07 实验七 微生物的紫外诱变.pptx

第1页：实验七 微生物的紫外诱变

实验七 微生物的紫外诱变

第2页：紫外诱变的目的要求

一、目的要求

• 掌握紫外线诱发微生物突变的基本原理。
• 掌握选育高产突变型菌株的方法。

第3页：紫外诱变的基本原理

二、基本原理

• 紫外线是一种最常用的物理诱变因素，它的主要作用是使 DNA 双链之间或同一条链上两个相邻的胸腺嘧啶形成二聚体，阻碍双链的分开、复制和碱基的正常配对，从而引起突变。
• 紫外线照射引起的 DNA 损伤，可由光复活酶的作用进行修复，使胸腺嘧啶二聚体解开恢复原状。
• 为了避免光复活，用紫外线照射处理时以及处理后的操作应在红光下进行，并将照射处理后的微生物放在暗处培养。

第4页：紫外诱变实验器材

菌株

枯草芽孢杆菌

培养基

淀粉培养基

溶液或试剂

碘液、无菌生理盐水、盛 4.5 mL 无菌水的试管

仪器或其他用具

1 mL 无菌吸管、玻璃涂布棒、血细胞计数板、显微镜、紫外灯（15 W）、磁力搅拌器、台式离心机、振荡混合器等

第5页：菌悬液的制备

四、操作步骤

制备菌悬液（老师完成）：取枯草芽孢杆菌 48 h 斜面培养物 4–5 支 → 用 10 mL 无菌生理盐水洗下菌苔 → 倒入无菌大试管 → 振荡 30 s，打散菌块 → 3000 r/min 离心 10 min → 弃上清液 → 用无菌生理盐水洗涤菌体 2–3 次 → 制成菌悬液 → 用显微镜直接计数法调整细胞浓度至 10⁸ 个/mL。

制作淀粉琼脂培养基平板。

第6页：紫外线处理操作

紫外线处理：

• 打开紫外灯预热 20 min。
• 各取 3 mL 菌悬液，分别加入 2 套 6 cm 无菌平皿中，并放入一根无菌磁力棒。
• 将平皿置于磁力搅拌器上，打开皿盖，在距离 30 cm、15 W 的紫外灯下分别搅拌照射 1 min 和 3 min；照射后盖上皿盖，关闭紫外灯。
• 稀释：把照射过的菌悬液用无菌水稀释成 10⁻¹–10⁻⁶。
• 涂平板：取 10⁻⁴、10⁻⁵、10⁻⁶ 稀释液和未经照射的稀释液（对照）各 0.1 mL 涂平板，重复三个平板。
• 培养：用黑布或纸包好，37 ℃ 培养 48 h。

第7页：存活率与致死率的计算

分别计算紫外线处理 1 min 和 3 min 后的存活率和致死率：

• 存活率（%）＝
• 致死率（%）＝

原文两个计算公式后未提取得出具体算式，此处按原课件标题保留，建议对照原课件图片补充公式。

第8页：诱变效应观察与HC比值

观察诱变效应：

• 选取 cfu 数在 5–6 个左右的处理后涂布的平板观察诱变效应。
• 分别向平板内加碘液数滴，在菌落周围出现透明圈。
• 分别测量透明圈直径与菌落直径并计算其比值（HC 比值）。
• 选取 HC 比值大的菌落转接到试管斜面上培养，可用于复筛。

第9页：紫外诱变注意事项

五、注意事项

• 紫外线照射计时从开盖起，加盖止。
• 先开磁力搅拌器，再开盖照射，使菌悬液中的细胞接受均等照射。
• 从紫外线照射处理开始，直到涂布完平板的所有操作步骤都需在红光下进行。

第10页：紫外诱变存活率记录表

六、实验结果：观察诱变效应，计算存活率、致死率、HC 比值。

本页为实验记录表，原课件为空白待填表格，需按实际观察结果填写。

第11页：紫外诱变HC比值记录表

菌落 HC 比值记录：分别测量透明圈直径与菌落直径，计算其比值。

本页为实验记录表，原课件为空白待填表格，需按实际观察结果填写。

第12页：紫外诱变思考题

七、思考题

1. 用紫外线进行诱变时，为什么要打开皿盖？为什么要在红光下操作，暗环境下培养？
2. 分析你的实验结果：①是否获得了比对照组产淀粉酶更高的突变株？试分析其可能的原因。②从你的实验结果中，说明致死率与诱变效应的相关性。