23 实验四　微生物的显微镜直接计数法和大小的测定.ppt

第1页：实验四 微生物的显微镜直接计数法封面

实验五实验四微生物的显微镜直接计数法和大小的测定

第2页：实验目的学习使用目镜测微尺和镜台测微尺在

实验目的

• 学习使用目镜测微尺和镜台测微尺在显微镜下测定微生物大小的方法。
• 学习使用血球记数板测定微生物数量的方法。

第3页：实验材料显微镜

实验材料显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、血球记数板、酵母菌悬液、盖玻片、无菌滴管、吸水纸、擦镜纸。

第4页：实验步骤测定酵母菌细胞的大小测定的工具

实验步骤测定酵母菌细胞的大小测定的工具：目镜测微尺镜台测微尺目镜测微尺每格实际代表的长度随物镜的放大倍数而改变，也会因使用不同的显微镜而产生误差，因此在使用前必须用镜台测微尺进行校正。

第5页：目镜测微尺的校正的概念

• 目镜测微尺的校正：在40×镜下，看清镜台测微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺与镜台测微尺的刻度平行，移动载物台，使目镜测微尺的0点与镜台测微尺的某一刻度重合，然后，仔细寻找两尺第二个完全重合的刻度。计算两刻度间目镜测微尺的格数和镜台测微尺的格数。由于镜台测微尺的刻度每格长10µm，所以可得目尺每格长度(µm)=（台尺格数×10）/目尺格数
• 菌体大小的测定：制作一片酵母菌的盖片，取下镜台测微尺，将盖片置于载物台上，然后在40×镜下用目镜测微尺测量菌体的长和宽。

第6页：酵母菌显微直接计数方法的概念

酵母菌显微直接计数方法：活菌计数法——平板菌落计数法；总菌计数法——血球计数板或霍瑟（Peroff Hausser）细菌计数板（二者原理和部件相同，只是厚薄不同而已）。

第7页：取清洁无油的血球计数板

• 1.取清洁无油的血球计数板，在计数室上面加盖血盖片。
• 2.取酵母菌液，摇匀，用滴管由盖玻片边缘滴一小滴，使菌液自行渗入，计数室内不得有气泡。
• 3.用10×镜观察并将计数室移至视野中央。
• 4.在10×镜下计数：计数4个（或5个）中格的平均值，然后求得每个中格的平均值。乘上16（或25）就得出计数区总菌数，最后再换算到每mL菌液中的含菌数。
• 5.注意事项：计上不计下，计左不计右。出芽计一半

第8页：实验结果目镜测微尺标定结果的概念

实验结果目镜测微尺标定结果：40×镜下倍目镜测微尺每格长度是μm。菌号酵母的直径大小测定结果目镜测微尺格数实际直径/µm12345均值

第9页：将显微计数结果记录于下表中

将显微计数结果记录于下表中。T表示五个中方格中的总菌数；D表示菌液稀释倍数。各中格中菌数TD二室平均值个/ml12345第一室第二室

第10页：问题与讨论为什么目镜测微尺必须用镜台测微

问题与讨论

• 为什么目镜测微尺必须用镜台测微尺来校正？
• 在显微镜下直接测定微生物数量有什么优缺点？

第11页：本次实验课结束请确保血球计数板清洗干净！

本次实验课结束请确保血球计数板清洗干净！请值日生同学留下值日下周再见！