58 lab-1双向琼脂免疫扩散.ppt

第1页：一教学要求

• 一教学要求
• 学习双向琼脂免疫实验原理
• 掌握双向琼脂免疫实验操作方法
• 学习双向琼脂免疫实验结果分析实验一双向琼脂免疫扩散

第2页：二实验原理

• 二实验原理
• 位于凝胶不同小孔中的抗原和抗体，当两者相对扩散时，经一定时间后，若两者相对应，会在琼脂小孔间、两者最恰当的比例处形成白色沉淀线。观察沉淀线的位置、数量、形状以及对比各沉淀线之间的关系，可对抗原或抗体进行定性分析。
• 此方法可应用于以下方面：（1）抗原或抗体的纯度鉴定。也可对抗体效价进行初步估算。（2）用已知抗血清（或抗原）检测未知抗原（或抗体）（3）抗原或抗体相对分子量的估计
• 双向琼脂扩散常见孔型有三孔型、双孔型、双排孔型、梅花孔型（见图1）

第3页：图1双向免疫琼脂扩散孔型

• 图1双向免疫琼脂扩散孔型
• 三孔型双孔型梅花孔型双排孔型

第4页：三材料与器材（略）

三材料与器材（略）

第5页：四操作步骤1.制板

四操作步骤1.制板：用移液管吸取热琼脂3.5ml，平铺于载玻片上。2.打孔：待琼脂凝固后，按图1梅花孔型打孔，孔径3mm,中心孔与边缘孔距离10mm。用针挑去孔内琼脂。3.用微量加样器将羊抗人IgG抗体及羊抗人IgM（1：30，v/v）各5ul加入中间孔内。4.加样：将待检血清用生理盐水稀释成1：2、1：6、1：10以及空白（生理盐水）加入周围各孔中，每孔10ul。5.将玻璃片置于湿盒内，于37℃温育，隔天观察结果。

第6页：五注意事项1.用琼脂浇载玻片时

五注意事项1.用琼脂浇载玻片时，载玻片必须保持水平位置。2.每个孔的加样量应保持一致，既使每个孔都被加满，又必须不使样品溢出孔外。3.打孔时注意不要将孔弄破。

第7页：六思考题1.画出个孔间的沉淀线位置

六思考题1.画出个孔间的沉淀线位置、数量、形态，并予以简单的说明2.对实验结果进行分析