第1页：实验五 培养基的制备、器具包扎和灭菌封面
实验六实验五培养基的制备、器具包扎和灭菌
第2页：目的要求了解培养基的配制原理和方法
目的要求
- 了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程。
- 了解几种灭菌方法，掌握干热灭菌法和加压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。
- 熟悉分离、培养微生物前的有关准备工作及操作方法。
第3页：实验原理培养基据组成成分可分为的概念
- 实验原理培养基据组成成分可分为:1.合成培养基：由各种纯化学物质按一定比例配制而成。
- 2.半合成培养基：有一部分纯化学物质和另一部分天然物质配制而成。
- 3.天然培养基：利用天然来源的有机物配制而成。剧用途可分为
- 1.基础培养基：能满足各种微生物的营养需求加富培养基：加入某种微生物生长繁殖所需的营养物质，使其快速生长，便于分离
- 3.选择培养基：加入某种物质抑制其他微生物生长，使目标微生物得到富集，便于分离
- 4.鉴别培养基：用来检测微生物的某些代谢特性。
第4页：从培养基的物理状态可分为1.液体培养基
从培养基的物理状态可分为
- 1.液体培养基：不加凝固剂的液体状态培养基。
- 2.固体培养基：在液体培养基中加入2%左右的凝固剂的固体状态的培养基或农副产品培养基。
- 3.半固体培养基：在液体培养基中加入0.2—0.5%凝固剂而成的半固体状培养基。
第5页：常用凝固剂为琼脂
常用凝固剂为琼脂（其次为明胶），又叫洋菜、冻粉。
第6页：消毒、使用理化因素方法
- 消毒：使用理化因素方法杀死物体表面绝大多数微生物的方法。
- 灭菌：采用强烈的理化方法杀死物体内外所有微生物的方法。
- 干热灭菌法：电热烘箱作为干热灭菌器
- 加压蒸汽灭菌法其步骤如下：
- 1.灭菌器内加入一定量的水，将包扎好的物品放入其中。
- 2.接通电源，进行加热
- 3. 排除高压锅内的冷空气，可将排气阀打开，待排出大气后关闭排气阀；或关闭排气阀，待压力上升到0.5kg/cm2时再打开排气阀，待压力回复到0时再关闭排气阀。
- 4.当压力达1.05kg/cm2时，此时灭菌器内的温度为1210C，维持30min。对热不稳定的培养基如含有葡萄糖、氨基酸等物时，应适当降低压力，延长时间。
- 5.灭菌时间一到，切断电源，待压力降至零时，才能打开排气阀，然后打开灭菌器盖，取出物品。
第7页：
第8页：间歇灭菌法的概念
- 间歇灭菌法：待灭菌的物品放在灭菌器或蒸笼里，每天蒸煮1次，每次煮沸1h，连续3d重复进行。在每两次蒸煮之间，将物品（指培养基）放在370C恒温条件下培养过夜，这样可以使每次蒸煮后未杀死残留的芽孢萌发成营养体，以便下次蒸煮时杀灭。
- 过滤除菌法：不能用加热灭菌的液体物质（如维生素、血清），一般可用细菌过滤器进行除菌。
第9页：紫外线灭菌法的概念
- 紫外线灭菌法：一般30W灯管，9m3空间，距地面2m每次打开紫外线照射0.5h，就使室内空气灭菌。若照射紫外线时先喷洒石炭酸等化学消毒剂，可增强灭菌效果。紫外线虽有较强的杀菌力，但穿透力弱，即使一薄层玻璃或水层就能将大部分紫外线滤除，因此只适用于空气及表面杀菌。
- 化学药剂消毒灭菌：微生物实验室中常用的化学杀菌剂有升汞、甲醛、高锰酸钾、酒精、碘酒、龙胆紫、石炭酸、漂白粉、新洁尔灭、煤酚皂溶液，它们有的是杀菌剂，有的是抑菌剂。
第10页：
第11页：实验材料药品的概念
实验材料
- 药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、马铃薯、蔗糖；可溶性淀粉、K2HPO4、KNO3、MgSO4
- 7H2O、FeSO4
- 7H2O等。
- 高压蒸汽灭菌器、恒温干热灭菌箱、细菌过滤器、紫外线杀菌灯。
- 其它：天平、牛角匙、电炉、1N HCl、1N NaOH、pH试纸、刻度搪瓷杯、量筒、漏斗、漏斗架、玻棒、带玻璃珠的三角瓶、带棉塞的无菌试管、无棉塞的空试管、培养皿、吸管、各种包装纸、防水纸、绳索、棉花、标签等。
第12页：实验步骤培养基的配制分离培养
实验步骤
- 培养基的配制
- 分离培养微生物常用器皿的准备
- 培养基和玻璃器材的灭菌
第13页：培养基的配制方法和步骤称量的概念
培养基的配制方法和步骤
- 称量：按照配方正确称取各种原料放于搪瓷杯中。
- 溶化：在搪瓷杯中加入所需水量，玻棒搅匀，加热溶解。
- 调pH值：用NaOH或HCl调pH，用pH试纸对照。
- 加琼脂溶化：加热过程中要不断搅拌，可适当补水。
- 分装：注意不要污染棉塞。
- 包扎成捆，挂上标签（必须用铅笔写），注明何种培养基。
- 灭菌备用：培养基灭菌后必须在370C下恒温培养24h，确定无菌生长，方可使用。
第14页：培养基的配制方法和步骤
培养基的配制方法和步骤
第15页：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基配方如下的概念
牛肉膏蛋白胨琼脂培养基（用于分离和培养细菌，是一种天然培养基）配方如下：牛肉膏3g 蛋白胨5g 氯化钠3g 琼脂20g 自来水1000mL pH 7.0~7.2灭菌1.05kg/cm2，25~30min
第16页：马铃薯蔗糖琼脂培养基用于分离和培养真菌
马铃薯蔗糖琼脂培养基用于分离和培养真菌之用，是一种半合成培养基，其配方如下：去皮马铃薯（或鲜豆芽）200g 蔗糖20g 自来水1000mL 琼脂20gpH 自然灭菌：（含蔗糖）1.05kg/cm2 20min
第17页：高氏一号培养基用于分离和培养放线菌
高氏一号培养基
- 用于分离和培养放线菌，是一种合成培养基。配方如下：可溶性淀粉20.0g KNO31.0g K2HPO40.5g MgSO4
- 7H2O 0.5g NaCl 0.5g FeSO4
- 7H2O 0.01gpH 7.4~7.6琼脂20g 自来水1000mL 灭菌：1.05kg/cm230min
第18页：制备无菌水无菌水为下一次微生物分离实验中
制备无菌水无菌水为下一次微生物分离实验中所需要的材料。250mL三角烧瓶（装有玻璃珠），装自来水45mL，试管中装9.0mL自来水，塞上棉塞，包扎、灭菌备用。
第19页：三角烧瓶、试管
三角烧瓶、试管、培养皿、吸管等的包扎准备。现场演示物品的准备
第20页：第1组1号200ml第2组4号200ml
第1组1号200ml
- 第2组4号200ml
- 第3组8号200ml
- 第4组11号200ml分装30支试管
- 第5组9号200ml
- 第6组10号200ml分装30支试管
- 第7组13号200ml分装30支试管
- 第8组12号200ml分装30支试管
- 第9组2号200ml
- 每组包扎平板1包，6个/包；包扎1ml吸管5根；1瓶加玻珠无菌水45ml；9ml无菌水试管5根
第21页：思考题固体培养基加琼脂后加热溶化时要注意
思考题
- 固体培养基加琼脂后加热溶化时要注意哪些问题？
- 培养基中加琼脂的作用是什么？
- 干热灭菌、高压蒸汽灭菌和间歇灭菌的场合有何不同？
- 如何检查培养基灭菌是否彻底？
第22页：实验六结束
实验六结束
