氨酸(起始)
AC苏氨酸苏氨酸苏氨酸苏氨酸
AA天冬酰胺天冬酰胺赖氨酸赖氨酸
AG丝氨酸丝氨酸精氨酸精氨酸
GU缬氨酸缬氨酸缬氨酸缬氨酸
GC丙氨酸丙氨酸丙氨酸丙氨酸
GA天冬氨酸天冬氨酸谷氨酸谷氨酸
GG甘氨酸甘氨酸甘氨酸甘氨酸

甲硫氨酸的密码子AUG同时是起始密码;UAA、UAG、UGA为终止密码。原课件以矩阵图示呈现,可对照原图查看。

第8页:遗传密码的简并性

遗传密码的简并性:除色氨酸和蛋氨酸仅有一个密码子外,其余氨基酸均有多个密码子。下表列出各氨基酸的密码子数目。

氨基酸的密码子数目
密码子数目氨基酸密码子数目氨基酸
6Leu 亮氨酸2Asn 天冬酰胺
6Arg 精氨酸2Phe 苯丙氨酸
6Ser 丝氨酸2Asp 天冬氨酸
4Ala 丙氨酸2Cys 半胱氨酸
4Pro 脯氨酸2Gln 谷氨酰胺
4Thr 苏氨酸2Glu 谷氨酸
4Gly 甘氨酸2Tyr 酪氨酸
4Val 缬氨酸2His 组氨酸
3Ile 异亮氨酸2Lys 赖氨酸
1Met 蛋氨酸1Trp 色氨酸

第9页:遗传密码的通用性与摆动性

  • 通用性(universal)
  • 摆动性(wobble)转运氨基酸的tRNA的反密码需要通过碱基互补与mRNA上的遗传密码反向配对结合,但反密码与密码间不严格遵守常见的碱基配对规律,称为摆动配对。
  • 整套密码从原核生物到人类都通用,但动物细胞的线粒体、植物细胞的叶绿体例外。
  • 密码的通用性证明各种生物进化自同一祖先。起始密码子位于mRNA链的5′-端,终止密码子位于3′-端,翻译时沿5′→3′方向进行,直到终止密码子为止,相应多肽链的合成从N端向C端延伸。
  • 方向性(direction)

第10页:密码子与反密码子的摆动配对

密码子、反密码子配对的摆动现象CAGUItRNA反密码子第1位碱基GUU, CA, GU, C, AmRNA密码子第3位碱基A U CU

第11页:核糖体的组成

不同细胞核糖体的组成:下表比较真核生物与原核生物核糖体的沉降系数、rRNA种类与蛋白质种数。

不同细胞核糖体的组成
组成真核生物原核生物
核糖体80S70S
大亚基60S(28S-rRNA、5.8S-rRNA、5S-rRNA)50S(23S-rRNA、5S-rRNA)
小亚基40S(18S-rRNA)30S(16S-rRNA)
蛋白质rpL 49种、rpS 33种rpL 36种、rpS 21种

第12页:核糖体的功能位点

  • 原核生物翻译过程中核糖体结构模式
  • A位:氨基酰位,又称受位。
  • P位:肽酰位,又称给位。
  • E位:排出位。

第13页:氨基酸的活化

四、tRNA与氨基酸的活化

  • 氨基酸的活化
  • 氨基酰-tRNA合成氨基酸+tRNA氨基酰-tRNAATPAMP+PPi氨基酰-tRNA合成酶
  • 氨基酰-tRNA合成酶对氨基酸和tRNA特异性高;具有校正活性。氨基酰-tRNA的表示方法:Ala-tRNAAla、Ser-tRNASer、Met-tRNAMet

第14页:起始肽链合成的氨基酰-tRNA

真核生物:Met-tRNAiMet原核生物:fMet-tRNAifMet(二)起始肽链合成的氨基酰-tRNA1.第一步反应氨基酸+ATP-E氨基酰-AMP-E+PPi

第15页:氨基酰-tRNA合成的第二步

2.第二步反应氨基酰-AMP-E+tRNA氨基酰-tRNA+AMP+E

第16页:翻译过程概览

第二节蛋白质生物合成过程翻译过程从阅读框架的5´-AUG开始,按mRNA模板三联体密码的顺序延长肽链,直至终止密码出现。起始(initiation)延长(elongation)终止(termination )翻译过程(The Process of Protein Biosynthesis )

第17页:原核生物翻译起始

一、原核生物翻译过程

  • 核糖体大小亚基分离;
  • mRNA在小亚基定位结合;
  • 起始氨基酰-tRNA的结合;
  • 核糖体大亚基结合。指mRNA和起始氨基酰-tRNA分别与核糖体结合而形成翻译起始复合物(translational initiationcomplex)。
  • 起始

第18页:核糖体大小亚基分离

核糖体大小亚基分离示意图,展示IF-3与IF-1参与使核糖体解离为大亚基与小亚基的过程

。

第19页:mRNA在小亚基定位结合

AUG5'3'IF-3IF-12. mRNA在小亚基定位结合

第20页:S-D序列

S-D序列在起始密码子的上游约8~13个核苷酸部位有一段富含嘌呤碱基(如-AGGAGG-)的特殊保守序列,称为SD序列,可被核糖体小亚基16S rRNA辨认互补结合。紧接SD序列后的小核苷酸序列,可被核糖体小亚基蛋白rpS-1识别并结合。

第21页:起始氨基酰-tRNA的结合

IF-3IF-1IF-2GTP3.起始氨基酰tRNA( fMet-tRNAimet)结合到小亚基AUG5'3'

第22页:核糖体大亚基结合

IF-3IF-1IF-2GTPGDPPi4.核糖体大亚基结合,起始复合物形成AUG5'3'

第23页:翻译起始阶段总结

IF-3IF-1AUG5'3'IF-2GTPIF-2-GTPGDPPi翻译起始阶段总结

第24页:原核肽链合成的延长因子

原核肽链合成的延长因子:下表列出各延长因子的功能。

原核生物肽链合成的延长因子
延长因子功能
EF-Tu促进氨基酰-tRNA进入A位,结合分解GTP
EF-Ts调节亚基
EFG有转位酶活性,促进mRNA-肽酰-tRNA由A位前移到P位,促进卸载tRNA释放

第25页:进位(注册)

  • 进位(注册,registration)
  • fMet-tRNAfMet占据P位,A位空缺。
  • 第2个密码子相应的氨基酰-tRNA与EF-Tu-GTP结合,其反密码子识别密码子,进入A位。
  • EF-Tu水解GTP,EF-Tu和GDP从核糖体释出,重新形成Tu-Ts二聚体。

第26页:进位过程示意

TuTsGTPGDPAUG5'3'TuTsGTP

第27页:成肽

2.成肽
是由转肽酶(transpeptidase)催化的肽键形成过程。

第28页:转位

3.转位延长因子EF-G有转位酶活性,可结合并水解1分子GTP,促进核蛋白体向mRNA的3'侧移动。

第29页:肽链延长示意

肽链延长示意图,展示fMet起始后核糖体沿mRNA移动并持续接纳新的氨基酰-tRNA

。

第30页:核糖体循环

核糖体循环示意页,展示进位、成肽与转位三步在核糖体上连续性循环进行的延长过程

。

第31页:肽链合成的终止

  • 当mRNA上终止密码出现后,多肽链合成停止,肽链从肽酰-tRNA中释出,mRNA、核糖体等分离的过程。
  • 终止
  • 识别终止密码,RF-1特异识别UAA、UAG;而RF-2可识别UAA、UGA。
  • 诱导改变转肽酶的酯酶活性为水解活性,使肽链从核糖体上释放。

第32页:终止密码的识别

终止密码识别示意图,展示释放因子RF识别终止密码UAG后新生肽链从核糖体上水解释出

。

第33页:真核生物的翻译过程

与原核生物相比,真核生物肽链延长过程有不同的反应体系和延长因子。真核细胞核糖体没有E位,转位时卸载的tRNA直接从P位脱落。

  • 延长
  • 终止与原核生物相比,真核生物翻译终止只有一种释放因子eRF,可识别所有终止密码子。
  • 起始二、真核生物翻译过程
  • 核糖体大小亚基分离;
  • 起始氨基酰-tRNA结合;
  • mRNA在核糖体小亚基就位;
  • 核糖体大亚基结合。原核先就位,后结合;真核先结合,后就位

第34页:真核翻译起始复合物形成

met40S60SMetMet40S60SmRNAeIF-2B、eIF-3、eIF-6①elF-3②GDP+Pi各种elF释放elF-5④ATPADP+PielF4E, elF4G, elF4A,elF4B,PAB③MetMet-tRNAiMet-elF-2-GTP真核生物翻译起始复合物形成过程

第35页:多聚核糖体

  • 使蛋白质合成高速、高效进行。电镜下的多聚核糖体现象三、多聚核糖体(polysome)
  • 指多个核糖体附在同一条mRNA上合成蛋白质而形成的串珠状聚合物。

第36页:多肽链折叠与翻译后加工

四、翻译后加工和输送新生多肽链需要酶和其他蛋白质辅助,经过折叠、修饰等加工才能转变为天然构象的功能蛋白质。

  • 多肽链折叠为天然构象的功能蛋白质
  • 热休克蛋白(HSP): HSP70、HSP40和GreE族
  • 伴侣素(chaperonins): GroEL和GroES家族
  • 蛋白二硫键异构酶(PDI)
  • 肽-脯氨酰顺反异构酶(PPI)
  • 分子伴侣

第37页:一级结构的修饰

鸦片促黑皮质素原(POMC)的水解修饰NC信号肽PMOCKRKR103肽(?)ACTH-LT-MSH-MSHEndophin(二)一级结构的修饰

  • 肽链N端的修饰
  • 个别氨基酸的修饰
  • 多肽链的水解修饰

第38页:高级结构修饰与靶向输送

  • 高级结构的修饰
  • 蛋白质合成后的靶向输送
  • 指蛋白质合成后需定向输送到发挥功能的细胞靶部位的过程。
  • 新生分泌蛋白的N端,可引导其自身转移到细胞靶部位的保守氨基酸序列,称信号序列(signalsequence)或信号肽(signal peptide)。
  • 亚基的聚合如血红蛋白通过非共价键将亚基聚合成寡聚体。
  • 辅基的连接如糖蛋白、脂蛋白、各种酶等,合成后需与辅基连接,才具有活性。
  • 疏水脂链的共价连接如Ras蛋白、G蛋白等需嵌入疏水双层膜脂,才具有活性。

第39页:分子病与抗生素

五、蛋白质生物合成与医学

  • 分子病由于基因突变导致蛋白质一级结构的改变,进而引起生物体某些结构和功能的异常,这种疾病称为分子病。分子病最典型的代表为镰刀型红细胞贫血病。
  • 抗生素对蛋白质合成的影响
  • 抗生素类是微生物产生的能够杀灭或抑制细菌的一类药物。

第40页:抗生素抑制蛋白质合成的原理

抗生素抑制蛋白质生物合成的原理:下表列出各类抗生素的作用原理、作用点与应用。

抗生素抑制蛋白质生物合成的原理
抗生素作用原理作用点应用
四环素族(金霉素、新霉素、土霉素)抑制氨基酰-tRNA与小亚基结合原核核蛋白体小亚基抗菌药
链霉素、卡那霉素、新霉素改变构象引起读码错误、抑制起始原核核蛋白体小亚基抗菌药
氯霉素、林可霉素抑制转肽酶、阻断延长原核核蛋白体大亚基抗菌药
红霉素抑制转肽酶、妨碍转位原核核蛋白体大亚基抗菌药
梭链孢酸与EFG-GTP结合,抑制肽链延长原核核蛋白体大亚基抗菌药
放线菌酮抑制转肽酶、阻断延长真核核蛋白体大亚基医学研究
嘌呤霉素氨基酰-tRNA类似物,进位后引起未成熟肽链脱落真核、原核核蛋白体抗肿瘤药

第41页:白喉毒素与干扰素

  • 白喉毒素(diphtheria toxin)白喉毒素++延长因子-2(有活性)延长因子-2(无活性)
  • 其他干扰蛋白质生物合成的物质
  • 干扰素(interferon,IFN)
  • 干扰素诱导eIF2磷酸化而失活
  • 干扰素诱导病毒RNA降解
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