80 实验二 组织原代培养.ppt

第1页：实验二组织原代培养

实验二组织原代培养

第2页：培养瓶小烧杯培养皿直头吸管弯头吸管大直头

培养瓶小烧杯培养皿直头吸管弯头吸管大直头镊子小弯头镊子眼科剪试剂与器材一、器材：超净工作台培养箱

第3页：二、试剂

二、试剂：Hank’s液原代培养液消毒液（酒精75％）杂用品：一次性注射针筒、棉花、牛皮纸等

三、实验材料：鸭胚

第4页：取出活胚胎，置于培养器中

1、取出活胚胎，置于培养器中；2、选好鸭卵，将鸭胚移入培养皿中。3、Hank’s溶液洗涤胚胎；4、剖开胚体，分离若干器官；5、选择器官组织，切成大小约0.5mm3；6、贴瓶；7、加液；8、翻瓶；9、培养。培养步骤：

第5页：无菌室和操作台消毒

1.无菌室和操作台消毒：无菌室每周用紫外线消毒1-2次。实验前，将实验器材放入超净台内，打开超净台紫外线灭菌灯，同时起动超净台风机，40min后消毒完毕，关闭紫外线灯。2.无菌操作要求：一切操作都要在火焰周围进行，瓶口、吸管、注射器等要经过火焰消毒。瓶口要顺风斜放在支架上。试剂使用后应立即封闭瓶口。3.组织培养过程中要注意组织接种量要适宜，适宜的接种量可造就一个有利于细胞生长的微环境以促进细胞的增值。注意事项

第6页：4.组织培养的条件控制

• 4.组织培养的条件控制：
• 温度
• PH值：选择近中性范围的PH（7.2-7.4）是可取的；适宜的PH主要是靠恒定的二氧化碳和培养液中的缓冲体系来维持的。
• 气体环境：在培养环境中充5%浓度的的二氧化碳气体，有利于维持培养瓶的PH恒定。
• 渗透压
• 促生长因子
• 抑制细胞生长因素注意事项

第7页：将鸭胚或鸡胚的心

将鸭胚或鸡胚的心、肾、肝、肺或其它器官的组织块均匀地接种在培养瓶的底端，并浸没于培养液中，让组织块在模拟体内生理环境下继续生长。实验结果

第8页：总结培养过程中组织块贴壁能否成功的经验

1.总结培养过程中组织块贴壁能否成功的经验，写出影响组织正常贴壁的因素。2.不同的实验材料（如两栖类、鱼类）和相同实验材料不同组织的培养所需的培养条件和培养方法是否相同，请说出原因。思考题：