20 实验十五、DNA的定量测定.ppt

第1页：实验十五DNA的定量测定

实验十五DNA的定量测定

第2页：一、实验目的

一、实验目的学习和掌握二苯胺法测定DNA含量的方法。二、原理核酸含量的测定方法包括紫外吸收法、定磷法和分别针对DNA和RNA的颜色反应方法。本实验采用针对DNA的二苯胺法测DNA的含量。在酸性溶液中，DNA与二苯胺共热生成蓝色化合物，该物质在595nm有最大吸收，在40～400mg/mL范围内其峰值与DNA含量成正比。DNA +100℃冰醋酸，少量硫酸蓝色物

第3页：三、试剂与器材

三、试剂和器材1.试剂200mg/mLDNA标准溶液、二苯胺试剂2.器材可见分光光度计、恒温水浴锅、分析天平

四、操作步骤1.标准曲线的制作取12只试管分成6组，按下表操作。取2管的平均值，以DNA浓度为横坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线。

第4页：543210试管

543210试管2.01.61.20.80.40标准DNA/mL00.40.81.21.62蒸馏水/mL444444二苯胺试剂/mL60℃恒温水浴中保温1h，冷却，在595nm波长处比色光密度值

第5页：样品的测定取待测样品2mL

2.样品的测定取待测样品2mL，加入二苯胺溶液4mL，摇匀，60℃保温1h，然后在595nm波长出测定光密度值。根据测得的光密度值，从标准曲线上查得相应的DNA的ug数，按下式计算待测样品的DNA的含量。DNA%＝五、注意事项其他糖及糖的衍生物、芳香醛、蛋白质等都对实验有干扰，测定前应尽可能除去。待测样品中测得的DNA的mg数待测样品液中样品的mg数X 100

第6页：六、思考题

六、思考题1、DNA含量测定的方法有哪些？各有何优缺点？2、简述二苯胺法测DNA的基本原理。