08 实训5．培养基的制备与灭菌.ppt

第1页：实训五培养基的制备与灭菌封面

实训五培养基的制备与灭菌微生物与发酵工艺

第2页：实训五实验目的

一、实验目的1.学会一般培养基的制备原理、方法。2.掌握培养基及器皿的灭菌方法。

第3页：培养基的概念与作用

培养基是根据微生物生长繁殖的营养需要，用人工方法配制而成的基质,其中含有水、碳源、氮源、无机盐及各种生长因子。培养基可为微生物的生长提供能源、组成菌体的原料，调节代谢活动。二、实验原理

第4页：不同微生物的常用培养基

不同微生物对营养物质的要求各不相同。因此，配制培养基要根据微生物的营养特点。一般，培养细菌常用牛肉膏蛋白胨培养基，培养放线菌常用淀粉培养基，培养霉菌常用马铃薯培养基，培养酵母菌常用麦芽汁培养基(或麦芽糖、蛋白胨培养基)。二、实验原理

第5页：培养基pH的调节

培养基除了要满足微生物生长所要求的各种营养物质外，还应保证微生物所需要的其他生活条件，如适宜的酸碱度，渗透压等，因此，根据不同种类微生物的要求，应将培养基调节到一定的pH范围，如细菌培养基中性偏碱，放线菌培养基偏碱，霉菌、酵母菌培养基偏酸。二、实验原理

第6页：固体半固体与液体培养基

根据研究的不同，可以将培养基制成固体、半固体和液体三种形式，固体培养基的成分与液体培养基相同，仅在液体培养基中加入凝固剂作支持物，通常加入1.5～2.0％的琼脂，半固体培养基加入0.3～0.5％琼脂作支持物，有时也可用明胶或硅胶作为凝固剂。二、实验原理

第7页：实训五材料与用具

1.材料马铃薯、蔗糖、牛肉膏、蛋白胨、可溶性淀粉、琼脂、K2HP04、MgS04·7H2O、FeS04·7H20、NaOH、HCl。2.用具试管、三角烧瓶、漏斗、量筒、吸管、烧杯、纱布、棉花、玻璃棒、pH试纸、铁架台、漏斗架、止水夹、电炉、台秤、硫酸纸、药匙、牛皮纸、线绳、标签纸、剪刀、解剖刀、镊子、白瓷盘、(比色盘)铁丝筐。

第8页：培养基的称量与溶解

1.培养基的制作方法(1)称量按照培养基的配方，准确称取各成分于烧杯中。(2)溶解、加热向上述烧杯中加入所需要水量，搅动，然后加热使其溶解。用马铃薯、豆芽等配制的培养基，须先将马铃薯或豆芽按其配方的浓度加热煮沸0.5h (马铃薯须先削皮)并用纱布过滤，然后加入其他成分继续加热使其溶化，补足水量，如

第9页：调节pH过滤与分装

(3)调节pH值初制备好的培养基往往不能符合所要求的pH值，故需用酸度计，pH试纸或用氢离子浓度比色计来矫正，用0.1mol/L NaOH或lmol/L HCl调至合适的范围。(4)过滤用滤纸或双层纱布(中间夹一层脱脂棉花)趁热过滤。(5)分装根据不同的需要，可将制好的培养基分装入试管或三角烧瓶内，管(瓶)口塞上棉塞(或

第10页：培养基的分装

培养基的分装

第11页：分装量的要求

• ①液体培养基：分装高度以试管高度的1/4左右为宜。
• ②固体培养基：分装试管，每管装液量为管高的1/5，灭菌后制成斜面。分装三角烧瓶的量以不超过1/2为宜；倒平板的培养基每管装15～20mL。
• ③半固体培养基：分装试管一般以管高度1/3为宜，灭菌后制成斜面或垂直待凝成半固体深层琼脂。四、实验方法

第12页：斜面的摆法

斜面的摆法

第13页：培养基的灭菌条件

(6)灭菌高压蒸汽灭菌，一般培养基0.1MPa，20-30min，含糖培养基为0.05MPa，30min。四、实验方法

第14页：牛肉膏蛋白胨培养基配方

牛肉膏蛋白胨培养基（W/V，培养细菌用）配方如下。

第15页：马铃薯PDA培养基配方

马铃薯葡萄糖（PDA）培养基（W/V，培养霉菌用）配方如下。马铃薯汁制备：将马铃薯去皮称量，切成小块，加水煮沸30 min，纱布过滤，补足水量。

第16页：高氏1号培养基配方

高氏1号培养基（W/V，培养放线菌用）配方如下。

配制时先用少量蒸馏水将可溶性淀粉调成糊状，在沸水浴中搅拌煮融，再加入其他成分并补足水量，0.1 MPa灭菌20 min。

第17页：培养基制作注意事项（一）

1.加热溶化过程中，要不断搅拌，以免琼脂或其他固体物质粘在烧杯底上烧焦，造成烧杯破裂，加热过程中所蒸发的水分应补足。2.pH值必须按各种不同培养基的要求准确测定。3.所用器皿要洁净，勿用铜质和铁质器皿。保证容器外壁无水。（二）培养基制作注意事项五、实验内容

第18页：培养基制作注意事项（二）

4.分装培养塞时，注意不得使培养基在瓶口或管壁上端沾染，以免引起杂菌污染。5.培养基的灭菌时间和温度，需按照各种培养基的规定进行，以保证杀菌效果和不损失培养基的必要成分，培养基灭菌后，必须放在37ºC温箱培育24h．无菌生长方可使用。五、实验内容

第19页：棉塞的作用与要求

棉塞可过滤空气，防止杂菌侵入并可减缓培养基水分的蒸发，所以正确地制备棉塞是培养基制备中重要的一环。正确的棉塞是形状大小，松紧应与试管(或三角烧瓶)完全适合。过紧时妨碍空气流通，操作不便；过松时，空气会毫无障碍地进入试管(或三角烧瓶)中，达不到过滤杂菌的目的。棉塞过小往往易掉

第20页：棉塞制作

棉塞制作

第21页：试管帽替代棉塞

目前，有条件的实验室已使用.塑料试管帽、金属试管帽、硅胶泡沫塞替代棉塞，此处介绍棉塞的制作，以备不时之需。五、实验内容

第22页：高压蒸汽灭菌操作（一）

• 1.培养基的高压蒸汽灭菌
• ①需灭菌的物品(分装在试管、三角烧瓶中的固、液体培养基)，棉塞、硅胶泡沫塞等用防潮纸包好(防止锅内水汽把棉塞淋湿)，放人灭菌锅内的套筒中。摆放要疏松，不可太挤，否则阻碍蒸汽流通，影响灭菌效果。（四）灭菌五、实验内容

第23页：高压蒸汽灭菌操作（二）

• ②将灭菌锅盖的排气管插入套筒侧壁的凹槽内，关闭灭菌锅盖旋紧螺栓，切勿漏气。
• ③打开放气阀，加热，热蒸汽上升，以排除锅内冷空气，排气约5～10min，关闭放气阀。五、实验内容

第24页：高压蒸汽灭菌操作（三）

• ④关闭放气阀后，整个灭菌锅成为密闭状态，而蒸汽又不断增多，这时压力和温度都上升，当温度升至121ºC，压力达0.1MPa时，保持20～30min，即达到灭菌目的。
• ⑤灭菌完毕，待压力自然降至“0”时，打开放气阀，注意不能打开过早，否则突然降压致使培养基冲腾，使棉塞、硅胶泡沫塞沾污，甚至冲出容器以外。
• ⑥打开灭菌锅盖，取出已灭菌的器皿及培养基。

第25页：干热灭菌法

2.干热灭菌法常用于空玻璃器皿的灭菌，但凡带有橡胶或塑料的物品、液体及固体培养基等，都不能用于干热法灭菌。进行灭菌时，先将要灭菌器皿(培养皿、吸管的包装方法见示范)包好，放入电热烘箱内，调节温度至160～170ºC，维持1～2h(当温度升至80ºC以上切勿打开烤箱，以免引起玻璃器皿破裂和火灾)。灭菌后，当温度降至30～40

第26页：分组实验内容

1.按教师指定的小组，每一小组制一种培养基300mL，其中200ml分装于2～3个锥形瓶中，另外l00mL分装入试管每管5～7mL，灭菌后制成斜面。2.每一小组制备无菌水1瓶(100mL三角烧瓶中加水99mL，内装少许玻璃珠)，制备无菌水试管4支(每支试管加水9mL)灭菌。3.每一小组准备lmL塑料吸嘴5支(湿热蒸汽灭菌)，培养皿12套(

第27页：实训五实验报告

写出你所制备的培养基的配方，并分析其中所含物质对微生物生命活动所起的作用。六、实验报告

第28页：