04 实验四 微生物大小的测定、显微镜直接计数法.pptx

第1页：实验四 微生物大小测定与直接计数

实验四 微生物大小的测定与显微镜直接计数法

第2页：大小测定的目的要求

（一）微生物大小的测定

目的要求：

1. 学习并掌握用测微尺测定微生物大小的方法。
2. 增强微生物细胞大小的感性认识。

第3页：测微尺测定原理

镜台测微尺为中央部分刻有精确等分线的载玻片，将 1 mm 等分 100 格，每格长 0.01 mm，只用于校正目镜测微尺。目镜测微尺是可放入目镜内的圆形小玻片，精确等分 50 小格或 100 小格。由于不同显微镜或不同目镜和物镜组合放大倍数不同，目镜测微尺每小格所代表的实际长度也不一样，因此，测量前需先用镜台测微尺进行校正。球菌以直径表示大小；杆菌用宽×长表示。

第4页：大小测定实验器材

菌种

啤酒酵母

仪器

显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺

第5页：测微尺校正步骤

实验步骤

1. 安装目镜测微尺
2. 校正目镜测微尺：将镜台测微尺刻度面朝上放在显微镜载物台上；分别在低倍镜、高倍镜、油镜下用镜台测微尺校正目镜测微尺

计算：

• 镜台测微尺：将 1 mm 等分为 100 小格，每小格长 0.01 mm（即 10 μm）。
• 目镜测微尺每格长度（μm）=（两重合线间镜台测微尺格数 × 10）/ 两重合线间目镜测微尺格数

第6页：目镜测微尺校正结果表

菌体大小测定：取下镜台测微尺，换上酵母菌水浸片，在高倍镜下测定酵母菌的长和宽；选择有代表性的 10 个细胞进行测定，取平均值。

本页为实验记录表，原课件为空白待填表格，需按实际观察结果填写。

第7页：啤酒酵母大小测定记录表

将啤酒酵母测定结果填入下表（菌体大小以 μm 计）。

本页为实验记录表，原课件为空白待填表格，需按实际观察结果填写。

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第10页：直接计数的目的要求

（二）酵母菌的显微镜直接计数

目的要求：

1. 明确血细胞计数板计数的原理。
2. 掌握使用血细胞计数板进行微生物计数的方法。

第11页：血球计数板的构造

• 血球计数板是一块特制的载玻片，其上由 4 条槽构成 3 个平台；中间较宽的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各有一个方格网。每个方格网共分 9 个大方格，中间的大方格即为计数室。
• 计数室的刻度有两种规格：一种是一个大方格分成 16 个中方格，而每个中方格又分成 25 个小方格；另一种是一个大方格分成 25 个中方格，而每个中方格又分成 16 个小方格。但无论哪种规格，每个大方格都由 400 个小方格组成。
• 每个大方格边长为 1 mm，则每个大方格的面积为 1 mm²，盖上盖玻片后，盖玻片与载玻片之间的高度为 0.1 mm，所以计数室的容积为 0.1 mm³。

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第13页：直接计数实验器材

菌种

啤酒酵母

仪器

显微镜、血球计数板

第14页：血球计数板计数步骤与公式

1. 制备适当浓度的菌悬液
2. 取洁净的血球计数板，盖上盖玻片
3. 加样品，静置 5 分钟
4. 用高倍镜计数

设 5 个中方格的总菌数为 A，菌液稀释倍数为 B：

• 计数板为 25 个中方格（本次试验）：1 mL 菌液的总菌数 = A/5 × 25 × 10⁴ × B
• 计数板为 16 个中方格：1 mL 菌液的总菌数 = A/5 × 16 × 10⁴ × B

第15页：血球计数板使用注意事项

• 取样时先要摇匀菌液；
• 加样时计数室不可有气泡；
• 一般样品稀释度要求每小格内约有 5–10 个菌体为宜；
• 每个计数室选 5 个中格（4 个角和中央）计数；
• 位于格线上的菌体一般数上不数下，数右不数左；
• 若芽体大小达到母细胞的一半，则作为两个菌体计数。
• 血球计数板使用完毕，用水冲洗干净，切勿用硬物洗刷，以免损坏网格刻度；洗净后自行晾干或吹风机吹干。

第16页：血球计数板计数结果记录表

测定你所制备的样品的含菌量。A 表示五个中方格中的总菌数；B 表示菌液稀释倍数。

本页为实验记录表，原课件为空白待填表格，需按实际观察结果填写。

第17页：大小测定与计数思考题

1. 为什么更换不同放大倍数的目镜或物镜时，必须用镜台测微尺重新对目镜测微尺进行校正？
2. 在不改变目镜和目镜测微尺，而改用不同放大倍数的物镜来测定同一细菌的大小时，其测定结果是否相同？为什么？
3. 结合你的实验体会，总结哪些因素会造成血细胞计数板的计数误差，应如何避免？

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