页数：6页文件大小：112.0 KB来源： 现代生物学实验ppt课件
本课件为《现代生物学实验》的实验十六RNA的定量测定部分，系统梳理本实验的主要内容，并说明目的要求、原理、试剂器材、操作步骤与注意事项，便于课前预习和实验现场对照操作。
实验十六RNA的定量测定
一、实验目的掌握用地衣酚法测定RNA含量的原理和方法。二、原理当RNA与地衣酚试剂在沸水中加热时，RNA被酸降解，所产生的核糖进一步转变为糠醛，它与地衣酚(3，5-二羟基甲苯)在高铁离子的催化下可反应生成绿色物，后者在670nm处有最大吸收峰，在10～100mg/mL范围内其光密度值与RNA浓度有线形关系。
三、试剂和器材1.试剂0.1mg/mL标准RNA溶液、地衣酚试剂、2.器材可见分光光度计、恒温水浴锅
四、操作步骤1.标准曲线的绘制取12只试管分成6组，按下表操作。取2管的平均值，以DNA浓度为横坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线。
543210试管2.01.61.20.80.40标准RNA/mL00.40.81.21.62蒸馏水/mL222222地衣酚试剂/mL混合均匀后，置沸水浴中加热45min，冷却，在670nm波长处比色光密度值
2.样品的测定取待测样品1mL，加蒸馏水1mL及二苯胺溶液2mL，沸水浴保温45min，冷却，然后在670nm波长出测定光密度值。根据测得的光密度值，从标准曲线上查得相应的RNA的mg数，按下式计算待测样品的RNA的含量。RNA%＝待测样品中测得的RNA的mg数待测样品液中样品的mg数X 100
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五、注意事项样品蛋白质含量高时，应先用5％TCA沉淀蛋白质；有较多DNA样品时也会发生干扰，可在试剂中加适量的CuCl2. H2O，可减少DNA的干扰。六、思考题
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