01 实验一 显微镜的构造、性能和使用方法.pptx

第1页：微生物学实验课程封面

本课件为《微生物学实验》课程实验指导，涵盖实验基本要求、报告规范、成绩评定与各项实验内容。

• 课程名称：微生物学实验
• 主要内容：实验要求与报告规范、各项实验的原理与操作

第2页：实验要求

• 课前充分预习，上课不无故缺席，及时上交实验报告。
• 实验期间不得大声喧哗，服从老师的安排，注意安全。
• 实验器材专人专用，对仪器要爱护，损坏实行赔偿制度。
• 实验菌种和物品未经许可，不得携出室外，用后的菌种按老师要求妥善处理。
• 维护好实验室的环境卫生，实行值日生制度。

第3页：实验报告要求

实验报告统一用 A4 纸手写，封面格式包括：

1. 实验课程名称
2. 实验项目名称
3. 学生所在的专业、班级、姓名、学号
4. 实验日期
5. 同组者姓名

第4页：实验报告格式

实验报告正文按以下六部分撰写：

1. 实验目的
2. 实验原理
3. 实验仪器、溶液试剂
4. 实验步骤
5. 实验结果（如绘图、列表等）
6. 思考题

第5页：实验成绩的组成

平常成绩 40%

实验操作表现、实验报告

操作考试 30%

实验操作技能考核

笔试成绩 30%

实验理论与原理考核

第6页：实验内容

• 显微镜的使用及酵母菌、放线菌的形态观察
• 细菌的单染色和革兰氏染色
• 霉菌的形态观察
• 微生物大小测定、显微镜直接计数法
• 土壤中微生物的分离纯化与活菌计数
• 微生物生理生化反应
• 微生物的紫外诱变

第7页：实验一 显微镜的构造与使用方法

实验一

（一）显微镜的构造、性能和使用方法

第8页：实验一的目的要求

• 了解普通光学显微镜（复式显微镜）的构造、基本原理、维护和保养的方法
• 学习并掌握普通光学显微镜的正确使用方法

第9页：光学显微镜的基本结构

• 机械和支架系统
• 照明系统
• 光学放大系统

第10页：

第11页：油镜的工作原理

油镜的工作原理主要有两方面：

• 增加照明亮度
• 增加显微镜的分辨率

原文此处有孤立的数字「1.55」，未见单位与说明，未能确定其含义，正文按原理表述，未擅自改写数值，建议对照原图核对。

第12页：显微镜的分辨率

显微镜的分辨率：显微镜能辨别两点之间的最小距离的能力。

D = λ / 2NA = λ / 2n·sin(α/2)

D

分辨率

NA

物镜的数值孔径值

λ

可见光的波长（平均 0.55 μm）

n

物镜和被检标本间介质的折射率

α

镜口角（即入射角）

第13页：显微镜使用前的准备

观察前的准备

• 显微镜的安置
• 光源调节
• 根据个人情况调节双筒显微镜的目镜：右眼看清后调节左目镜的视度调节圈；扳动镜管，调节至瞳孔间距

第14页：显微观察

• 低倍镜观察
• 高倍镜观察（同焦现象）
• 油镜观察：在待观察的样品区域滴加香柏油，从侧面注视，用粗调节器将载物台缓慢上升，使油镜浸在镜油中。

第15页：显微镜用毕后的处理

• 下降载物台，取下载玻片；
• 用擦镜纸拭去镜头上的镜油，然后用擦镜纸沾取少量酒精乙醚洗液擦去镜头上残留的油迹，最后用干净的擦镜纸擦去残留的洗液（三遍擦拭法）；
• 用擦镜纸清洁物镜及目镜，用绸布清洁显微镜的金属部件；
• 将镜体各部分复原。

第16页：实验一思考题

1. 用油镜观察时应注意哪些问题？
2. 在载玻片和镜头之间滴加香柏油有何作用？
3. 什么是物镜的同焦现象？它在显微镜观察中有什么意义？
4. 影响显微镜分辨率的因素有哪些？

第17页：酵母菌形态观察与死活细胞鉴别

（二）酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别

目的要求：

• 观察酵母菌的形态及出芽生殖方式。
• 学习区分酵母菌死活细胞的实验方法。

第18页：美蓝染色鉴别原理

美蓝是一种无毒性染料，氧化型呈现蓝色，还原型呈现无色。用美蓝对酵母的活细胞进行染色，代谢活力强的细胞具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型。因此，具有还原能力的酵母活细胞为无色，死细胞或代谢能力弱的衰老细胞为蓝色。

第19页：酵母菌实验器材

菌种

啤酒酵母

溶液或试剂

0.1% 吕氏碱性美蓝染色液

仪器或其他用具

显微镜，盖玻片，载玻片，滤纸，擦镜纸

第20页：酵母菌制片与观察步骤

制片

• 在载玻片中央加一滴 0.1% 美蓝 → 取菌少许 → 混匀 → 盖上盖玻片 → 静置 3 min、0.5 h 观察
• 用高倍镜观察酵母的形态和出芽生殖
• 根据颜色鉴别死活细胞：活细胞无色；死细胞蓝色

第21页：酵母菌实验结果

• 绘图说明你所观察到的酵母菌的形态特征及出芽生殖方式。
• 记录染色时间对酵母菌死活细胞数量的影响。

第22页：酵母菌实验思考题

吕氏碱性美蓝染色液作用时间的不同，对酵母菌死细胞数量有何影响？试分析其原因。

第23页：放线菌的形态观察

（三）放线菌的形态观察

目的要求：学习并掌握观察放线菌的基本方法；初步了解放线菌的形态特征。

基本原理：利用扦片法观察自然生长状态下放线菌的基内菌丝、气生菌丝和孢子丝。

第24页：放线菌实验器材

菌种

细黄链霉菌

培养基

高氏Ⅰ号琼脂培养基

溶液或试剂

0.1% 美蓝染色液

仪器或其他用具

显微镜，镊子，载玻片，接种环等

第25页：扦片法操作

扦片法

• 倒平板 → 取孢子划线接种 → 无菌操作将灭菌的盖玻片以大约 45° 扦在接种线上 → 28 ℃ 倒置培养 3–5 d
• 取培养后的盖玻片用 0.1% 美蓝对盖玻片染色后观察
• 油镜下观察基内菌丝、气生菌丝、孢子丝的卷曲状况，以及分生孢子的形状，并绘图说明

第26页：

第27页：油镜下观察的放线菌

油镜下观察的放线菌形态（图示）：可见基内菌丝、气生菌丝及孢子丝的卷曲状况与分生孢子形状。

第28页：放线菌实验结果与思考题

实验结果：绘图说明你所观察到的放线菌的形态特征。

思考题：镜检时，你如何区分放线菌的基内菌丝、气生菌丝及孢子丝？

第29页：显微镜聚光器调节部件

显微镜照明系统的调节部件：调节手动光轮、调节孔径光阑手柄、聚光器的升降。

第30页：聚光器升降与光阑调节

聚光器的升降调节：光轮调节、孔径光阑手柄。

第31页：镜头复原与光轮归位

• 镜头复原
• 手动光轮调到最低档

第32页：