10 分子生物学名词解释1.docx

第1页：分子生物学题

基因组

基因组：细胞或生物体的一套完整单倍体的遗传物质的总和

端粒

端粒：以线性染色体形式存在的真核基因组DNA末端都有一种特殊的结构叫端粒

该结构

该结构是一段DNA序列和蛋白质形成的一种复合体，仅在真核细胞染色体末端存在

操纵子

操纵子：是指数个功能上相关的结构基因串联在一起，构成信息区，连同其上游的调控区（包括启动子和操纵基因）以及下游的转录终止信号所构成的基因表达单位，所转录的RNA为多顺反子

顺式作用元件

顺式作用元件：是指那些与结构基因表达调控相关、能够被基因调控蛋白特异性识别和结合的特异DNA序列

反式作用因子

反式作用因子：是指真核细胞内含有的大量可以通过直接或间接结合顺式作用元件而调节基因转录活性的蛋白质因子

启动子

启动子：是RNA聚合酶特异性识别和结合的DNA序列

增强子

增强子：位于真核基因中远离转录起始点，能明显增强启动子转录效率的特殊DNA序列

基因表达

基因表达：是指生物基因组中结构基因所携带的遗传信息经过转录、翻译等一系列过程，合成特定的蛋白质，进而发挥其特定的生物学功能和生物学效应的全过程

信息分子

信息分子：调节细胞生命活动的化学物质

第2页：一般是指将限定

基因治疗

基因治疗：一般是指将限定的遗传物质转入患者特定的靶细胞，以最终达到预防或改变特殊疾病状态为目的治疗方法

反义RNA

反义RNA：碱基序列正好与有意义的mRNA互补的RNA称为反义RNA

核酶

核酶：是一种可以催化RNA切割和RNA剪接反应的由RNA组成的酶，可以作为基因表达和病毒复制的抑制剂

细胞癌基因

细胞癌基因：存在于正常的细胞基因组中，与病毒癌基因有同源序列，具有促进正常细胞生长、增殖、分化和发育等生理功能

病毒癌基因

病毒癌基因：存在于病毒（大多是逆转录病毒）基因组中能使靶细胞发生恶性转化的基因

基因诊断

基因诊断：以DNA或RNA为诊断材料，通过检查基因的存在、结构缺陷或表达异常，对人体的状态和疾病作出诊断的方法和过程

RFLP

RFLP：即限制性片段长度多态性，个体之间DNA的核苷酸序列存在差异，称为DNA多态性

基因治疗

基因治疗：一般是指将限定的遗传物质转入患者特定的靶细胞，以最终达到预防或改变特殊疾病状态为目的治疗方法

反义RNA

反义RNA：碱基序列正好与有意义的mRNA互补的RNA称为反义RNA

第3页：真核生物转录水平的调控机制

• 真核生物转录水平的调控机制
• 答：真核生物在转录水平的调控主要是通过反式作用因子、顺式作用元件和RNA聚合酶的相互作用来完成的，主要是反式作用因子结合顺式作用元件后影响转录起始复合物的形成过程
• 转录起始复合物的形成：真核生物RNA聚合酶识别的是由通用转录因子与DNA形成的蛋白质-DNA复合物，只有当一个或多个转录因子结合到DNA上，形成有功能的启动子，才能被RNA聚合酶所识别并结合
• 转录起始复合物的形成过程为：TFⅡD结合TATA盒
• RNA聚合酶识别并结合TFⅡD-DNA复合物形成一个闭合的复合物
• 其他转录因子与RNA聚合酶结合形成一个开放复合物
• 在这个过程中，反式作用因子的作用是：促进或抑制TFⅡD与TATA盒结合
• 促进或抑制RNA聚合酶与TFⅡD-DNA复合物的结合
• 促进或抑制转录起始复合物的形成
• 反式作用因子：一般具有三个功能域（DNA识别结合域、转录活性域和结合其他蛋白结合域）
• 能识别并结合上游调控区中的顺式作用元件
• 对基因的表达有正性或负性调控作用
• 转录起始的调控：⑴反式作用因子的活性调节：①表达式调节——反式作用因子合成出来就具有活性
• ②共价修饰——磷酸化和去磷酸化，糖基化

第4页：末端脱氧核糖核酸转移酶

• 逆转录酶：依赖于RNA的DNA聚合酶，这是一种有效的转录RNA成为DNA的酶，产物DNA又称互补DNA
• 末端脱氧核糖核酸转移酶：将脱氧核糖核酸加到DNA的3末端
• 碱性磷酸酶：催化去除DNA、RNA等的5磷酸基团
• 依赖DNA的RNA聚合酶：识别特异性启动子，RNA转录
• 良好载体的条件1、必须有自身的复制子
• 载体分子上必须有限制性核酸内切酶的酶切位点，即多克隆位点，以供外源DNA插入
• 载体应具有可供选择的遗传标志，以区别阳性重组子和阴性重组子
• 载体分子必须有足够的容量
• 可通过特定的方法导入细胞
• 对于表达载体还应具备与宿主细胞相适应的启动子、前导顺序、增强子、加尾信号等DNA调控元件
• 蓝-白筛选的原理
• 答：某些质粒带有大肠杆菌的半乳糖苷酶基因片段，在半乳糖苷酶基因的基因区外又另外引入了一段含多种单一限制酶位点的DNA序列
• 这些位点上如果没有克隆外源性DN屏蔽字符段，在质粒被导入lac-的大肠杆菌后，质粒携带的半乳糖苷酶基因将正常表达，与大肠杆菌的半乳糖苷酶基因互补，产生有活性的半乳糖苷酶，加入人工底物X-gal和诱导剂IPTG后，出现蓝色的菌落
• 如果在多克隆位点上插入外源DN屏蔽字符段，将使lacZ基因灭活，不能生成半乳糖苷酶，结果菌落出现白色

第5页：端碱基是引发延伸的起点

• 引物3’端碱基是引发延伸的起点，因此一定要与模板DNA配对
• 引物3’端最佳碱基选择是G和C，形成的碱基配对比较稳定
• 引物与模板结合时，引物的5’端最多可以游离十几个碱基而不影响PCR反应的进行
• 引物的5’端可以修饰，如附加限制酶位点，引入突变位点，用生物素、荧光物质、地高辛标记，加入其它短序列包括起始密码子、终止密码子等（十八）、PCR的反应条件
• 答：1、PCR反应的缓冲液：Tris-HCl缓冲液KCl促进引物的退火，浓度太高时会抑制TaqDNA聚合酶活性
• 加入BSA或明胶有利于保护TaqDNA聚合酶活性
• 必要时加入适量二甲基亚砜(DMSO)或甲酰胺利于破坏模板二级结构，提高PCR反应特异性
• 镁离子浓度一般用量1.5-2.0mmol/L，TaqDNA聚合酶活性需要Mg2+
• Mg2+浓度过低，会显著降低酶活性
• Mg2+浓度过高又使酶催化非特异性扩增增强
• Mg2+浓度还会影响引物的退火、模板与PCR产物的解链温度，从而影响扩增片段的产率
• 底物浓度工作浓度20-200umol/L，dNTPs浓度过高可加快反应速度，也增加碱基的错配率和实验成本
• 降低浓度会导致反应速度下降，可提高反应的特异性
• 在PCR反应中，4种dNTP必须以等摩尔浓度配制，以减少PCR反应的错配误差并提高使用效率

第6页：紫外线及其他射线引起

• 紫外线及其他射线引起的DNA分子的变化（二十六）、突变类型及其遗传效应
• 答：1、突变类型：①点突变：DNA大分子上一个碱基的变异
• 分为转换和颠换
• ②缺失：一个碱基或一段核苷酸链从DNA大分子上消失
• ③插入：一个原来没有的碱基或一段原来没有的核苷酸链插入到DNA大分子中间
• ④倒位：DNA链内重组，使其中一段方向倒置
• 突变的遗传效应：①遗传密码的改变：错义突变、无义突变、同义突变、移码突变②对mRNA剪接的影响：一是使原来的剪接位点消失
• 是产生新的剪接位点
• ③蛋白质肽链中的片段缺失：（二十七）、基因治疗的策略
• 答：1、基因置换或称基因矫正：特定的目的基因导入特定的细胞，通过定位重组，让导入的正常基因置换基因组内原有的缺陷基因，不涉及基因组的任何改变
• 表观遗传：是指DNA序列不发生变化但基因表达却发生了可遗传的改变
• 这种改变是细胞内除了遗传信息以外的其它可遗传物质发生的改变，即基因型未发生变化而表型却发生了改变，且这种改变在发育和细胞增殖过程中能稳定传递
• 表观遗传改变从以下3个层面上调控基因的表达，DNA修饰：DNA共价结合一个修饰基团，使具有相同序列的等位基因处于不同的修饰状态
• 蛋白修饰：通过对特殊蛋白修饰或改变蛋白的构象实现对基因表达的调控