52 lab2－3 细菌芽孢悬液的制备和消毒剂杀菌效果的定量测定.ppt

第1页：实验二细菌芽孢悬液的制备和实验三消毒剂杀菌效果

实验二细菌芽孢悬液的制备和实验三消毒剂杀菌效果的定量测定一教学要求了解消毒方法掌握化学消毒剂杀菌效果定量测定技术二实验原理1、消毒方法及消毒剂的研究意义

第2页：Disinfectionisthered

Disinfectionisthereductionoreliminationofpathogenicmicroorganismsinoronmaterialssothattheyarelessofahealthhazard.–By physical or chemical methods.广义：清除或杀灭外环境（无生命的表面和物体、体表皮肤粘膜及表浅体腔）中的病原微生物及其它有害微生物。Disinfectant：disinfectantisgenerallyusedforchemicalagentsemployedtodisinfectinanimateobjects.广义：包括一些用于杀灭皮肤粘膜上微生物的药品。Antiseptics：Chemical agents used on living tissuecalledAntiseptics.

第3页：应用：医疗1847~

应用：医疗1847~1850：Semmelweis1867：Lister工业农业军事

第4页：2、化学消毒剂按其化学结构的不同可分为

• 2、化学消毒剂按其化学结构的不同可分为：醛类、酚类、醇类、过氧化物类、季铵盐类、含氯化合物、含碘化合物及烷基化剂等十几类。3、EVALUATIONOFDISINFECTANTSIt is possible to evaluate disinfectants and antiseptics usingeither in vitro or in vivo tests. An in vitro test is one doneunder artificial, controlled laboratory conditions. An in vivo（practical test and in-use test）test is one done under theactual conditions of normal use.
• in vitro test
• in vivo（practical test and in-use test）

第5页：三材料与器材

• 三材料与器材
• 菌种：大肠杆菌(8099或ATCC 25922),金黄色葡萄球菌(FDA 209或ATCC 65380),枯草杆菌黑色变种(ATCC 9372)芽胞.
• 培养基和试剂：营养琼脂培养基; 0.03 mol/L,pH 7.2磷酸盐缓冲液;中和剂;消毒剂.
• 恒温培养箱，菌落计数器等

第6页：四操作步骤1

四操作步骤1、指示微生物菌悬液的制备细菌繁殖体：金黄色葡萄球菌（ATCC 6538）、大肠杆菌（8099或ATCC 25922）；细菌芽胞：枯草杆菌黑色变种芽胞（ATCC 9732）。2、中和剂选择0.5%硫代硫酸钠，1%吐温803、定量消毒

第7页：实验加样表

消毒、中和A（实验）C（对照）消毒剂样品4.5mlPBS4.5ml芽孢悬液/菌体悬液0.5ml0.5ml混匀（计时），芽孢作用20分钟，菌体作用5分钟取0.5ml移入一含4.5ml中和剂的试管中，混匀（计时），作用10分钟

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第8页：实验加样表

存活菌数的测定A（实验）：直接取中和反应后的溶液0.5ml测定（倾注平板法，2个平板/样品）。C（对照）：取中和液0.5ml，用PBS进行适当稀释（10-3、10-4）后，取稀释液0.5ml测定（倾注平板法，2个平板/稀释度）。平板置37℃培养48 h，计算菌落数。

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第9页：五注意事项

• 五注意事项
• 注意控制好用于测定的菌体（营养体）悬液及芽孢悬液的含菌（芽孢）量。
• 要注意选择合适的中和剂。六思考题
• 如何定量测定某种消毒剂对皮肤的消毒效果？试拟出试验步骤。
• 那些因素会影响消毒剂的杀菌效果？试列举说明。