12 分子生物学名词解释3.docx

第1页：标准折叠单位

名词解释1.cDNA与cccDNA

名词解释1.cDNA与cccDNA：cDNA是由mRNA通过反转录酶合成的双链DNA

cccDNA

cccDNA是游离于染色体之外的质粒双链闭合环形DNA

标准折叠单位

标准折叠单位：蛋白质二级结构单元α－螺旋与β－折叠通过各种连接多肽可以组成特殊几何排列的结构块，此种确定的折叠类型通常称为超二级结构

CAP

CAP：环腺苷酸（cAMP）受体蛋白CRP（cAMPreceptorprotein），cAMP与CRP结合后所形成的复合物称激活蛋白CAP（cAMPactivatedprotein）4.回文序列：DNA片段上的一段所具有的反向互补序列，常是限制性酶切位点

micRNA

micRNA：互补干扰RNA或称反义RNA，与mRNA序列互补，可抑制mRNA的翻译

核酶

核酶：具有催化活性的RNA，在RNA的剪接加工过程中起到自我催化的作用

模体

模体：蛋白质分子空间结构中存在着某些立体形状和拓扑结构颇为类似的局部区域8.信号肽：在蛋白质合成过程中N端有15~36个氨基酸残基的肽段，引导蛋白质的跨膜

弱化子

弱化子：在操纵区与结构基因之间的一段可以终止转录作用的核苷酸序列

魔斑

魔斑：当细菌生长过程中，遇到氨基酸全面缺乏时，细菌将会产生一个应急反应，停止全部基因的表达

产生这一应急反应的信号

产生这一应急反应的信号是鸟苷四磷酸(ppGpp)和鸟苷五磷酸（pppGpp）

PpGpp与pppGpp的作用不只

PpGpp与pppGpp的作用不只是一个或几个操纵子，而是影响一大批，所以称他们是超级调控子或称为魔斑

上游启动子元件

上游启动子元件：是指对启动子的活性起到一种调节作用的DNA序列，-10区的TATA、-35区的TGACA及增强子，弱化子等

DNA探针

DNA探针：是带有标记的一段已知序列DNA，用以检测未知序列、筛选目的基因等方面广泛应用

第2页：用于扩增已知一端序列的目

• 锚定PCR：用于扩增已知一端序列的目的DNA
• 在未知序列一端加上一段多聚dG的尾巴，然后分别用多聚dC和已知的序列作为引物进行PCR扩增
• 融合蛋白：真核蛋白的基因与外源基因连接，同时表达翻译出的原基因蛋白与外源蛋白结合在一起所组成的蛋白质
• 填空1．2．DNA的物理图谱是DNA分子的（限制性内切酶酶解）片段的排列顺序
• RNA酶的剪切分为（自体催化）、（异体催化）两种类型
• 原核生物中有三种起始因子分别是（IF-1）、（IF-2）和（IF-3）
• 蛋白质的跨膜需要（信号肽）的引导，蛋白伴侣的作用是（辅助肽链折叠成天然构象的蛋白质）
• 启动子中的元件通常可以分为两种：（核心启动子元件）和（上游启动子元件）
• 分子生物学的研究内容主要包含（结构分子生物学）、（基因表达与调控）、（DNA重组技术）三部分
• 证明DNA是遗传物质的两个关键性实验是（肺炎球菌感染小鼠）、（T2噬菌体感染大肠杆菌）这两个实验中主要的论点证据是：（生物体吸收的外源DNA改变了其遗传潜能）
• hnRNA与mRNA之间的差别主要有两点：（hnRNA在转变为mRNA的过程中经过剪接，）、（mRNA的5′末端被加上一个m7pGppp帽子，在mRNA3′末端多了一个多聚腺苷酸(polyA)尾巴）
• 蛋白质多亚基形式的优点是（亚基对DNA的利用来说是一种经济的方法）、（可以减少蛋白质合成过程中随机的错误对蛋白质活性的影响）、（活性能够非常有效和迅速地被打开和被关闭）
• 蛋白质折叠机制首先成核理论的主要内容包括（成核）、（结构充实）、（最后重排）
• 半乳糖对细菌有双重作用

第3页：质粒的复制类型有

• 质粒的复制类型有两种：受到宿主细胞蛋白质合成的严格控制的称为（严紧型质粒），不受宿主细胞蛋白质合成的严格控制称为（松弛型质粒）
• PCR的反应体系要具有以下条件：a、被分离的目的基因两条链各一端序列相互补的DNA引物（约20个碱基左右）
• b、具有热稳定性的酶如：TagDNA聚合酶
• c、dNTPd、作为模板的目的DNA序列15.PCR的基本反应过程包括：（变性）、（退火）、（延伸）三个阶段
• 转基因动物的基本过程通常包括：①将克隆的外源基因导入到一个受精卵或胚胎干细胞的细胞核中
• ②接种后的受精卵或胚胎干细胞移植到雌性的子宫
• ③完成胚胎发育，生长为后代并带有外源基因
• ④利用这些能产生外源蛋白的动物作为种畜，培育新的纯合系
• 杂交瘤细胞系的产生是由（脾B）细胞与（骨髓瘤）细胞杂交产生的，由于（脾细胞）可以利用次黄嘌呤，（骨细胞）提供细胞分裂功能，所以能在HAT培养基中生长
• 随着研究的深入第一代抗体称为（多克隆抗体）、第二代（单克隆抗体）、第三代（基因工程抗体）
• 目前对昆虫病毒的基因工程改造主要集中于杆状病毒，表现在引入（外源毒蛋白基因）
• （扰乱昆虫正常生活周期的基因）
• （对病毒基因进行修饰）
• 哺乳类RNA聚合酶Ⅱ启动子中常见的元件TATA、GC、CAAT所对应的反式作用蛋白因子分别是（TFIID）、（SP-1）和（CTF/NF1）

第4页：转运氨基酸核蛋白体组成成蛋白质合成

• 转运氨基酸核蛋白体组成成蛋白质合成模板成熟mRNA的前体参与hnRNA的剪接三、简答1.分别说出5种以上RNA的功能
• 转运RNAtRNA核蛋白体RNArRNA信使RNAmRNA不均一核RNAhnRNA小核RNAsnRNA小胞浆RNAscRNA/7SL-RNA蛋白质内质网定位合成的信号识别体的组成成分反义RNAanRNA/micRNA对基因的表达起调节作用核酶RibozymeRNA有酶活性的RNA2.原核生物与真核生物启动子的主要差别
• 原核生物TTGACA---TATAAT------起始位点-35-10真核生物增强子---GC---CAAT----TATAA—5mGpp—起始位点-110-70-253.对天然质粒的人工构建主要表现在哪些方面
• 天然质粒往往存在着缺陷，因而不适合用作基因工程的载体，必须对之进行改造构建：a、加入合适的选择标记基因，如两个以上，易于用作选择,通常是抗生素基因
• b、增加或减少合适的酶切位点，便于重组
• c、缩短长度，切去不必要的片段，提高导入效率，增加装载量
• d、改变复制子，变严紧为松弛，变少拷贝为多拷贝
• e、根据基因工程的特殊要求加装特殊的基因元件4．举例说明差示筛选组织特异cDNA的方法
• 制备两种细胞群体，目的基因在其中一种细胞中表达或高表达，在另一种细胞中不表达或低表达，然后通过杂交对比找到目的基因
• 例如：在肿瘤发生和发展过程中，肿瘤细胞会呈现与正常细胞表达水平不同的mRNA，因此，可以通过差示杂交筛选出与肿瘤相关的基因
• 也可利用诱导的方法，筛选出诱导表达的基因

第5页：杂交瘤细胞系的产生与筛选

• ．杂交瘤细胞系的产生与筛选
• 脾B细胞+骨髓瘤细胞，加聚乙二醇（PEG）促进细胞融合，HAT培养基中培养（内含次黄嘌呤、氨基蝶呤、T）生长出来的脾B-骨髓瘤融合细胞继续扩大培养
• 细胞融合物中包含：脾-脾融合细胞：不能生长，脾细胞不能体外培养
• 骨-骨融合细胞：不能利用次黄嘌呤，但可通过第二途径利用叶酸还原酶合成嘌呤
• 氨基蝶呤对叶酸还原酶有抑制作用，因此不能生长
• 骨-脾融合细胞：在HAT中能生长，脾细胞可以利用次黄嘌呤，骨细胞提供细胞分裂功能
• 利用双脱氧末端终止法（Sanger法）测定DNA一级结构的原理与方法
• 原理是采用核苷酸链终止剂—2，，3，-双脱氧核苷酸终止DNA的延长
• 由于它缺少形成3/5/磷酸二脂键所需要的3-OH，一旦参入到DNA链中，此DNA链就不能进一步延长
• 根据碱基配对原则，每当DNA聚合酶需要dNMP参入到正常延长的DNA链中时，就有两种可能性，一是参入ddNTP,结果导致脱氧核苷酸链延长的终止
• 是参入dNTP,使DNA链仍可继续延长，直至参入下一个ddNTP
• 根据这一方法，就可得到一组以ddNTP结尾的长短不一的DNA片段
• 方法是分成四组分别为ddAMP、ddGMP、ddCMP、ddTMP反应后，聚丙烯酰胺凝胶电泳按泳带可读出DNA序列
• 激活蛋白（CAP）对转录的正调控作用

第6页：基因文库的构建对重组子的筛选举出

• 基因文库的构建对重组子的筛选举出3种方法并简述过程
• 抗生素抗性筛选、抗性的插入失活、兰-白斑筛选或PCR筛选、差式筛选、DNA探针多数克隆载体均带有抗生素抗性基因（抗氨苄青霉素、四环素）
• 当质粒转入大肠杆菌中后，该菌便获得抗性，没有转入的不具有抗性
• 但不能区分是否已重组
• 在含有两个抗性基因的载体中，如果外源DNA片段插入其中一个基因并导致该基因失活，就可用两个分别含不同药物的平板对照筛选阳性重组子
• 如pUC质粒含LacZ基因（编码β半乳糖苷酶）该酶能分解生色底物X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)产生蓝色，从而使菌株变蓝
• 当外源DNA插入后，LacZ基因不能表达，菌株呈白色，以此来筛选重组细菌
• 说明通过胚胎干细胞获得转基因动物的基本过程
• 胚胎干细胞（embryonicstemcell,ES）：是胚胎发育期的胚细胞，可以人工培养增殖并具有分化成其它类型细胞的功能
• ES细胞的培养：分离胚泡的内层细胞团进行培养
• ES在无饲养层中培养时会分化为肌细胞、N细胞等多种功能细胞，在含有成纤维细胞中培养时ES将保持分化功能
• 可以对ES进行基因操作，不影响它的分化功能可以定点整合，解决了随机整合的问题
• 向胚胎干细胞导入外源基因，然后植入到待孕雌鼠子宫，发育成幼鼠，杂交获得纯合鼠