30 实验十一　水的微生物学检查.ppt

第1页：实验十一 水的微生物学检查封面

实验十一水的微生物学检查

第2页：实验目的了解并掌握细菌总数的测定方法

实验目的

• 了解并掌握细菌总数的测定方法
• 学习检测水中大肠菌群的原理和方法
• 了解大肠菌群数量与水质状况的关系
• 了解大肠菌群的数量在饮水中的重要性。

第3页：实验原理饮用水是否合乎标准

实验原理饮用水是否合乎标准，通常通过水中细菌总数和大肠菌群数来确定。细菌总数是指1毫升水样在普通琼脂培养基中，37℃24小时培养后所生长的菌落数。一般规定，1毫升自来水的总菌数不得超过100个。

第4页：如果水源被粪便污染

如果水源被粪便污染，则有可能也被肠道病原菌污染而引起伤寒、痢疾、霍乱等肠道病的流行，但肠道病原菌在水中数量较少，又易变异与死亡，故从水中特别是自来水中分离出病原菌，常常有困难。而大肠菌群是肠道好氧菌中最普遍和数量最多的一种，所以常将其作为粪便污染的标志，即根据水中大肠菌群的数目来判断水源是否被粪便所污染，并间接推测水源受肠道病原菌污染的可能性。

一般规定每1000毫升自来水中大肠菌群不超过三个。

第5页：实验材料普通琼脂培养基

实验材料

• 普通琼脂培养基；乳糖蛋白胨发酵管；3倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管，复红亚硫酸钠培养基。
• 无菌空瓶；灭菌水；灭菌培养皿、吸管、试管。
• 自来水、池水、河水或湖水

第6页：实验步骤细菌总数测定1）自来水吸取1ml

实验步骤细菌总数测定1）自来水吸取1ml水样与平皿内冷却至45℃的培养基混匀，于37℃下培养24h计数，共两皿。同时做不接水样的空白皿对照试验。2）池水、河水或湖水采用平板菌落计数法：一般中等污秽水样，取10－1、10－2、10－3三个稀释度，污秽严重的取10－2、10－3、10－4三个稀释度。

最后三个稀释度的稀释水样重复上述自来水的细菌测定试验。

第7页：菌落计数方法计算相同稀释度的平均菌落数有

菌落计数方法（1）计算相同稀释度的平均菌落数有较大片菌苔生长时，弃用；以无片菌苔生长的平皿计数。若片菌苔大小不到培养皿的一半，其余一半分布均匀，将此一半计数×2（2）选择平均菌落数在30～300之间的平板只有一个符合此范围时，以该平均菌落数乘稀释倍数。

有两个在30～300间时，按两者菌落总数比值决定：比值小于2，取平均；比值大于2，取较小的菌落总数。（3）所有菌落数均大于300，取稀释度最高的平均菌落数乘稀释倍数。（4）所有菌落数均小于30，取稀释度最低的平均菌落数乘稀释倍数。

（5）所有菌落数均不在30～300之间，以最接近30或300的平均菌落数乘稀释倍数。

第8页：

第9页：大肠菌群检查－－－滤膜法过滤水样用无菌镊

大肠菌群检查－－－滤膜法过滤水样用无菌镊子夹取灭菌滤膜边缘部分，将粗糙面向上，帖放在已灭菌的滤床上、，固定好滤器，将100mL水浴(如水样含菌数较多，可减少过滤水样量，或将水样稀释)注入滤器中，打开滤器阀门，在负0.5大气压下抽滤。

第10页：培养水样滤完后

培养水样滤完后，再抽气约5s，关上滤器阀门，取下滤器，用灭菌镊子夹取滤膜边缘部分，移放在品红亚硫酸钠培养基(36.1.3.1)上，滤膜截留细菌面向上，滤膜应与培养基完全贴紧，两者间不得留有气泡，然后将平皿倒置，放入37℃恒温箱内培养22～24h。

第11页：观察结果挑出符合下列特征

• 观察结果挑出符合下列特征菌落进行革兰氏染色、镜检。紫红色，具有金属光泽的菌落。深红色，不带或略带金属光泽的菌落淡红色，中心色较深的菌落。
• 凡革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌，再接种乳糖蛋白胨培养基液，于37℃培养24h，有产酸产气者，则判定为总大肠菌群阳性。

第12页：计算滤膜上生长的总大肠菌群数水中总大肠菌

计算滤膜上生长的总大肠菌群数水中总大肠菌群数/个L-1＝滤膜生长的菌落数×1000÷过滤水样量（滤膜上菌落数以20～60个/片为适宜）

第13页：实验结果将水中总细菌

实验结果

• 将水中总细菌数量计算出来
• 将自来水中总大肠菌群数量计算出来

第14页：问题与讨论检查饮用水中的大肠菌群有何意义

问题与讨论检查饮用水中的大肠菌群有何意义？