07 第八章 染菌的防治.ppt

第1页：第八章 染菌的防治 导言

第八章 染菌的防治。染菌（contamination）的危害：

• 影响产量
• 影响质量
• 使能耗、物耗上升

第2页：杂菌污染的检查：细菌培养基

第一节 染菌的检查与判断

一、杂菌污染的检查——（1）细菌培养基：

• 营养肉汤：glucose 10 g、peptone 5 g、beef extract 5 g、NaCl 5 g、distilled water 1000 ml、pH 7.2~7.4
• 酚红肉汤：营养肉汤 + 1% phenol red 3 ml
• 营养琼脂：glucose 5 g、peptone 10 g、beef extract 3 g、NaCl 5 g、agar 15~20 g、distilled water 1000 ml

第3页：杂菌污染的检查：酵母与霉菌培养基

（2）酵母培养基：萨氏培养基（Sabouraud's agar）：glucose 40 g、peptone 10 g、agar 15~20 g、distilled water 1000 ml、pH 5.6。

（3）霉菌培养基：察氏培养基（Czapek's agar）：sucrose 30 g、NaNO₃ 3 g、K₂HPO₄ 1 g、MgSO₄·7H₂O 0.5 g、KCl 0.5 g、agar 15~20 g、distilled water 1000 ml。

第4页：无菌检查的流程

无菌检查的流程：取样 → 接入试管或斜面培养（细菌32~37℃、1~2天；真菌25~28℃、1~3天）→ 肉眼检查 → 镜检。

第5页：通过溶解氧异常变化判断染菌

二、通过异常现象判断——溶解氧水平异常变化显示染菌：

• 正常发酵与污染噬菌体发酵的溶氧曲线不同
• 正常发酵与污染好气性杂菌、污染非好气性杂菌的溶氧曲线也各不相同

第6页：通过排气中CO2异常变化判断染菌

排气中CO₂异常变化显示染菌：

• 工艺一定，尾气中CO₂量变化有一定规律
• 污染杂菌，糖耗加快，尾气中CO₂量增加
• 污染噬菌体，糖耗减慢，尾气中CO₂量减少

第7页：第二节 染菌原因的分析

染菌原因：

• 种子系统
• 空气带菌
• 设备渗漏
• 培养基灭菌不彻底
• 操作失误

第8页：从染菌规模分析染菌原因

从染菌规模分析：

• 大规模染菌：空气净化系统、种子染菌、接种管道渗漏
• 部分罐批染菌：某一批号种子染菌、某一套连消系统染菌、补料管路渗漏或补料液带菌
• 个别罐批连批染菌：设备问题
• 个别罐不连批染菌：培养基灭菌不彻底或操作失误

第9页：从染菌时间分析染菌原因

从染菌时间分析：

• 早期染菌：培养基灭菌不彻底、种子带菌、接种管道灭菌不彻底或接种操作不当
• 中期染菌：培养基灭菌不彻底，加消沫剂、补料系统灭菌不彻底或渗漏，发酵设备渗漏，泡沫顶罐
• 后期染菌：空气系统有问题

第10页：从染菌的菌型分析染菌原因

从染菌的菌型分析：

• 酵母菌：种子室、摇瓶间、计量罐、进料补料阀门、搅拌轴封、被倒流的空气介质
• 霉菌：种子室、摇瓶间、搅拌轴封、被倒流的空气介质、空气
• 普通杆菌：空气过滤介质、冷水设备渗漏、设备死角渗漏
• 芽孢杆菌：培养基灭菌不彻底、设备有死角
• 球菌：空气系统、无菌间摇瓶间空气中

第11页：一般染菌的防治：预防种子带菌

第三节 染菌的防治措施——一、一般染菌的防治

预防种子带菌：环境清洁，无菌操作；设备完好、可靠，无菌操作用品灭菌彻底，操作熟练，制度严格。

第12页：一般染菌的防治：消灭培养基染菌

消灭培养基染菌：

• 严格物料采购、运输、仓贮
• 配料（防止块状物料、清洗配料罐）
• 灭菌（保证蒸汽的压力、稳定及畅通，按操作规程操作）
• 保压（防止培养基倒流）

第13页：一般染菌的防治：严防空气带菌

严防空气带菌：

• 提高空气进口的洁净度
• 除尽压缩空气中的油和水
• 空气过滤器灭菌时防止被冲翻
• 保证空气过滤器介质的填装质量

第14页：一般染菌的防治：杜绝设备污染

杜绝设备污染：

• 良好的设计（无死角）
• 规范的安装
• 彻底的清洗
• 严密的维修
• 有效的灭菌

第15页：种子罐染菌的处理

种子罐染菌的处理：灭菌后放下水道，并对种子罐、管道进行检查和灭菌；启用备用罐或倒种。

第16页：发酵罐染菌的处理

发酵罐染菌的处理：

• 前期：危害大的灭菌后放下水道；危害不大可重新灭菌、重新接种
• 中后期：降低培养温度，降低通风，提前放罐，控制补料量

第17页：噬菌体污染的鉴别

二、噬菌体污染的防治——噬菌体污染的鉴别：

• 现象鉴别：发酵液变稀、发粘，OUR下降，DO上升，NH₄⁺-N上升，泡沫增多
• 平板鉴别：观察噬菌斑

第18页：噬菌体污染的预防

污染的预防：

• 选育抗噬菌体菌株
• 环境、明沟、下水道定期消毒；排气过滤，菌体排放前灭菌
• 选用孔径为0.01 μm的微滤膜空气过滤器
• 发酵车间远离农田、排污明渠、污水处理处
• 培养基中加入适量化学消毒剂：三聚磷酸钠0.2%~0.3%，植酸0.1%~0.2%，柠檬酸0.2%~0.5%，草酸0.2%~0.5%，新洁而灭0.02%~0.05%

第19页：噬菌体污染后的处理

污染后的处理：停产大消毒（用漂白粉、次氯酸钠、甲醛等对厂房和设备的所有角落进行大消毒）；更换菌种或转产其他产品。