页数：28页文件大小：192.0 KB来源： 微生物学实验ppt课件
本课件为实验六内容，先通过淀粉水解试验说明不同微生物胞外酶系统的差异，再以葡萄糖与乳糖发酵试验比较产酸产气能力，最后依次讲解吲哚试验、甲基红试验、伏-普试验与柠檬酸盐试验的原理、试剂和操作判读方法。
实验六 微生物的生理生化反应
一、大分子物质的水解试验
目的要求：
基本原理：大分子物质淀粉、蛋白质和脂肪必须通过胞外酶水解成较小的化合物后，才能被微生物吸收利用。
淀粉水解试验：将大肠杆菌、变形杆菌、枯草芽孢杆菌在固体淀粉平板上划线接种，37 ℃ 倒置培养 24 h；向平板内滴入少量碘液，菌苔周围出现无色透明圈，说明淀粉已被水解，为阳性；透明圈大小表明胞外淀粉酶活力的高低。
实验结果记录：“+”表示阳性；“-”表示阴性。
| 菌名 | 淀粉水解 |
|---|---|
| 枯草芽孢杆菌 | — |
| 大肠杆菌 | — |
| 普通变形杆菌 | — |
本页为实验记录表，原课件为空白待填表格，需按实际观察结果填写。
二、糖发酵试验
目的要求：
基本原理：糖类是绝大多数细菌的碳源和能源，但不同种细菌对不同糖的分解性能和产物并不一致。有些细菌能分解某种糖产酸和产气，有些细菌只产酸不产气，有些细菌则不能分解。
操作步骤：取葡萄糖发酵培养基试管和乳糖发酵培养基试管各 3 支，分别接种普通变形杆菌、大肠杆菌，第 3 支不接种（对照，老师提供）；6 支试管 37 ℃ 培养 24–48 h，观察各试管颜色变化及德汉氏小管中有无气泡。
产酸：溴甲酚紫指示剂由紫色（pH 6.8）变为黄色（pH 5.2）。
糖发酵试验结果判读：左侧为阳性结果，右侧为阴性结果。
实验结果记录：“+”表示产酸或产气；“-”表示不产酸或不产气。
| 糖类发酵 | 大肠杆菌 | 普通变形杆菌 | 对照 |
|---|---|---|---|
| 葡萄糖发酵 | — | — | — |
| 乳糖发酵 | — | — | — |
本页为实验记录表，原课件为空白待填表格，需按实际观察结果填写。
假如某种微生物可以有氧代谢葡萄糖，发酵试验应该出现什么结果？
三、IMViC 试验
目的要求：了解 IMViC 反应的原理及其在肠道菌鉴定中的意义和方法。
1、吲哚试验
基本原理：
操作步骤：分别接种大肠杆菌、产气肠杆菌于蛋白胨水培养基，37 ℃ 培养 2 d；加 6–7 滴乙醚，充分摇动，静置 1–3 min；乙醚上升后，沿管壁徐徐加入 2 滴吲哚试剂；若在乙醚和培养物之间产生红色环状物，即为阳性反应。
2、甲基红（M.R）试验
基本原理：
操作步骤：分别接种大肠杆菌、产气肠杆菌于葡萄糖蛋白胨水培养基，37 ℃ 培养 2 d；加入甲基红指示剂 2 滴；培养基变为红色为阳性，培养基变为黄色为阴性。
3、伏-普（V.P）试验
基本原理：
操作步骤：分别接种大肠杆菌、产气肠杆菌于葡萄糖蛋白胨水培养基，37 ℃ 培养 2 d；加入 5–10 滴 40% KOH，再加入等量的 5% α-萘酚，用力振荡，置于 37 ℃ 温箱中保温 15–30 min；若培养物呈红色，即为伏-普反应阳性。
4、柠檬酸盐试验
基本原理：
操作步骤：分别接种大肠杆菌、产气肠杆菌于柠檬酸盐斜面培养基，37 ℃ 培养 2 d；观察斜面培养基上有无细菌生长和变色；培养基变为蓝色为阳性，培养基变为绿色为阴性。
实验结果记录：“+”表示阳性反应；“-”表示阴性反应。
| 菌名 | 吲哚试验 | 甲基红试验 | 伏-普试验 | 柠檬酸盐试验 |
|---|---|---|---|---|
| 大肠杆菌 | — | — | — | — |
| 产气杆菌 | — | — | — | — |
| 对照 | — | — | — | — |
本页为实验记录表，原课件为空白待填表格，需按实际观察结果填写。
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