页数：34页文件大小：1.24 MB来源： 发酵工艺原理ppt课件
本课件讲解由保藏菌种逐级扩大至发酵罐种子的完整流程，包括种子罐级数、接种量与种龄等概念，斜面种子、米孢子、摇瓶种子和发酵罐种子的制备注意事项与质量标准；并介绍低营养、干燥、隔氧、低温的保藏原理与九种常用保藏方法。
第四章 种子制备与菌种保藏。第一节 种子制备（Inoculum development）
生产菌种的必备条件：
生产种子制备的一般流程：菌种保藏（斜面、沙土管、冷干管、液氮管）→ 实验室种子制备（一级斜面、二级斜面、米孢子、母瓶、子瓶）→ 生产现场种子制备（一级种子罐、二级种子罐、三级种子罐）→ 发酵罐。
1．斜面种子：在试管或扁瓶内，以琼脂固化的培养基表面上生长的菌种培养物。
3．制备过程注意事项：
图示在无菌间超净工作台进行接种操作的过程，操作要点以原课件图示为准。
3．斜面种子质量检查：
4．影响斜面种子质量的因素：
1．米孢子：将霉菌或放线菌接种到灭菌后的大米或小米颗粒上，恒温培养一段时间后产生的分生孢子。
3．制备过程注意事项：
4．米孢子质量标准：
三、种曲：培养材料用麸皮、米糠等，其余同米粒种子。
1．摇瓶种子：将斜面种子或米孢子接种于锥形摇瓶内的液体培养基中，在摇床上振荡培养得到的液体种子。
3．制备过程注意事项：
图示摇瓶种子制备流程：斜面种子或米孢子接入摇瓶液体培养基，经摇床振荡培养得到液体种子，流程以原课件图示为准。
3．摇瓶种子质量检查：
五、发酵罐种子制备流程：
斜面、摇瓶或米粒种子 → 培养基配制 → 实罐或连续灭菌 → 冷却 → 火圈或压力差接种 → 培养 → 发酵罐种子
2．制备过程注意事项：
图示压差法接种操作：利用种子罐与发酵罐之间的压力差将种子液压入发酵罐，操作步骤以原课件图示为准。
图示四种接种方式：1）单种；2）双种；3）倒种；4）混种。图中给出种子罐1、种子罐2与发酵罐1、发酵罐2之间的连接关系，以原课件图示为准。
3．质量检查及质量标准：
图示种龄对发酵的影响：不同种龄移种会造成发酵水平的差异，曲线与数据以原课件图示为准。
图示种子液pH值随培养时间的变化，用以反映种子的生理状态。原图标注pH 6.7、24等数值，具体曲线以原课件图示为准。
5．种子代谢缓慢原因分析：
第二节 菌种保藏（strain conservation）
一、条件及原理：1．低营养；2．干燥；3．隔氧；4．低温——降低代谢速率或使细胞处于休眠状态；5．密封保持干燥、隔氧、纯粹。
下表列出我国主要微生物菌种保藏中心的名称、缩写、所在地与保藏范围。
| 中心名称 | 缩写 | 所在地 | 保藏范围 |
|---|---|---|---|
| 中国典型培养物保藏中心 | CCTCC | 武汉大学，武汉 | 专利菌种、真菌、细菌 |
| 普通微生物菌种保藏中心 | CCGMC | 中国科学院微生物研究所，北京 | 普通微生物 |
| 农业微生物菌种保藏中心 | ACCC | 中国农业科学院土壤肥料研究所，北京 | 农业微生物 |
| 工业微生物保藏中心 | CICC | 轻工部食品发酵工业研究所，北京 | 工业微生物 |
| 医学微生物菌种保藏管理中心 | CMCC | 中国医学科学院皮肤病研究所，南京 | 真菌、细菌 |
| 抗生素菌种保藏管理中心 | CACC | 中国医学科学院医药生物技术研究所，北京 | 抗生素产生菌、新抗生素产生菌 |
| 兽医微生物菌种保藏中心 | CVCC | 农业部兽医药品监察所，北京 | 兽医微生物 |
| 林业微生物菌种保藏中心 | CFCC | 中国林业科学研究院，北京 | 林业微生物 |
国外著名菌种保藏机构：
二、常用的菌种保藏方法
1．单纯传代保存法（斜面或穿刺）：4℃冰箱或15℃室温，保存期3-6个月，适用于细菌或酵母。
2．结合单孢子分离的传代保存法：斜面→孢子悬浮液→稀释涂布→单细胞分离培养→挑菌→高产菌株的筛选→高产菌株的保藏；4℃冰箱或15℃室温，3-6个月，适用于遗传不稳定的菌种，既保藏了菌种，又保持了生产能力。
3．米孢子保存：密封，4℃冰箱3-6个月；真空抽干后密封，保藏6-12个月，适用于霉菌的保藏。
4．庭院土保藏法：以灭菌庭院土为保藏介质，培养、真空干燥、密封，4℃冰箱，保存期一年以上，适用于霉菌、放线菌和形成芽孢的细菌的保藏。
5．沙土管保存：以过筛、灭菌并干燥的沙土为保藏介质，接种、真空干燥、密封，4℃冰箱保存，1-3年保存期，适用于霉菌、放线菌和形成芽孢的细菌的保藏。
6．孢子或营养细胞悬浮液保存：悬浮于灭菌的10%-20%甘油介质，低温冰箱（-50～-70℃），保存1-2年。
7．冷冻干燥管保存（lyophilization freeze-drying）：收集菌种，以灭菌脱脂牛奶或马血清作为悬浮介质，装入灭菌安瓿管，预冻、真空冻干、密封，4℃冰箱，保存3-5年，适用于一切微生物的保存。
8．液氮管保存（storage in liquid nitrogen）：以10%-20%甘油作为悬浮介质，分装入无菌聚丙烯管，预冻后置液氮内（-196℃），保存5-10年，适用于所有微生物、动物和植物细胞的保存。
9、基因工程菌的保藏：
国内主要菌种保藏管理中心：
国内主要菌种保藏管理中心（续）：
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