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43 Lab-1培养基的配制与灭菌.ppt

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本课件为《现代生物学实验》的实验一培养基的配制与灭菌部分,重点展开实验一培养基的配制与灭菌一教学要求通过配等内容,并说明目的要求、原理、试剂器材、操作步骤与注意事项,便于课前预习和实验现场对照操作。

实验一培养基的配制与灭菌一教学要求通过配制牛,实验一培养基的配制与灭菌一教学要求、通过配制牛肉膏蛋白胨等培养基,掌握配制培养基的一般方法和步骤
实验一培养基的配制与灭菌 2Sterilization–destr,Action-proteindenaturation
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第1页:实验一培养基的配制与灭菌一教学要求通过配制牛

  • 实验一培养基的配制与灭菌一教学要求
  • 通过配制牛肉膏蛋白胨等培养基,掌握配制培养基的一般方法和步骤。
  • 了解采用的灭菌方法和原理,掌握高压蒸汽灭菌技术。二实验原理1、Media Types
  • SolidMedia,semi-solidMedia, liquidMedia.
  • EnrichedMedia, SelectiveMedia, DifferentialMedia,combination selective anddifferential media

第2页:2Sterilization–destr

  • 2 Sterilization–destruction of all forms of microbial life,including endospores.Physical Methods—Moist heatAutoclaving
  • Action-protein denaturation.
  • Very effective method of sterilization; atabout 15 psi(Ib/in2)of pressure (121ºC[ 250ºF]), all vegetative cells and theirendospores are killed in about 15 min.

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第5页:—DryheatDirectflaming

  • —Dry heatDirect flaming
  • example: Inoculation loopHot-air sterilization
  • Baking in oven
  • Very effective method of sterilization,but requires temperature of 170ºC[ 340ºF]for about 2 hr.

第6页:—Filtration

  • —Filtration
  • –Separation of bacteria from suspending liquid.
  • –Removes microbes by passage of a liquid orgas through a screen like material. Most filtersconsist of diatomaceous earth, cellulose acetateor nitrocellulose.
  • –0.45
  • m filters removes most bacteria,
  • 0.20
  • m more inclusive, viruses need 0.01
  • m.
  • –Useful for sterilizing liquids (enzymes, vaccines)that are destroyed by heat.

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第8页:三实验材料与器材

  • 三实验材料与器材
  • 培养基:牛肉膏、蛋白胨、琼脂、可溶性淀粉、葡萄糖、孟加拉红、链霉素、1 mol/L NaOH、1mol/L HCl、KNO3、K2HPO4·3H2O MgSO4·7H2OFeSO4·7H2O.
  • 器材:玻璃器皿、天平、pH试纸、灭菌锅等

第9页:四操作步骤称量→溶解→调pH*→

  • 四操作步骤称量→溶解→调pH *→(过滤*)→分装*→加塞*→包扎→高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌灭菌操作步骤
  • 首先将内层灭菌桶取出,再向外层锅内加入适量的水,使水面与三角搁架相平为宜。

第10页:放回灭菌桶,并装入待灭菌物品

  • 放回灭菌桶,并装入待灭菌物品。注意不要装得太挤,以免防碍蒸汽流通而影响灭菌效果。三角烧瓶与试管口端均不要与桶壁接触,以免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞。
  • 加盖,并将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的排气槽内。再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓,使螺栓松紧一致,勿使漏气。
  • 开启电源加热,并同时打开排气阀,使水沸腾以排除锅内的冷空气。待冷空气完全排尽后,关上排气阀,让锅内的温度随蒸汽压力增加而逐渐上升。当锅内压力升到所需压力时,控制热源,维持压力至所需时间。本实验用1.05 kg/ cm2,121.3 ℃,20 min灭菌。

第11页:灭菌所需时间到后,切断电源

  • 灭菌所需时间到后,切断电源,让灭菌锅内温度自然下降,当压力表的压力降至0时,打开排气阀,旋松螺栓,打开盖子,取出灭菌物品。如果压力未降到0时,打开排气阀,就会因锅内压力突然下降,使容器内的培养基由于内外压力不平衡而冲出烧瓶口或试管口,造成棉塞沾染培养基而发生污染。
  • 将取出的灭菌培养基放入37 ℃温箱培养24 h,经检查若无杂菌生长,即可待用。

第12页:五注意事项

  • 五注意事项
  • 培养基分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上,以免沾污棉塞而引起污染。
  • 使用灭菌锅应严格按照操作程序进行。灭菌所需时间到后,要先切断电源,让灭菌锅内温度自然下降,当压力表的压力降至0时,才能打开排气阀。六思考题
  • 在配制培养基的操作过程要注意哪些问题?
  • 高压蒸汽灭菌时,为什么要先将灭菌锅锅内的冷空气完全排尽?

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