15 实验技术五 细菌的芽孢染色.ppt

第1页：实验技术五细菌的芽孢染色

• 实验技术五细菌的芽孢染色一、实验目的
• 学习并掌握细菌的芽孢染色方法；
• 初步了解芽孢杆菌的形态特征。

第2页：二、基本原理细菌的芽孢具有厚而致密的壁

二、基本原理细菌的芽孢具有厚而致密的壁，透性低，不易着色，一般染色法只能使菌体着色而芽孢不着色，但是一旦染色后又很难脱色。芽孢染色法是利用细菌的芽孢和菌体对染料的亲和力不同，用不同的染料进行染色使芽孢和菌体呈现不同的颜色而便于区别。

第3页：二、基本原理所有的芽孢染色法都基于同一个原则

• 二、基本原理所有的芽孢染色法都基于同一个原则：除了用着色力强的染料外，还需要加热，促进芽孢着色。
• 染芽孢时，菌体也会着色,然后水洗，芽孢的颜色难以渗出，菌体会脱色。
• 然后用对比度强的染料对菌体复染,菌体和芽孢呈现出不同的颜色，便于观察。

第4页：三、实验器材

• 三、实验器材
• 菌种
• 试剂
• 其他器材35-37℃培养20-24h的枯草芽孢杆菌生理盐水、5%孔雀绿水溶液、蕃红染液或石炭酸复红、沙黄显微镜、酒精灯、载玻片、接种环、木制夹子、双层瓶

第5页：四、操作步骤涂片干燥

• 四、操作步骤涂片干燥与固定染色水洗干燥镜检蕃红复染1-2min水洗所用菌种应掌握菌龄，以大部分细菌已形成芽孢囊为宜，取菌不宜太少加数滴孔雀绿染液于涂片上，用木夹夹住玻片一端，在微火上加热至染料冒蒸气并开始计时，维持5min。
• 注意：加热过程中及时补充染液，切勿干涸待玻片冷却后，用缓流自来水冲洗，直至流出的水无色为止。
• 芽孢呈绿色，营养体为红色。

第6页：思考题与复习题

思考题1. 你认为制备细菌染色标本时，尤其应该注意哪些环节？2. 为什么要求制片完全干燥后才能用油镜观察? 3. 如果你的涂片未经热固定，将会出现什么问题?如果加热温度过高、时间太长，又会怎么样呢？