103 模块二、真核生物分子生物学实验.ppt

第1页：实验六真核细胞基因组提取

实验六真核细胞基因组提取

第2页：一、实验目的

• 一.实验目的及背景
• 高等动物，高等植物的基因组相当宠大，如人类细胞基因组由30亿个碱基对组成，果蝇基因组有１．４×１０８个碱基对，水稻基因组有１．４×１０９个碱基对。真核细胞基因组中，约１万－１．５万个可表达的结构基因，其它大量存在的是调控序列和内含子序列。可以说某特定物种的基因组，包含了该物种生长，发育，繁殖等各项生理活动的几乎全部信息量，因而对真核细胞基因组的结构，组成，以及表达调控的研究是至关重要的，而研究的起点就是要获得纯度高－－不含蛋白质、糖类、酚、氯仿等污染；得率好－－以便有足够量用于分析；基因组相对完整－－断裂的基因组以便用于以后ＰＣＲ分析，RFLP分析，基因文库的构建，基因探测等的研究。
• 真核细胞基因组在提取过程中一般有以下几步，首先是机械法破细胞抽提；然后去除蛋白质，糖类等细胞内杂质污染；最后纯化出ＤＮＡ，由于真核细胞基因组较大，在操作中应注意动作轻柔，且在低温下进行，以最大限度地减少机械和化学作用对ＤＮＡ的剪切，从而获得相对完整的ＤＮＡ。

第3页：二．实验试剂及材料

• 二．实验试剂及材料
• 材料：幼嫩的植物材料0.５ｇ左右。
• 试剂：液氮
• CTAB抽提缓冲液：2%CTAB(cetyltrimethylammoniumbromide,十六烷基三甲基溴化铵)，1%β-巯基乙醇1.4mol/LNacl,20mmol/L,EDTA,100mmol/L,Tris-Hcl,pH8.0
• 3MNaAC
• 50mMTris-HClpH8.0
• 20mMEDTA
• 氯仿：异戊醇（２４：１）
• 异丙醇７０％乙醇ＴＥbuffer

第4页：三．实验方法

• 三．实验方法
• 1．取0.5g植物材料，双蒸水洗净，并用滤纸吸干。
• 2．植物材料剪成１cm左右碎片，放入预冷的瓷研钵中。
• 3．加入液氮速冷，研磨成细粉（越细越好）。
• 4．在5ml离心管中加入抽提缓冲液2.5ml，６０℃保温1小时。
• 5.15000rpm，离心10分钟。上清转入另一个新的离心管中。
• 6．加入等体积氯仿：异戊醇（24:1），混匀抽提至水乳胶融状。
• 7.15000rpm，离心10分钟。

第5页：8．上清转入另一个新的离心管中

• 8．上清转入另一个新的离心管中。
• 9．加入2/3倍体积预冷异丙醇，－２０℃保温30min—1hr，缓缓混匀ＤＮＡ成絮状折出。
• 10．15000rpm，离心１0分钟，弃上清。
• 11．ＤＮＡ沉淀用７０％乙醇洗２次。
• 12．加入４００μlTEbuffer溶解DNA。

第6页：四、实验结果

• 四．结果分析
• 1.为了获得较为完整的基因组ＤＮＡ在实验中应注意什么问题？