页数：15页文件大小：276.5 KB来源： 现代生物学实验ppt课件
本课件为《现代生物学实验》的实验十一蛋白质含量的测定部分，重点展开BCA蛋白质检测流程等内容，并说明目的要求、原理、试剂器材、操作步骤与注意事项，便于课前预习和实验现场对照操作。
实验十一蛋白质含量的测定
一、目的要求1.学习和掌握蛋白质含量测定的原理2.掌握考马斯亮蓝染色法测定蛋白质浓度的操作技术二、原理
基本原理：碱性条件下，蛋白将Cu2+还原为Cu+，Cu+与BCA试剂形成紫颜色的络合物，测定其在562nm处的吸收值，并与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。
BCA蛋白质检测流程：
Coomassie Dye-Based蛋白质定量PROTEIN+Amax= 595nmBLUEAcidCoomassie G-250Protein-DyeComplexOCH2CH3NHCCH3CH3NCH2SO3-CH3CH2NCH2CH2CH3SO3Na+
标准蛋白曲线加样表：下表依据源文件文字按原课件列序还原，供对照操作与记录结果使用。
| 试管编号 | 标准蛋白含量（μg） | 标准蛋白溶液（mL） | 待测蛋白质溶液（mL） | 蒸馏水（mL） | 考马斯亮蓝试剂（mL） | OD595nm |
|---|---|---|---|---|---|---|
| 0 | 0 | 0 | — | 0.1 | 2.5 | 待测定 |
| 1 | 10 | 0.01 | — | 0.09 | 2.5 | 待测定 |
| 2 | 20 | 0.02 | — | 0.08 | 2.5 | 待测定 |
| 3 | 30 | 0.03 | — | 0.07 | 2.5 | 待测定 |
| 4 | 40 | 0.04 | — | 0.06 | 2.5 | 待测定 |
| 5 | 50 | 0.05 | — | 0.05 | 2.5 | 待测定 |
| 6 | 60 | 0.06 | — | 0.04 | 2.5 | 待测定 |
说明：源文件此表为压平文本（无分隔符），上表按原课件列序推断还原，建议对照原课件图片核对后使用。
2.未知样品蛋白质浓度的测定测定方法同上，取合适的未知样品体积，使其测定值在标准曲线的直线范围内，根据所测定的OD595nm值，在标准曲线上查出其相当于标准蛋白的量，从而计算出未知样品的蛋白质浓度(mg/mL)。
四.注意事项（1）如果测定要求很严格，可以在试剂加入后的5-20min内测定光吸收，因为再这段时间内颜色最稳定。（2）测定中，蛋白-染料复合物会有少部分吸附于比色杯壁上，但此复合物的吸附量可以忽略。测定完后可用乙醇将蓝色的比色杯洗干净。
五．思考题(1)与其它测定蛋白质浓度的方法相比，考马斯亮蓝染色法测定有何优点？
下载地址：{{downurl}}
{{{a}}}
{{#b}}{{{b}}}
{{/b}} {{/title}} {{#nolog}}登陆注册
{{/nolog}} {{#djsx}}点我刷新
{{/djsx}} {{#gocz}} {{/gocz}} {{#ffqr}} {{/ffqr}}