59 lab-2单向琼脂免疫扩散.ppt

第1页：一教学要求

• 一教学要求
• 学习免疫沉淀反应的原理，了解免疫沉淀反应的类型
• 掌握单向琼脂扩散实验的操作方法实验二单向琼脂扩散试验

第2页：二实验原理

• 二实验原理
• 免疫沉淀反应是指可溶性抗原与相应抗体在有电解质存在的情况下，按适当比例所形成的可见沉淀物现象。据此现象设计的沉淀实验主要包括絮状沉淀试验，环状沉淀试验和凝胶内的沉淀试验。凝胶内的沉淀试验依所用的实验方法又可分为免疫扩散实验和免疫电泳技术2类

第3页：单向琼脂扩散扩实验是凝胶内免疫沉淀反应定

• 单向琼脂扩散扩实验是凝胶内免疫沉淀反应定量试验，一般是用已知抗体测定未知量的相应抗原。定量抗体与加热熔化的含缓冲液的琼脂混合后，制板，打孔，加入待检抗原，在合适条件下，形成乳白色的沉淀环。
• 沉淀环大小与抗原（抗体）量成正相关，因而可以根据沉淀环的大小确定相应抗原（抗体）的量。
• 单向免疫扩散试验主要用于血清中IgG、IgM、IgA和补体等蛋白质的定性、定量测定。

第4页：三材料与器材（略)

三材料与器材（略)

第5页：四操作步骤（1）制备抗体琼脂凝胶板

四操作步骤（1）制备抗体琼脂凝胶板：用生理盐水配制1.5%琼脂凝胶，置水浴中煮沸熔化后，移置56℃水浴箱中保温。吸取56℃的熔化琼脂置小烧杯内，加入羊抗人IgG抗体（1：60，v/v）。（2）铺胶：取溶化的琼脂4ml趁热均匀浇注于载玻片上，厚度约为1.5mm。（3）打孔：待琼脂凝固后，用打孔器在琼脂板上打孔，孔径3～4mm，孔距10mm。（4）加样：将待检血清用生理盐水稀释成1：2、1：6、1：10以及空白（生理盐水）加入各孔中，每孔10ul。（5）扩散：加样完毕，将琼脂板平放于湿盒内，置37℃24～28小时后观察结果。

第6页：打孔方案

打孔方案

第7页：五注意事项

• 五注意事项
• 制备抗体琼脂板时，琼脂温度必须严格控制。温度太低会导致琼脂凝固，太高将影响所加抗体的活性。
• 加样孔中的琼脂应挑干净，且不可损坏孔的边缘，确保每孔的液面基本一致。

第8页：六思考题

• 六思考题
• 分析试验结果并探讨试验要点