61 lab-4免疫电泳.ppt

第1页：一教学要求

• 一教学要求
• 学习免疫电泳技术操作
• 掌握免疫电泳实验结果的分析方法实验四免疫电泳

第2页：免疫电泳为区带电泳与双向免疫扩散的结合

免疫电泳为区带电泳与双向免疫扩散的结合。先利用区带电泳技术将不同电荷和分子量的蛋白抗原在琼脂内分离，然后在与电泳方向平行的方向上开槽，加入抗血清。37℃下使两者扩散，各区带蛋白在相应的位置与抗体反应形成弧形沉淀线。免疫电泳原理图解见图1。二实验原理

第3页：图1免疫电泳原理图解

图1免疫电泳原理图解

第4页：三材料与器材（略）

三材料与器材（略）

第5页：（1）吸取4mL琼脂溶液

（1）吸取4mL琼脂溶液，均匀涂布到载玻片上，注意要马上用吸管尖把琼脂表面整平，若有气泡立刻除去。（2）取打孔器在图示的位置打孔（见图2），此二孔位置要对称。（3）用微量加样器加入10uL的羊抗人IgG和羊抗人IgM抗体，不要溢出。（4）把载玻片放到电泳槽中，倒入巴比妥缓冲液，琼脂板两端用滤纸与缓冲液搭桥，接通电源，电压10-12v/cm电泳1-2h。（5）样品中有蓝色染料，当蓝色接近另一端时，终止电泳，小心取出载玻片。四操作步骤

第6页：（6）用刀片在胶体的中央

（6）用刀片在胶体的中央，划两道平行线。刀刻要深及底部，两道平行线间隔不可大于3mm。用大头针挑去琼脂。（7）加入人全血清，放入湿盒中，37℃下扩散24h。4mm2mm图2胶板打孔及挖槽示意图

第7页：五注意事项（1）浇载玻片时

五注意事项（1）浇载玻片时，玻片应保持水平，琼脂面要尽量铺平（2）加样应一次加满，并防止样品溢出孔外（3）电泳过程中注意防止发热，以免影响电泳结果

第8页：六思考题（1）画出沉淀线的形态

六思考题（1）画出沉淀线的形态、数量和位置，并予以简要说明。（2）与相关的免疫学试验进行比较，探讨免疫电泳的主要优点。